视黄酸诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究

体外胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）向生殖细胞分化可用于治疗不育症,同时也为揭示种系世代的分子机制提供最佳模型。试验旨在探讨视黄酸（retinoic acid,RA）诱导鸡胚胎干细胞（chicken embryonic stem cells,cESCs）向雄性生殖细胞（male germ cells,MGCs）分化的作用效果。利用胰蛋白酶消化法从新鲜种蛋X期鸡胚中分离胚胎干细胞,以鸡胚成纤维（chicken embryo fibroblast,CEF）细胞为滋养层,进行体外培养,利用形态法、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）染色和胚胎阶段特异性表面抗原（embryo specific surface antigen 1,SSEA-1）检测对获得的胚胎干细胞进行鉴定。结果表明,获得典型的呈巢状或岛状的cESCs克隆,细胞AKP染色呈蓝紫色,表明其具有较高的内源性AKP活性;SSEA-1鉴定结果呈阳性,显示cESCs克隆具有多能性。采用10^-5 mol/L RA诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化,镜下观察细胞形态变化,分别于诱导第0、2、4、6、8、10天提取细胞总RNA,反转录成cDNA,用于实时荧光定量PCR检测生殖细胞标志基因的表达。结果表明,在此诱导过程中,作为胚胎干细胞标志基因Nanog、Sox2表达量持续显著下降,而生殖细胞特异性基因Dazl、Stra8、c-kit、integrin α6表达量呈持续上升趋势;免疫细胞化学检测可观察到特异基因相关蛋白的阳性克隆。本研究成功分离出cESCs,可体外培养并保持未分化状态及多能性。10^-5 mol/L RA能够促进cESCs向雄性生殖细胞方向分化,可以引起生殖细胞相应基因的表达,为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供参考。     

猪流行性腹泻的诊断与防治措施

猪流行性腹泻是由病毒引起的仔猪和育肥猪的一种急性肠道传染病,其发病率和死亡率都较高。本病于1978年在英国和瑞士暴发后,随后很多国家相继报道,目前呈世界流行,我国于1980年分离了本病毒。     

创新模式实现屠宰全程监管

<正>2008年10月双汇食品有限公司年屠宰160万头生猪屠宰厂入驻济源,2009年8月5日建成投用,揭开了济源市动物卫生监督所对大型生猪屠宰企业进行全程监管的新篇章。济源市动物卫生监督所坚持"动物检疫与企业生产同步"的服务和执法理念,     

绿色荧光蛋白穿梭载体的构建及其在嗜酸乳杆菌中的应用

为深入研究嗜酸乳杆菌的作用机理,以温敏型穿梭载体pSET4s为基本骨架,将绿色荧光蛋白(GFP)和嗜酸乳杆菌上、下游同源臂插入该载体,构建GFP标记的穿梭表达载体pSET4s-P1-GFP-P2。利用电转化方法将穿梭表达载体pSET4s-P1-GFP-P2转化入嗜酸乳杆菌,通过抗性和温度双重筛选获得能稳定表达GFP的重组嗜酸乳杆菌,将Western blotting和荧光显微镜观察验证的重组菌命名为ΔMG6243(GFP)。利用荧光显微镜观察和平板计数的方法对重组菌进行遗传稳定性和生物学特性研究。结果显示,重组菌在蓝光激发下可见明显绿色荧光,连传10代仍可见明显荧光,与野生菌相比,其生长特性、酸碱盐耐受性均无显著差别。结果表明,本试验已成功构建稳定表达GFP基因的重组嗜酸乳杆菌,利用温敏型穿梭载体pSET4s实现了外源基因在嗜酸乳杆菌中非抗性、整合型表达,为嗜酸乳杆菌基因重组菌的构建奠定了基础,同时GFP的标记作用也为嗜酸乳杆菌在动物体内分布、定植规律和作用机理创造了可行的条件。     

规模化养猪场的科学用水管理

本文就猪场用水的来源、用途、水的质量安全标准和猪场用水质量控制及科学用水管理措施作一综述.     

定点屠宰厂检疫岗位的设置及操作流程

济源市现有三家生猪定点屠宰厂,其中济源双汇食品有限公司为大型机械化生猪屠宰企业,年屠宰量达150万头。按照《动物防疫法》、《动物检疫管理办法》和《生猪屠宰检疫规程》等法律的规定,济源市动物卫生监督所向三家屠宰厂分别派驻了检疫人员实施屠宰检疫。     

鸵鸟前后肢动脉血管的观察研究

[目的]分析鸵鸟前后肢部动脉血管的分布。[方法]采用注射器注射法,将ABS的丁酮溶液注入鸵鸟的主动脉使动脉血管显色,用甲醛固定后进行大体解剖剥离,观察鸵鸟前后肢动脉血管的分布情况。[结果]结果表明,鸵鸟前肢的主要动脉分别为腋动脉、臂动脉、臂深动脉以及尺动脉和桡动脉 后肢的主要动脉为股内动脉和坐骨动脉及其分支,股内动脉是从股动脉后方发出的,有分支到髋关节。坐骨动脉是降主动脉的最大动脉支。月国动脉、肾中动脉、肾后动脉和腓肠动脉等都为坐骨动脉的分支延续。[结论]该研究结果为有效地防治鸵鸟腿病的发生,以及鸵鸟形态学解剖提供依据。     

甘蓝—萝卜—白菜一年三收规模种植模式在咸阳北部的气候适宜性研究

利用咸阳各地1991—2020年日平均气温、日平均最低气温,结合2020年旬邑、渭城大田生产数据和甘蓝、萝卜、白菜营养生长所需气象条件,规划甘蓝—萝卜—白菜一年三收生产模式,为充分利用气候资源、提高土地利用率提供理论依据。结果表明,适宜甘蓝营养生长的日平均气温为15～24℃,且该时段内逐日平均最低气温≤12℃的天数不超过16天;适宜萝卜营养生长的日平均气温11～25℃,日相对湿度>47%;适宜白菜营养生长的日平均气温为5～25℃,日最低气温≥-2℃。咸阳北部县(市)甘蓝—萝卜—白菜一年三收可以实现。咸阳南部各县(市、区)由于夏季气温偏高不适宜冷凉蔬菜生长。     

高粱BTx623幼胚遗传转化及再生体系的建立

高粱是世界上仅次于小麦、水稻、玉米和大麦的重要作物之一,虽然高粱基因组已经完成了测序,但是针对高粱测序品种BTx623,高效、稳定的遗传转化和再生体系的缺乏,阻碍了高粱遗传育种和功能基因组研究发展.本研究以高粱基因组测序品种BTx623幼胚为外植体材料,利用农杆菌介导的方法以抗草铵膦的Bar基因为筛选标记进行高粱遗传转...     

草原红牛ACSL3基因CDS区克隆、生物信息学分析及组织表达研究

试验旨在克隆草原红牛长链酰基辅酶A合成酶3(long-chain acyl-CoA synthetase 3,ACSL3)基因编码区并对其进行生物信息学分析,同时在mRNA和蛋白质水平上分析ACSL3基因在草原红牛不同组织中的表达差异。利用RT-PCR技术和TA克隆的方法获得草原红牛ACSL3基因CDS序列;利用在线软件对ACSL3基因进行生物信息学分析,分析ACSL3基因与其他物种的同源性并构建系统进化树,分析ACSL3基因编码蛋白质的基本理化性质、潜在磷酸化位点、O-糖基化位点、N-糖基化位点、信号肽、二硫键、跨膜区结构、亚细胞定位及该基因编码蛋白的二级结构、三级结构;通过实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测ACSL3基因在草原红牛各组织间的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,试验成功克隆了草原红牛ACSL3基因CDS区,全长2 163 bp,编码720个氨基酸,蛋白分子质量为80.28 ku,理论等电点为8.74,属于亲水性蛋白。通过NCBI中BLAST比对发现,草原红牛与牛、绵羊、猪、人、大鼠、小鼠、鸡的ACSL3基因核苷酸序列同源性分别为99%、97%、93%、91%、88%、88%和78%;系统进化树结果表明,草原红牛与牛、绵羊的亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。该蛋白序列有7个二硫键,66个磷酸化位点,9个O-糖基化位点,3个N-糖基化位点,不存在信号肽,但存在1个跨膜区。二级结构和三级结构分析结果表明,ACSL3蛋白通过无规则卷曲连接,蛋白质结构以α-螺旋和β-转角为主,为混合型蛋白。mRNA和蛋白表达量检测结果显示,ACSL3基因在肾脏和肌肉组织中表达量较高,显著高于其他组织(P<0.05);在胃、肝脏和心脏中中度表达,显著高于脾脏、肺脏、肠和脂肪(P<0.05);在脾脏、肺脏、肠和脂肪中相对低表达,说明草原红牛ACSL3基因可能与体内脂肪沉积和脂质代谢等调控功能有关。本试验结果为进一步研究ACSL3基因在草原红牛中脂质代谢及脂肪沉积等方面的调控作用提供了基础材料。