仔猪小肠黏膜上皮细胞体外分离培养及鉴定

 【目的】阐明产肠毒素大肠杆菌F18（ETEC F18）引发仔猪腹泻的机理,针对其候选基因FUT1 的CDS区第307位点处的突变（G→A）,建立3个仔猪小肠黏膜上皮细胞系（GG、GA和AA）。【方法】首先以胎鼠和仔猪为试验材料,确定小肠上皮细胞的最佳分离方法。采用XI型胶原酶和I型中性蛋白酶的联酶混合液,将胎鼠小肠组织机械剪碎后用联酶进行消化和直接将联酶灌注到仔猪小肠腔内消化的两种方法进行比较。针对仔猪小肠黏膜上皮细胞体外培养过程中成纤维细胞污染难以消除的问题,本研究采用局部画圈法逐步去除成纤维细胞。最后,用电镜和CK18免疫荧光染色对纯化后的原代仔猪小肠黏膜上皮细胞进行鉴定。【结果】两种小肠上皮细胞分离效率对比表明,后一种消化方式更为有效。进而取出生12 h内未吃初乳的大白仔猪,剖腹剪取其小肠段,使用联酶混合液灌注消化分离得到形态完整、容易贴壁生长的小肠绒毛细胞团。电镜和CK18免疫荧光染色结果均显示,小肠黏膜上皮细胞纯度达90%以上。经纯化处理,最后获得了FUT1基因型为GG和GA的两种小肠黏膜上皮细胞。仔猪原代小肠黏膜上皮细胞培养周期显示,7代前细胞生长状况良好,形态为典型的上皮细胞样,单层细胞呈铺路石排列,培养至第9代,细胞出现生长停滞、胞体空泡化等现象。【结论】最终获得了FUT1基因型为GG和GA的仔猪原代小肠黏膜上皮细胞。建立了仔猪小肠黏膜上皮细胞分离及培养方法,为后续的细胞建系工作奠定了良好的基础。     

中外柑橘产业组织比较研究

中国专业从事柑橘栽培、加工和贸易的市场主体十分清晰,并且具备一定规模,因此可以将柑橘作为一个相对完整的产业进行研究.柑橘产业是中国农民增收、区域经济发展和新农村建设的支柱产业,是具有区域优势的特色产业.中国柑橘产业发展初期主要依赖资源优势,而产业组织制度或产业组织模式影响着产业运行绩效,因此产业组织结构将成为今后中国柑橘产业竞争力的重要影响因素.该文对世界主要柑橘生产国市场组织运行特点进行比较分析,并针对中国柑橘产业组织结构现状,提出组织模式优化的途径,旨在提高中国柑橘产业竞争优势和可持续发展能力.     

餐厨堆肥配制基质对水稻的育苗效果及应用成本分析

为探索餐厨堆肥在水稻育苗基质配制中的应用效果,本研究采用室内苗盘育苗方式,以餐厨堆肥、泥炭及蛭石为原料,按照体积比重分别配制50%泥炭+50%蛭石(CK)、10%餐厨堆肥+40%泥炭+50%蛭石(WF1)、20%餐厨堆肥+30%泥炭+50%蛭石(WF2)、30%餐厨堆肥+20%泥炭+50%蛭石(WF3)、40%餐厨堆肥+10%泥炭+50%蛭石(WF4)及50%餐厨堆肥+50%蛭石(WF5)共6个育苗基质处理,以10%鸡粪堆肥+40%泥炭+50%蛭石(CF)及20%猪粪堆肥+30%泥炭+50%蛭石(PF)这两个育苗基质为对照,并以水稻为靶标作物开展育苗试验,分析各育苗基质的理化性质及其对水稻幼苗生长的影响,核算不同水稻育苗基质的配制成本。结果表明,随着餐厨堆肥替代泥炭量的加大,育苗基质的理化性质及水稻幼苗的生长指标均出现明显变化。WF1处理水稻育苗基质的理化性质及水稻幼苗的生长指标均能够完全符合DB3205/T 212—2014中的要求。随着餐厨堆肥用量加大,各处理水稻育苗基质的pH值、EC值、容重、通气孔隙度等关键理化指标呈现逐步上升的态势,出苗率、株高、茎粗等生长指标呈现逐步下降的态...     

细胞色素b基因标记绵羊种内亲缘关系的初步研究

[目的]从群体的角度,初步探讨细胞色素b（Cytb）基因标记绵羊种内亲缘关系。[方法]用PCR方法扩增出滩羊和洼地绵羊2个地方绵羊品种共112个个体的线粒体DNA（m tDNA）Cytb基因,用限制性内切酶EcoRΙ对其进行限制性长度多态性（RFLP）分析。[结果]在56个滩羊样品中,有51个个体检测到1个酶切位点,5个个体没有检测到切点,呈现出2种限制性态型。在56个洼地绵羊样品中均能检测到酶切位点,表现为1种限制性态型。[结论]受试绵羊品种线粒体DNA多态性较贫乏,且m tDNA Cytb基因在绵羊品种内、品种间都有很强的保守性。因此,Cytb基因标记绵羊种内亲缘关系有一定的局限性。     

不同时期冬枣一年生枝条耐寒性指标的变化

为了解不同时期枣树枝条中耐寒性物质含量的变化.本文以初代冬枣、二代冬枣、马牙枣、马奶枣4个品种的枣树一年生枝条作为研究材料,分别对其1、2月的4个耐寒性指标进行了测定.结果显示,枣树枝条在2月的可溶性蛋白、丙二醛含量均高于1月,可溶性糖含量低于1月;马牙枣和二代冬枣枝条的含水量2月显著高于1月;马奶枣和初代冬枣的含水量...     

风景园林施工管理中存在的问题分析

国内风景园林的建设与发展获得了较为理想的成绩,风景园林的构建不但能够对城市空间、生态环境等进行有效改善,同时更能够对群众的精神文化诉求进行有效满足。所以,本文对风景园林实际施工管理工作中出现的问题进行深入探析,并且在此基础之上提出切实有效的改进措施,希望能够为风景园林方面的施工管理工作提供一些帮助。     

转抗仔猪腹泻候选基因FUT1克隆猪的效率分析及分子鉴定

产肠毒素大肠杆菌F18是引起仔猪断奶后腹泻的主要病原菌,α1-岩藻糖转移酶(FUT1)基因则是大肠杆菌F18与仔猪小肠黏膜黏附与否的重要候选基因,其有利基因型(不黏附)为AA。本研究前期利用体细胞核移植技术获得转AA型FUT1基因克隆猪15头,其中3头存活至断奶。为初步分析转基因克隆猪受胎率低、存活率低的原因以及鉴定转FUT1阳性克隆猪,本研究首先对代孕母猪的受胎率、妊娠期、产仔数以及转基因克隆仔猪初生重等进行统计分析,并利用PCR扩增产物直接测序方法对获得的15头转基因克隆猪进行分子鉴定。结果表明:相比自然生产母猪,转基因克隆代孕母猪受胎率较低、妊娠期较长、产仔率及活仔率均较低。15头转基因克隆猪中13头为FUT1转基因阳性克隆猪,1头存活至断奶。此外还发现,转基因阳性仔猪和阴性仔猪初生重差异显著(P=0.013)。研究结果为通过转基因以及克隆等技术手段生产及培育抗仔猪腹泻猪提供了数据参考。     

土壤中铁、铝的EDTA测定法与快速全量分析

习用的土壤中铁、铝的测定法是繁琐费时的,随着分析化学的进步,这一问题一定能够满意的解决。乙二胺四乙酸及其钠盐(以下简称EDTA)近年来广泛的应用于各种金属的测定,尤其是硷土金属的滴定。     

《土壤和植物中微量元素分析法》一书介绍

由中国科学院南京土壤研究所微量元素组编写,科学出版社出版的《土壤和植物中微量元素分析法》一书已于1979年9月出版。     

微量元素在农业生产中的作用

微量元素又叫痕量元素,指土壤中含量很低的化学元素,含量一般不超过千分之一。