21日龄CD163基因编辑猪血液生理 生化及免疫指标的测定和分析

探讨了CD163基因编辑对21日龄断奶仔猪前腔静脉血液中部分生理生化、免疫球蛋白及补体蛋白等指标的影响。结果表明:CD163基因编辑后,纯合子的淋巴细胞比率、中间细胞比率、红细胞平均体积均显著低于杂合子和阴性猪(P0.05);纯合子的粒细胞比率、粒细胞数显著高于杂合子和阴性猪(P0.05);杂合子的血小板总数显著高于纯合子和阴性猪(P0.05);纯合子的葡萄糖和胆固醇含量显著高于杂合子和阴性猪(P0.05);纯合子血液中IgG、IgA、IgE和IgM等4类免疫球蛋白的含量均显著高于杂合子和阴性猪(P0.05);纯合子血液中补体蛋白3和补体蛋白4与杂合子和阴性猪没有显著性差异(P0.05)。     

体细胞核移植生产梅山猪

本研究以中国优良地方品种梅山猪为材料,采用胰酶消化法获得猪胎儿成纤维细胞,通过使用Y染色体SRY基因引物SRY-1、SRY-2进行PCR扩增,结果发现,雄性胎儿样本能扩增出250 bp的Y染色体特异性基因片段,而雌性胎儿样本未扩增出此条带;G1、G2、G3、G4和G5代的融合效率差异不显著(P>0.05),但G5代作为供体细胞核移植的重组胚胎卵裂率显著高于G1、G2、G3和G4代(P<0.05);使用G5代的胎儿成纤维细胞作为供核细胞,通过手术移植的方法,将重构胚胎移植到二元后备母猪体内,结果成功地获得了体细胞克隆梅山仔猪,并且仔猪全部为雄性胎儿,说明该性别鉴定方法不但操作简单,而且准确度高;经微卫星DNA 多态性鉴定,确定克隆猪来自供核细胞,与代孕母猪无亲缘关系。本研究将为中国优质猪品种改良、保种、性别控制及建立人类疾病模型等研究提供有效可行的方法,为批量生产克隆优秀种猪提供了坚实的理论基础。     

湖北白猪精原干细胞分离培养及初步鉴定

以5日龄、10日龄和15日龄湖北白猪睾丸为主要研究对象,采用浓度为4 mg/mLⅣ型胶原蛋白酶联合0.25%胰蛋白酶两步酶法消化法获取湖北白猪精原干细胞,通过低速离心和差异贴壁法对湖北白猪精原干细胞进行纯化,以湖北白猪睾丸支持细胞作为饲养层进行体外培养,结合碱性磷酸酶(AKP)进行染色鉴定。结果表明,培养获得的细胞即为目的细胞SSCs。     

母猪生殖对策的初探

为了研究哺乳动物生殖对策,以母猪生殖记录为研究对象,对母猪不同胎次间产仔数的变化等进行研究。研究发现,在母猪的不同胎次间存在一定规律。通过优化每次繁殖过程所产生后代的数量,结果将身为发现哺乳动物对外界环境的感知和自适应机制奠定基础。     

培养基的保存温度对牛卵母细胞体外受精的影响

研究了培养基保存温度对牛卵母细胞体外受精的影响。结果表明,基础培养基中激素不同添加时间对牛卵母细胞体外成熟率、牛体外受精胚胎卵裂率及囊胚率差异不显著(P0.05);提前添加激素在4℃不能长期保存,而在-20℃能长期冷冻保存,并不会对牛卵母细胞体外受精胚胎的发育产生太大的影响。     

转hFat-1基因猪外源基因整合分析及拷贝数测定

对转人源化Fat-1基因猪的15头传代仔猪进行PCR检测,发现有7头阳性猪,其断奶后成活5头仔猪。对这5头仔猪进行Southern印迹杂交试验,确认3头仔猪整合有hFat-1基因。采用荧光实时定量PCR法测定原代转hFat-1基因公猪及3头阳性仔猪外源基因的拷贝数,分别是2、1、1、2个拷贝。转hFat-1基因猪能够将外源基因遗传到下代仔猪,但外源基因具有遗传不稳定的趋向。     

采用真空泵法快速获取猪卵母细胞

试验比较了真空泵法与传统的手动抽吸法对猪卵母细胞成熟效果的影响,结果表明,真空泵法在平均使用时间、卵母细胞的收集效率及A、B级卵母细胞所占的比例方面均优于手动抽吸法,在卵母细胞的成熟率方面稍低于手动抽吸法。表明真空泵法是一种有效的猪卵母细胞采集方法。     

猪去核无透明带卵母细胞电融合参数的探讨

试验通过采用不同场强、电场时程和脉冲次数对去核的猪体外成熟卵母细胞电融合参数进行比较研究,观察细胞融合情况。结果表明,在电场时程30 μs、1次直流脉冲（DC）的情况下,电场强度0.8 kV/cm 时卵母细胞的融合率为94.7%,显著高于其他各组（P<0.05）;当电场强度为0.8 kV/cm、1次直流脉冲的情况下,电场时程60和90 μs时,卵母细胞融合率为86.5%和83.8%,差异不显著（P>0.05）,但显著低于30 μs时的电融合效率（P<0.05）;在电场强度为0.8 kV/cm,电场时程为30 μs的情况下,1次电脉冲激活卵母细胞的融合率（94.7%）和2次电脉冲的融合率（95.6%）无显著差异（P>0.05）,但两者显著高于3次电脉冲的融合率（81.7%）（P<0.05）。通过对各组进行比较,在电场强度为0.8 kV/cm、电场时程为30 μs、1次直流脉冲的电刺激可以对体外成熟的猪卵母细胞取得较好的融合效果。     

猪肌生成抑制素(MSTN)基因cDNA克隆及序列分析

利用GenBank中猪肌生成抑制素(MSTN)编码序列设计引物,以湖北白猪背最长肌肌细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增出MSTN基因cDNA片段。该片段全长1277bp,包含猪MSTN基因的全部编码序列。将所得片段与pUCm-T载体连接,转化到DH5α大肠杆菌中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道的一致。