PCV2感染仔猪急性期蛋白的变化

【目的】探讨实验性感染PCV2仔猪血清中急性期蛋白浓度和肝脏急性期蛋白表达的变化,为PCV2的致病机制和诊断提供有价值的资料。【方法】19头ELISA检测PCV2抗体阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分为对照组和攻毒组,在攻毒后不同时间采集血液和肝脏。用ELISA方法检测血清中APPs的动态变化,荧光定量RT-PCR测定肝脏中APPsmRNA表达,同时观察肝脏的组织病理学变化。【结果】仔猪接种PCV2后,肝脏出现实质细胞变性,结缔组织增生和嗜酸性粒细胞浸润为特征的病理学损伤;血清中,猪主要急性期蛋白(Pig-MAP)在攻毒后7d达到峰值,在7和10d显著高于对照组(P0.05);血清淀粉样蛋白A(SAA)在攻毒后7d和21d显著高于对照组(P0.05);血清载脂蛋白AⅠ(Apo-AⅠ)攻毒后21d显著高于对照组(P0.05),其余时间差异均不显著;PCV2感染后21d仔猪肝脏中结合珠蛋白(HP)、C-反应蛋白(CRP)、α1-酸性糖蛋白(AGP)和SAAmRNA的表达呈现升高的趋势。【结论】PCV2感染可引起仔猪肝脏出现以实质细胞变性坏死和结缔组织增生为特征的病理学变化,血清APPs浓度和肝脏APPsmRNA表达呈现不同的变化,其中Pig-MAP可以作为病程发展的重要检测指标,对监测PCV2感染、疾病的预后起重要作用。     

猪圆环病毒2型感染对仔猪免疫功能的影响

为研究猪圆环病毒2型(PCV2)对宿主免疫应答的动态影响,选取19头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,随机分为对照组(4头)和试验组(15头),试验组每头仔猪接种PCV2病毒悬液,分离攻毒后0、3、7、14、21、28和35 d仔猪外周血淋巴细胞和血清,用MTT法检测外周血淋巴细胞的转化率,并用ELISA法检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6和IL-10的表达变化。结果显示,脂多糖(LPS)刺激下仔猪外周血淋巴细胞的转化率在攻毒后各时间点均极显著降低(P0.01);植物血凝素(PHA)刺激下仔猪外周血淋巴细胞的转化率在攻毒后3、21和28 d极显著降低(P0.01),在攻毒后14 d显著降低(P0.05);与对照猪相比,攻毒猪血清中IL-6的含量在攻毒后各时间点均无显著变化(P0.05);IL-1β的含量在攻毒后7 d显著升高(P0.05),IL-10的含量在攻毒后35 d极显著升高(P0.01);IL-2的含量在攻毒后7 d显著降低(P0.05),在攻毒后21 d显著升高(P0.05),在攻毒后28和35 d均极显著升高(P0.01)。结果表明,PCV2能显著抑制仔猪外周血T、B淋巴细胞的转化能力,并能激活机体的固有免疫应答,但同时能导致适应性免疫应答的活化出现迟滞并在攻毒后期引起免疫调节紊乱。     

猪鼻拭子样品采集及制备方法的标准化

为了黏膜样本采集所用材料及方法标准,并增强所检测样本数据的可比性与稳定性。以猪鼻拭子样品为研究对象,结合猪鼻腔的解剖结构以及所采集样品的特殊性,对猪鼻拭子的采集与处理方法进行探讨并标准化。结果表明：通过标化的方法对所采集的116份猪鼻拭子样本进行总蛋白浓度测定,发现所有鼻拭子样本的总蛋白均值为(6.92±0.41) mg/mL,变异系数为32.58%;对其中7头猪在不同时间采集鼻拭子测定总蛋白,结果同一头猪的检测数据变异系数除1头为13.95%外,其余均>10%。表明标化的猪鼻拭子采集及制备方法使检测结果具备较好的稳定性与科学性。     

猪支原体肺炎疫苗的免疫原理及应用效果概述

猪支原体肺炎灭活疫苗和弱毒活疫苗的临床应用均有很好的效果。简述了猪支原体肺炎灭活疫苗以体液免疫为主、弱毒活疫苗以细胞免疫和粘膜免疫为主的不同免疫学特性,分析认为占位效应可能是猪支原体肺炎弱毒活疫苗独特的免疫原理之一,提出了灭活疫苗可能的改良方向及保证弱毒疫苗高效免疫的三项措施,以期为猪支原体肺炎防控提供参考。     

鸡滑液囊支原体活疫苗(MS-H株)同时免疫对新支二联活疫苗免疫效力影响的调查

为了解新支二联活疫苗和鸡滑液囊支原体活疫苗之间有无相互影响,选用70只1日龄SPF鸡随机分为4组进行比对试验,其中:G1组20只,联合免疫新支二联苗活疫苗和鸡滑液囊支原体活疫苗(MS-H株);G2组20只,为新支二联活疫苗单独免疫组;G3组20只,为传染性支气管炎病毒(IBV)攻毒组;G4组10只,为空白对照组.免疫后...     

鉴别牛5种重要病毒的LAMP-基因芯片方法的建立

为建立牛的主要疫病的快速、准确及高通量鉴别诊断技术,以赤羽病病毒(AKV)、牛白血病病毒(BLV)、蓝舌病病毒(BTV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)5种牛传染病病原为研究对象,将LAMP技术与微流控芯片技术有机结合,建立了相应的基因芯片检测技术,并优化了该基因芯片的反应条件。结果表明,建立的基因芯片可同时检测上述5种病原,特异性好,60 min反应时间即可给出检测结果。其中AKV和PPRV的敏感性为10~3 copies/μL,BLV的敏感性为10~5 copies/μL,BTV和BVDV的敏感性为10~2 copies/μL,与LAMP检测的敏感性一致。成功建立了基于LAMP技术的5重RT-LAMP基因芯片,可同时快速准确检测上述5种病毒,为口岸检疫探索出一种能快速、高通量检测动物疫病的方法。     

PCV2感染通过胞内Ca2+超载诱导仔猪腹股沟淋巴结及脾脏淋巴细胞凋亡

为探讨猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染仔猪的淋巴结和脾脏淋巴细胞内钙信号变化在细胞凋亡中的作用,选取19头PCV2抗原和抗体均为阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分成对照组(4头)和试验组(15头),试验组仔猪通过滴鼻接种PCV2,并于接种后14、21和35 d分别扑杀5头,对照组仔猪滴鼻同量PBS后当天扑杀。所有仔猪扑杀时均取腹股沟淋巴结及脾脏,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光分光光度法检测细胞内Ca2+浓度,孔雀绿比色测定法检测Ca2+-ATP酶的活性,荧光定量RT-PCR检测钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA转录水平。结果表明:所有接种病毒仔猪腹股沟淋巴结及脾脏细胞凋亡率均极显著高于对照组(P<0.01),Ca2+浓度均极显著高于对照组(P<0.01);接种病毒仔猪腹股沟淋巴结Ca2+-ATP酶活性在21 d时显著下降(P<0.05),脾脏中Ca2+-ATP酶活性在21 d和35 d时显著下降(P<0.05);腹股沟淋巴结CaMKⅡmRNA转录在整个试验过程中无明显变化,但脾脏中CaMKⅡmRNA在PCV2接种后21 d和35 d比对照组显著上调(P<0.05)。结论:细胞内Ca2+超载是PCV2感染引起仔猪淋巴结及脾脏淋巴细胞凋亡的重要机制。     

猪支原体肺炎活疫苗（168株）气溶胶免疫后呼吸道sIgA分泌及抗原存留规律

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae ,Mhp)引起的猪的一种慢性呼吸道疾病,严重影响养猪业发展,活疫苗气溶胶免疫是防治该病的新措施。为研究猪肺炎支原体活疫苗(168株)经气溶胶免疫后,疫苗株在免疫猪肺内的占位存留规律,选用3周龄不吃初乳猪27头,随机分为3组,G1气溶胶免疫组12头,G2肺内免疫组12头,同时设立阴性对照3头。分别于免疫后第2 h、7 d、14 d及28 d进行鼻拭子Mhp sIgA检测以及血清抗体检测。另外在上述时间点分别宰杀G1和G2组各3头,对照组在实验组免疫后第28 d宰杀,采集肺泡灌洗液,分别进行Mhp sIgA检测及Mhp疫苗株含量检测。结果显示:(1)所有试验猪至实验结束,Mhp血清抗体未出现转阳现象;(2)鼻拭子sIgA水平G1组在免疫后第14 d与对照组相比上升,差异具有显著统计学意义(p <0.05);G2组在免疫后第7 d和14 d与相应的对照组相比上升,差异具有显著统计学意义(p <0.05),各时间点G1组与G2组sIgA水平差异不具备统计学意义(p >0.05);(3)G1组肺泡灌洗液中的 sIgA在免疫后14 d部分转阳(阳性率33.33%),28 d全部转阳(阳性率100%);G2组在免疫14 d时已全部转阳(阳性率100%),各时间点G1组与G2组sIgA水平差异不具备统计学意义(p >0.05);(4)气溶胶免疫组肺泡灌洗液内Mhp疫苗株浓度在免疫后第2 h、7 d、14 d和28 d分别是相应肺内免疫组的0.37倍、1.01倍、0.88倍以及0.52倍。猪支原体肺炎活疫苗(168株)经气溶胶免疫后,和肺内免疫一样可以诱导免疫猪的局部黏膜免疫以及具有同等的占位效应,且经气溶胶免疫的疫苗株在免疫仔猪体内的增殖水平可能与其诱导的黏膜免疫水平相关。     

混合感染背景下猪呼吸道病的免疫与控制

混合感染已成为我国规模化猪场的普遍现象,猪呼吸道病和猪呼吸系统综合症(PRDC)为规模化养猪生产的主要难题.猪气喘病作为原发性关键疾病,该病的控制对于养猪业的发展至关重要.文章对混合感染背景及猪呼吸道病的发病特点、控制方法做了简介,重点介绍疫苗、敏感药物及管理在猪呼吸道病的控制和净化中的作用,提出首先控制好继发性细菌感染是做好猪场PRDC预防和控制工作的重要手段.     

1株猪鼻支原体的分离鉴定及致病性

猪鼻支原体是猪场感染率极高的一种支原体,可引起多发性浆膜炎、关节炎等症状。目前尚未建立标准的猪鼻支原体发病模型,也缺乏标准强毒株。本研究从某猪场发病猪的关节液中分离得到一株支原体,通过PCR检测、菌落形态观察、菌体形态电镜分析、菌株MLST分型等方法对其进行了鉴定,确认其为猪鼻支原体。为评价菌株致病性,将该分离株接种1月龄自然分娩不吃初乳猪（SF-pCD猪）,试验猪在感染后出现关节肿胀、跛行等临床症状,日增重显著低于对照组,并出现部分死亡。剖检结果显示感染组出现胸膜炎、腹膜炎、心包炎及关节炎,肺部组织病理分析显示为间质增宽,无虾肉样病变。从发病猪的扁桃体、肺、心及关节积液中可再次分离到攻毒株。综上,本研究分离获得一株猪鼻支原体,人工感染猪后可出现典型的发病症状,猪鼻支原体发病模型的建立为致病机制及疫苗研究奠定了重要的基础。