猪传染性胃肠炎免疫的研究 Ⅱ.弱毒疫苗的猪胎儿侵袭力试验、水平感染测定和现地区域试验

对接种10倍免疫剂量猪传染性胃肠炎(TGE)弱毒疫苗的妊娠母猪所生的13头未吮乳仔猪做的病原学和血清学检查均为阴性。证明本疫苗用于妊娠母猪对胎儿无侵袭力。水平感染试验表明,母猪接种后,其哺乳仔猪未被弱毒感染;接种3日龄哺乳仔猪时对母猪水平惑染率为17.4％,母猪无任何临床反应,只有10倍的中和抗体价。在滴鼻、肌肉、口服三种途径接种的后备猪群中,第一批同居水平感染试验猪有2/7抗体阳转。效价为32倍,第二批试验猪2/5抗体阳转,效价为4倍及2倍。几年来在最北方的黑龙江省至最南方的广东省之间选择12个区域试验点,接种4421头猪的结果表明,用克隆纯化弱毒毒种制备的疫苗,对不同品种、性别及年龄的猪只都有较好的安全性和免疫原性,抽样做被动免疫试验测知对仔猪的保护率平均为95.98％。试用中收到了显著防制效果和经济效益。     

致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应（PCR）证实为猪伪狂犬病病毒（PRV）野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系（PK-15）分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育1株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。该分离株经细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第24代毒价达10^8.5 TCID50／mL。免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）检测病毒抗原分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PRV阳性血清中和。电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观,无囊膜的病毒粒子直径约110nm～150nm,有囊膜的成熟病毒粒子直径约150nm～180nm。PCR鉴定该毒株含有gE基因,其序列与GenBank登录的7株PRV同源性为97.7％～100％。用不同剂量病毒培养物接种家兔于24h～72h内全部死亡。研究表明,PRV-JF分离株对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究奠定了基础。     

猪细小病毒细胞适应株的培育及鉴定

从临床表现为皮炎消瘦症状的仔猪肝脏中分离到1株病毒,经聚合酶链式反应（PCR）证实为猪细小病毒（PPV）,采用仔猪原代肾细胞和传代ST细胞分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育1株ST传代细胞培养适应毒株,命名为PPV-BQ2007株。免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）检测病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PPV阳性血清中和。免疫电镜可清晰见到聚集成团的大小不一的病毒粒子,近似圆形,无囊膜,直径大小约20nm-22nm。该分离株经ST细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第30代后毒价达10^7 TCID50/mL以上,且毒价和血凝价稳定。测序结果表明PPV-BQ2007株VP2基因与NCBI公布的皮炎型毒株Kresse株的同源性最高,达99.8％,在系统进化分支上处于同一个分支。PPV-BQ2007株传代细胞培养适应株的成功培育和鉴定,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究等奠定了良好基础。     

猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育和鉴定

从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）淋巴组织病料，经聚合酶链式反应（PCR）证实为猪圆环病毒2型（PCV2）感染，采用无污染的猪肾细胞系（PK15）分离培养，并连续传代培育成一株细胞培养适应毒，命名为PCV2／LG株。分离毒株经细胞培养，于第25代后毒价显著升高，于第35代毒价可达10^5.6TCID 50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法（IPMA）、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明，分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质中；病毒感染的阳性细胞呈散在分布，阳性细胞数可达50％以上；免疫电镜观察到与PCV2特异抗体结合形成的病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团，病毒粒子直径约为17nm；病毒抗原基因组由1768个核苷酸组成，与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达96．2％以上。用2mL的病毒细胞培养物（10^5.6TCID 50/mL）接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头，可引起典型PMWS临床症状。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。     

猪圆环病毒引发的断奶仔猪多系统衰竭综合征致病机理

断奶仔猪多系统衰竭综合征于1997年首次在加拿大西部发现,随后许多国家报道了本病的存在和发生,相继证实该病是由圆环病毒科(Circoviridae)猪圆环病毒2型(Porcinecircovirus 2,PCV-2)引起的。PMWS典型特征是全身性淋巴肿大。病毒感染后引发机体免疫抑制,可继发多种病原混合感染。经证实,PCV2感染对胸腺淋巴细胞的损伤在PMWS致病机理中发挥主导作用,巨噬细胞和树突状细胞浆内PCV-2检出率较高,但至今还不清楚哪些细胞亚群最先被PCV-2感染并提供了病毒复制的场所。PCV-2与细小病毒一样,需要依赖细胞生长S周期合成的聚合酶复制。许多研究者试图通过加强抗原刺激以提高进入S周期细胞数,却很难提高病毒在细胞培养中的增殖量。文章着重阐述PCV-2感染引发PMWS的致病机理以及未来需要开拓的研究方向。     

PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠免疫保护效果的评价

为评价猪圆环病毒2型-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗(以下简称二联苗)对小鼠的免疫保护效果，本研究将猪圆环病毒2型(PCV2) cap基因克隆至p MAL-c5X载体中，并通过原核系统表达了重组Cap蛋白(rCap)。通过western blot检测显示原核表达的r Cap与PCV2单克隆抗体发生特异性结合，表明r Cap具有良好的反应原性。利用本研究室已经纯化并保存的副猪嗜血杆菌(HPS)重组蛋白r Cdt B、r Afua和r OPPA，与r Cap蛋白以及佐剂ISA201VG混合乳化后制成PCV2-HPS二联亚单位疫苗，疫苗中各蛋白(rCdtB、r Afua、r OPPA、r Cap)浓度均为50μg/300μL。将60只6周龄BALB/c小鼠随机均分成免疫组和对照组，采用背部多点注射方式免疫，首免后间隔14 d二免。一免后以及二免后的14 d分别通过颌下采血方法采血，通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清中的特异性抗体，结果显示，二免后14 d，免疫组小鼠血清中CdtB、OPPA、Afua抗体水平分别与PBS+ISA201VG对照组和免疫之前比较均极显著提高(P<0.0001...     

低温贮藏对布氏潜蝇茧蜂生物学特性的影响

布氏潜蝇茧蜂是橘小实蝇等多种实蝇害虫的重要寄生性天敌。为满足生物防治所需的大量虫源，常常需要对分批饲养的布氏潜蝇茧蜂蛹进行贮藏备用。因此，本文研究了贮藏温度及贮藏时间对不同蛹龄布氏潜蝇茧蜂羽化的影响，基于此，进一步研究了4个低温贮藏处理对羽化成虫生物学特性的影响。结果表明，贮藏温度、时间、蛹龄及其交互作用对布氏潜蝇茧蜂的羽化率具有显著影响，仅9日龄蛹在13℃下贮藏10 d及15 d后对其羽化率无显著影响，分别为73.10%及68.31%。此外，进一步研究表明上述两种冷藏处理对布氏潜蝇茧蜂羽化成虫的干重、飞行能力、寿命、繁殖子代数及生命表参数不产生任何负面影响。本研究对优化布氏潜蝇茧蜂的低温贮藏技术具有参考价值。