太子参蚕豆萎蔫病毒2号CP基因的遗传多样性及分子进化分析

为了解太子参蚕豆萎蔫病毒2(Broad bean wilt virus 2,BBWV2)的遗传多样性及分子进化关系,本研究对5个不同地理来源的6份太子参病叶样品进行了BBWV2外壳蛋白(coat protein,CP)基因的RT-PCR扩增和克隆。序列分析结果表明,所得13条太子参BBWV2 CP基因序列均为1 345 bp,其核苷酸序列同一性在81.0%~99.0%之间,氨基酸序列同一性在93.5%~99.3%之间;核苷酸多样性为0.084 00;存在280个核苷酸多态性位点,其中232个为地域特异性位点;总变异数为278个,其中同义突变29个,异义突变249个。不同地理来源的太子参BBWV2分离物之间遗传分化程度较高,基因交流不频繁,遗传漂变可能导致分离物间明显的遗传分化。在系统进化树中,太子参分离物的聚类呈现出明显的地域特异性,江苏、贵州、湖南、福建分离物均聚类在I-a亚组,而山东分离物聚类在II-c亚组,遗传距离较远。研究表明,太子参BBW V2存在很高的遗传变异,基因突变是其产生遗传多样性的主要驱动力,而地理因素与其具有较高的核苷酸多样性密切相关。     

基于ISSR和RAPD标记的太子参种质遗传多样性研究

为探究太子参种质资源的遗传多样性及亲缘关系,采用简单重复序列区间多态性（ISSR）和随机扩增多态性（RAPD）标记对来自不同产地的10个太子参种质进行遗传多样性分析。结果表明,13条ISSR引物和16条RAPD引物在10个太子参种质中分别获得101、89个扩增位点。其中多态性位点数（NPL）分别为58、63个,多态性位点频率（PPL）分别为57.37%、70.32%。基于ISSR标记的太子参种质间的观测等位基因数（Na）、有效等位基因数（Ne）、Nei’s遗传多样性指数（H）和Shannon’s多态性指数（I）的平均值分别为1.573 7、1.344 3、0.353 2、0.529 7。基于RAPD标记的太子参种质间的Na、Ne、H和I的平均值分别为1.703 2、1.418 1、0.354 9、0.532 1。综合2种标记的GS为0.668～0.911。综合2种标记的聚类结果表明,当GS为0.780时,10个太子参种质可聚为4组,聚类分析结果与太子参种质的地理分布有明显的相关性。     

太子参连作效应及其微生物菌肥应用研究进展

太子参为石竹科多年生草本植物,连作效应的发生与发展对其现代农业可持续健康发展构成威胁,探寻中药材太子参连作障碍有效的消减策略与方法意义重大。本文基于CNKI数据库采用可视化分析软件对太子参连作和太子参微生物菌肥文献内容进行计算与分析,分别综述了太子参连作效应与因素、太子参连作对根际土壤菌群的影响与变化、微生物菌肥在太子参连作中的应用和太子参微生物菌肥作用机理,并进行未来展望,以期为我国太子参农业产业可持续发展提供理论参考。     

太子参BBWV2和TuMV的巢式RT-PCR检测

为探求快速、灵敏的太子参脱毒检测技术,建立太子参蚕豆萎蔫病毒2(Broad bean wilt virus 2,BBWV2)和芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)的巢式RT-PCR快速检测方法,根据GenBank数据库中这2种病毒外壳蛋白(coat protein,cp)基因核苷酸序列的保守区域分别设计2对简并引物,建立和优化巢式RT-PCR扩增体系,继而进行常规RT-PCR和巢式RT-PCR灵敏度的比较,并应用巢式RT-PCR对7份田间栽培太子参病样和4份脱毒苗样品进行检测。结果显示:BBWV2、TuMV的巢式引物最佳退火温度分别为60、62℃;采用巢式RT-PCR,这两种病毒样品cDNA原液在稀释10~5倍后仍能扩增出特异性条带,比常规RT-PCR的灵敏度至少高10倍。本研究建立的巢式RT-PCR检测方法可快速、稳定、准确地检测BBWV2和TuMV,且具有更高的灵敏度,更能满足太子参脱毒检测的需要。     

饲料中添加太子参提取液对大黄鱼成活和生长的影响

在水温24～26℃下,将体质量(34.05±8.23)g的大黄鱼Larimichthys crocea饲养在循环水养殖系统1.5T的桶中,投喂添加0.5%、1.0%、1.5%和2.0%太子参Pseudostellaria heterophylla提取液的饲料,分析其对大黄鱼成活率、生长和形体指标的影响。太子参粉末置圆底底烧瓶中,加80%乙醇,水浴90℃回流提取3h,趁热过滤,残渣用95℃超纯水浸提4h后过滤,两次滤液混合、浓缩,去除水分,即为太子参提取液(浓度为40mg/mL)。120d的饲养结果显示:太子参提取液显著提高了大黄鱼养殖成活率(P0.05),1.0%组的养殖成活率(88.1±5.3)%最高;太子参提取液对大黄鱼有促生长和改良形体指标的功效,后期更为明显,试验120d时,0.5%组大黄鱼体重绝对增加率[(0.25±0.004)g/d]、绝对增长率[(0.026±0.006)cm/d]和增积量(0.0067±0.0004)显著大于其他组(P0.05),肥满度(1.43±0.49)%和肝体比(1.54±0.31)%显著低于对照组(P0.05),脏体比[(1.00±0.14)%]显著低于其他各组(P0.05)。结果表明,太子参提取液能提高大黄鱼的成活率、食物的消化吸收率,添加量在0.5%～1.0%之间为宜,且投喂时间越长,效果越佳。     

太子参及其复方中草药对大黄鱼几种抗氧化酶基因表达的影响

在水温24℃～26℃下,将体质量（36.14±7.18）g的大黄鱼饲养在循环水养殖桶中,投喂添加0%（对照组）和0.5%太子参提取液（E1组）及1%复方中草药（太子参、党参、黄芪、甘草、枸杞、巴戟天等,E2～E5组）提取液的饲料30 d,比较大黄鱼的过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和谷胱甘肽还原酶（GR）的m RNA在不同组织中的表达差异。结果显示,投喂太子参和1%复方中草药提取液的大黄鱼肾脏和脾脏组织中CAT、GPx和GR的相对表达量与对照组无显著差异（P>0.05）。肾脏组织中,除E2组CAT基因的相对表达量为对照组的1.4倍（P>0.05）,E5组GPx基因的相对表达量为对照组的1.15倍以外,其余组中CAT、GPx和GR基因的相对表达量均下调（P>0.05）。脾脏组织中,除E3和E5组GPx基因表达量分别为对照组的1.4倍和1.13倍外,其余组中鱼CAT、GPx和GR基因均下调表达（P>0.05）。本研究结果提示,投喂30 d时,太子参及其复方中草药对大黄鱼这几种抗氧化酶的基因表达的影响并不显著。