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51.
采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从牙鲆(Paralichthys loivaceus)肝脏总RNA中扩增出干扰素调节因子(fIRF)的核心区序列,定向插入质粒pUC18,克隆的牙鲆IRF cDNA序列分析表明,与Yabu报道的牙鲆IRF cDNA相比有1个碱基差异,但与推断的氨基酸序列完全一致,将牙鲆IRF的核心区序列 cDA定向插入原核表达载体pBV220,构建成牙鲆IRF表达载体pBVfIRF22,SDS-PAGE分析表明,经42度诱导,含pBVfIRF22质粒的大肠杆菌可表达一分子量约12000的特异蛋白。 相似文献
52.
采用PCR方法改造已克隆到的草鱼胰岛素样生长因子-I(IGF-I)cDNA。使其成为成熟肽cDNA并亚克隆到pGEX-4T-1载体中,构建草鱼IGF-I融合蛋白表达质粒pGEX-IGF。质粒转化大肠杆菌BL21菌株,该菌株经IPTG诱导可表达分子量约34kD的特异蛋白。在不同的温度条件下分别产生以可溶性的和包涵体形式为主的特异蛋白,经30℃诱导的菌体经溶菌酶消化、超声破碎及高速离心后,裂解液上清经glutathione sepharose亲和层析纯化获得高纯度的GST-IGF。以此纯化的融合蛋白为抗原制备兔抗草鱼IGF-I的抗血清,凝胶双扩散试验显示抗血清效价为1:64,说明表达产物具免疫原性。 相似文献
53.
从患出血病草鱼体上分离出1个菌株,传统分类学及16SrRNA基因鉴定其为嗜水气单胞菌,人工感染实验显示该分离菌株为强毒株。克隆该菌株的气溶素(aerolysin,aerA)基因和溶血素(hemolysin,hlyA)基因,序列分析显示这2个基因只有46.7%的同源性。Blast分析显示,hlyA基因与GenBank上已登录的hlyA序列具有较高的同源性,而aerA基因与已登录的aerA基因以及一些hlyA序列也具有较高的同源性。对与aerA基因同源性较高的这些hlyA序列进行结构域预测,发现它们均具有APT结构域和气溶素结构域,说明它们实际上应是aerA基因,只是命名上与hlyA基因混淆。用DNAstar软件预测aerA和hlyA的抗原区,显示它们均具有很好的抗原性。用特异性引物检测菌株的aerA基因和hlyA基因,结果显示2株毒力株均有特异条带,而无毒株则未扩增到特异条带,说明aerA和hlyA有可能作为鉴定嗜水气单胞菌毒力菌株的标记。 相似文献
54.
DNA疫苗及其在水产养殖中的应用研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
1990年,Wolff等发现将质粒DNA(裸露的DNA)注射给小鼠能引起外源基因的长期表达,接着Ulmer等进一步证实将病毒蛋白基因注射给动物能引起免疫反应,便诞生了DNA免疫技术。此后研究证明,编码病毒、细菌和寄生虫等不同种类抗原基因的质粒DNA能引起鸡、鼠、牲畜、灵长类和鱼等物种强烈而持久的免疫反应,它成为继减毒疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗和重组多肽疫苗之后又一新型疫苗。 相似文献
55.
56.
57.
58.
加州鲈卵泡抑素cDNA的克隆、分析和原核表达 总被引:1,自引:0,他引:1
卵泡抑素是TGF-β超家族中一些成员的抑制蛋白,具有促肌肉生长的作用。采用RT-PCR和RACE技术从加州鲈成鱼卵巢总RNA中扩增得到卵泡抑素cDNA,序列分析结果表明,加州鲈卵泡抑素cDNA全长1444bp,包括开放阅读框966bp,5¢非编码区82bp,3¢非编码区359bp。该基因编码321个氨基酸,其中信号肽31个氨基酸,成熟肽290个氨基酸,成熟蛋白由四个功能区组成,分别为:N-domain、Domain Ⅰ、Domain Ⅱ和Domain Ⅲ,其中N-domain具有与TGF-β超家族中一些成员特异性结合的结构,可抑制这些蛋白发挥作用。将加州鲈卵泡抑素氨基酸序列与红鳍东方鲀、草鱼、斑马鱼、大西洋鲑和斑点叉尾鮰比较,同源性分别为97%、89%、88%、88%和70%,其中N-domain氨基酸序列的保守性更高一些,与红鳍东方鲀、草鱼、斑马鱼、大西洋鲑、斑点叉尾鮰、非洲爪蟾、人、猪、大鼠、鸡的相比较,同源性为75%~100%。为获得重组卵泡抑素蛋白,将成熟肽cDNA插入表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,结果检测到一分子量约52kD的特异蛋白带,与预期大小一致,Western blot检测到表达产物表明成功获得了卵泡抑素的融合蛋白。加州鲈卵泡抑素cDNA序列和重组蛋白的获得为进一步研究鱼类卵泡抑素的促肌肉生长奠定了基础。 相似文献
59.
卷口鱼的临界水温和溶氧量 总被引:5,自引:1,他引:5
卷口鱼 (Ptychidiojordani)俗名嘉鱼 ,是珠江水系特有的名贵鱼类 ,经济价值高 ,多年来一直是珠江三角洲地区比较高档的河鲜之一 ,因其肉质嫩滑 ,味道鲜美而深受人们喜爱。近两年群众已有人工养殖卷口鱼的尝试 ,但苗种来源不易。因此 ,要发展该鱼的养殖业 ,一方面必须进行人工繁殖的研究 ,另一方面应深入研究其生物学特性。本文对卷口鱼的耐寒能力和呼吸耗氧的某些特点进行了初步的试验观测 ,这一结果对卷口鱼的生产养殖将有一定的理论和实际指导意义。1 材料和方法1 1 试验材料 试验鱼取自江河捕获的野生鱼 ,鱼体健壮无… 相似文献
60.