高职院校对农村富余劳动力转移培训的作用及模式

农村富余劳动力就地转移已成为当前农村劳动力转移的主要形式,劳动者素质偏低是农村富余劳动力就地转移的瓶颈.本研究系统分析了我国农村劳动力转移对高职教育的现实需求以及高职院校为农村劳动力转移服务而开展培训的基础和优势,以江苏畜牧兽医职业技术学院为例,探讨农村劳动力转移培训的模式.     

定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒游离受体夹心ELISA方法的建立与应用

为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)游离受体定量检测方法,本试验用表达猪唾液酸黏附素(Sn)游离受体的重组腺病毒rAd-Sn4D-Fc感染PK-15细胞,以细胞培养上清纯化的Sn4D-Fc游离受体作为标准抗原,鼠抗猪Sn免疫血清为一抗,生物素标记兔抗猪Sn多克隆抗体为二抗,建立定量检测Sn4D-Fc游离受体的双抗体夹心ELISA方法;用rAd-Sn4D-Fc注射仔猪,定期采集血清进行游离受体检测。结果显示,纯化Sn4D-Fc标准抗原的纯度为94.3%,能被Sn免疫血清识别;一抗的最佳工作浓度为5μg/mL蛋白,二抗的最佳稀释度为1∶4 000,夹心ELISA检测标准抗原的灵敏度为0.4ng/mL,对照抗原无交叉反应;夹心ELISA能从重组腺病毒注射猪血清中检测到Sn4D-Fc游离受体,最高表达量为6.54ng/mL,持续时间为15d。研究结果表明,建立的双抗体夹心ELISA可用于PRRSV游离受体的体内外定量检测。     

冷冻保存前平衡温度对猪精子结构的影响

研究冷冻保存前平衡温度对精子结构的影响,为提高猪精子冷冻效果提供参考。新鲜猪精液(Ⅰ组)稀释后于17℃过夜保存(Ⅱ组),然后于冷冻Ⅰ液中4℃平衡1.5h(Ⅲ组),再加入预冷的冷冻Ⅱ液于4℃平衡45min(Ⅳ组)。通过精子形态正常率及活力检测,吖啶橙(AO)染色检测精子DNA完整性,碘化丙啶(PI)染色检测精子头部质膜完整性,低渗肿胀试验(HOS)检测精子尾部质膜完整性,异硫氰荧光素标记的花生凝集素(FITC-PNA)染色检测精子顶体完整性,并用扫描电镜(SEM)观察精子结构,评价冷冻保存前平衡温度对猪精子结构的影响。结果表明,与新鲜精液相比,Ⅱ组精液的精子DNA完整性、质膜完整性、顶体完整性等精子结构检测指标所受影响无统计学意义(P0.05);Ⅲ组和Ⅳ组的精子结构检测指标明显受到影响(P0.05),但Ⅲ组和Ⅳ组间无显著差异(P0.05)。扫描电镜检测结果表明,17℃过夜保存精子未见异常,头、颈、尾结构完整,顶体完整、光滑;Ⅲ组精子头部质膜及头颈结合部有轻微损伤;Ⅳ组精子尾部和头颈结合部有不同程度的断裂。冷冻前从17℃降低至4℃及4℃平衡对猪精子结构有一定程度的损伤。     

特异性靶向犬细小病毒融合DNA疫苗的构建及免疫效果的研究

研究旨在构建特异性靶向犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）融合DNA疫苗,探讨其诱导机体产生免疫应答的效果。试验用重组技术构建了含细胞毒性T淋巴细胞抗原-4胞外区（CTLA-4₁₂₅）与犬细小病毒VP2的主要抗原表位区域（VP2₂₂₈）融合表达质粒pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈,同时构建了不含CTLA-4₁₂₅的pVAX1-VP2₂₂₈,体外转染COS-7细胞,Western blotting检测其表达产物;将pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈、pVAX1-VP2₂₂₈分别免疫小鼠,免疫后进行抗体水平测定和抗体亚型分析;通过淋巴细胞增殖试验和ELISA分别检测淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素表达水平。结果显示成功构建了pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈和pVAX1-VP2₂₂₈,并能在COS-7细胞中正确表达;抗体检测结果显示pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈免疫组抗体水平显著高于pVAX1-VP2₂₂₈免疫组（P<0.05）;淋巴细胞增殖试验显示pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈免疫组的刺激指数显著高于pVAX1-VP2₂₂₈免疫组（P<0.05）;γ-干扰素表达水平测定显示pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈免疫组极显著高于pVAX1-VP2₂₂₈免疫组（P<0.01）。结果表明,CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈融合DNA能有效增强动物对VP2₂₂₈抗原的免疫应答,为进一步研究融合DNA疫苗特异性的靶向递呈机制奠定基础。     

鸭甲型肝炎病毒1型与3型双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

旨在建立一种针对鸭甲肝病毒1型（DHAV-1）和鸭甲肝病毒3型（DHAV-3）的高效快速、高灵敏度和高特异性的双重TaqMan实时荧光定量PCR （q-PCR）检测方法并应用于临床疑似样品检测。根据DHAV-1和DHAV-3的VP1基因保守区域,分别设计合成了2对特异性引物和探针,在此基础上建立并优化了双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示：优化后标准曲线的相关系数（R²）均在0.999以上,扩增效率（E）在105%~110%,其组内变异系数（i-CV）与组间变异系数（c-CV）均在0.77%以下。运用双重q-PCR方法对不同稀释度的混合质粒与病毒核酸进行检测,结果表明,建立的双重TaqMan q-PCR特异性高;同时检测DHAV-1和DHAV-3的灵敏度均可达10个拷贝,分别是常规PCR方法的1 000倍和100倍。对40份来自苏中、苏北地区的疑似鸭肝炎病毒感染的鸭组织病料进行检测,结果表明,q-PCR方法检出36份阳性病料,阳性率为90%;而常规PCR方法未能检出高Ct值的样品,阳性率为72.5%（29份阳性病料）。建立的双重TaqManq-PCR检测方法为DHAV-1与DHAV-3的临床样品检测提供了高效、灵敏、特异的工具,推动了临床分子流行病学调查及病毒定量分析等研究。     

鸭坦布苏病毒、鸭肠炎病毒和番鸭细小病毒TaqMan三重实时荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用

本研究旨在建立一种快速、敏感和高特异性检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肠炎病毒(DEV)和番鸭细小病毒(MDPV)的TaqMan三重实时荧光定量PCR(q-PCR)的诊断方法并应用于临床疑似样品检测。根据DTMUV的E基因、DEV的UL2基因和MDPV的VP3基因保守区域,分别设计合成了3对特异性引物和探针,在建立单重q-PCR方法的基础上建立了三重q-PCR方法。运用三重q-PCR方法对198份来自江苏和安徽的鸭组织疑似病料进行检测,结果表明,建立的TaqMan三重q-PCR可同时检测这3种病毒,检测灵敏度至少达100个拷贝,相关系数(R~2)均在0.99以上,扩增效率为90%～110%。同时,该方法对H9亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)、鸭甲肝病毒Ⅰ型(DHAV-1)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、新城疫病毒(NDV)、鹅细小病毒(GPV)的检测均为阴性,表明该方法具备特异性强、灵敏度高、重复性好和快速等优点。与常规PCR检测方法相比,三重q-PCR方法灵敏度大约高100倍。临床疑似样品检测结果表明DTMUV的检出率最高,3种病毒混合感染亦常见。建立的TaqMan三重q-PCR检测方法为DTMUV、DEV和MDPV的临床样品检测提供了快速、有效、特异和灵敏的工具,也为临床分子流行病学调查及定量分析奠定了基础。     

一例鸡新城疫与大肠杆菌病混合感染的诊断

2010年5月份解剖了泰州某鸡场送检发病鸡、病死鸡9只,发现6只均出现以肝周炎、气囊炎、肌胃角质层下有点状或片状出血,腺胃乳头、直肠和泄殖腔出血,气管喉头有大量粘液为主要病理变化,采集病料进行细菌和病毒分离和鉴定。细菌分离试验结果显示其生长特点、形态特征、生化试验均符合大肠杆菌的特点;同时将处理好的病料接种9日龄非免疫鸡胚,做HA、HI试验,结果显示病毒的血凝特性能被抗新城疫病毒阳性血清所抑制,表明从病料中分离出了新城疫病毒。由此可断定,该鸡群混合感染了新城疫病毒和大肠杆菌。     

鹅星状病毒Ⅰ型荧光定量PCR检测方法的建立及应用

本研究根据鹅Ⅰ型星状病毒(GAstV-1)的保守基因序列设计一对特异性引物和探针,建立并优化荧光定量PCR检测方法,并分别进行了特异性、敏感性、重复性进行了试验,且采用田间样品进行验证。结果显示,本研究建立的检测方法与新城疫病毒(NDV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、禽流感病毒AIV(H9N2)、鹅细小病毒(GPV)、鹅圆环病毒(Go CV)、水禽大肠杆菌(E. coli)、鸭疫里默氏杆菌(RA)均无交叉反应;对重组质粒标准品的检测限为1.0×10¹ copies/μL,组内和组间的变异系数均≤1.00%。13份田间临床样品检测结果显示,本研究建立的荧光定量PCR法阳性检出率为100%。由此可见,本研究建立的GAst V-1荧光定量PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,为鹅星状病毒的检测和监测提供了有效的技术手段方法。     

禽源致病性沙门氏菌耐药表型与耐药基因的分析

为了解江苏苏中地区禽源沙门氏菌耐药现象及耐药基因的存在情况,采用K-B法对22株沙门氏菌分离株进行12种抗菌药物敏感性试验,并通过PCR方法检测了12种耐药基因的存在情况。结果显示,所有菌株对甲氧胺嘧啶、阿米卡星、庆大霉素、萘啶酮酸、诺氟沙星的耐药率均在72.73%～100%之间;存在着5种耐药表型,每个耐药表型均在4重或4重以上,耐药最多菌株可耐受10种药物;扩增出9种耐药基因,与GenBank中的参考序列同源性均在98%以上;耐药表型与耐药基因的存在基本一致,但无绝对相关性。本研究结果表明苏中地区沙门氏菌耐药现象非常严重,且耐药基因广泛存在。     

非洲猪瘟病毒无标签p35蛋白的制备及间接ELISA抗体检测方法的建立

为了进一步提高非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测方法的特异性,本研究构建了类弹性蛋白(ELP)标签与ASFV p35融合表达载体,利用相变循环分离纯化融合蛋白后,用烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEVP)切除ELP标签,制备获得无标签p35蛋白,以此为包被抗原,通过一系列的条件摸索和优化,建立ASFV间接ELISA抗体检测方法。结果显示,ELP-p35融合蛋白的相对分子质量大小约为80 000;制备获得的无标签p35蛋白能够被非洲猪瘟阳性血清所识别;抗原包被最佳质量浓度为2.00μg/ml,待检血清最佳稀释比例为1∶200,二抗最佳稀释比例为1∶10 000,阴性和阳性判定阈值OD₄₅₀为0.171;与口蹄疫病毒(FMDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和伪狂犬病毒(PRV)等阳性血清无交叉反应,特异性好;批内、批间试验结果显示变异系数都小于5.000%,重复性好;可检测400倍稀释的血清,敏感性较高;与商品化检测试剂盒(ING)检测结果的符合率高达100%。结果表明,用本研究制备的A...