对虾Taura综合症病毒Taqman实时定量RT-PCR检测方法的建立与应用

建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测对虾的Taura综合症病毒(Taura syndrome virus,TSV).选取TSV基因组的保守序列,利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针,扩增产物长度为73 bp.以含有TSV目的扩增片段的质粒为标准品,进行实时定量RT-PCR反应,结果表明质粒DNA在6～6×106个拷贝,共7个数量级的范围内有"S"型扩增曲线.根据病毒拷贝数与Ct值制备了标准曲线,可以用于病毒的定量分析.该方法的检测灵敏度为6个病毒粒子.该方法的重现性好,组内的实验变异系数为0.04%～2.70%,组间实验变异系数为0.92%～4.67%.引物和探针对于对虾基因组RNA、黄头病毒RNA都没有扩增反应,表现出良好的特异性.实时定量RT-PCR检测TSV方法的建立,对于虾病的临床诊断及流行病学研究具有重要意义.     

国境口岸截获象牙地理溯源分析初探

国境口岸截获象牙的地理溯源是识别非法象牙来源地,确定走私热点地区,描绘走私通道,有针对性地打击象牙非法贸易的重要前提。利用线粒体DNA单倍型溯源的方法,对我国的126份国境口岸截获象牙样本进行地理溯源。从126份样本中共得出22个地理单倍型,为2个支系和7个进化枝。通过LoxodontaLocalizer数据库比对分析,109份样本确定了地理来源,进而推断出3个来源地：中非刚果盆地的Tridom跨境生态保护区,东非的肯尼亚、坦桑尼亚和乌干达等国及非洲南部的KAZA跨境保护区。这3块地区也是目前国际公认的象牙盗猎最为严重的热点地区。将溯源结果与跨国犯罪组织的象牙偷猎、贩运和走私网络结合分析,将为海关缉私部门打击国际象牙走私链条提供有效的信息和关注重点。     

6株鱼类病毒性神经坏死病病毒cp基因的分子特征和遗传发生分析

根据已报道的鱼类病毒性神经坏死病毒(viral nervous necrosis virus, VNNV)衣壳蛋白基因(coat protein gene, cp基因)设计引物,对2006年从我国沿海养殖石斑鱼中分离到的6株鱼类神经坏死病毒进行RTPCR扩增,特异性扩增出6株病毒的完整衣壳蛋白基因,分别连接到pMD18-T载体中,并进行序列测定和分析.结果发现,6个VNNV分离株的cp基因核苷酸序列的同源性在97.3%以上;推导的氨基酸序列同源性在79.6%～99.1%之间.根据cp基因核苷酸序列绘制分子进化树,发现6个VNNV分离株在进化树同一分枝上,属于RGNNV基因型,与已报道的点带石斑鱼神经坏死病病毒(ECNNV)、巨石斑鱼神经坏死病病毒(ETNNV)及玛拉巴石斑鱼神经坏死病病毒(MGNNV)亲缘关系较近.试验结果表明,目前我国沿海养殖场发生的鱼类病毒性神经坏死病均由同一来源的病毒引起,该基因型的鱼类神经坏死病毒在我国沿海养殖的石斑鱼中广泛传播流行.     

牙鲆鱼淋巴囊肿病初报

牙鲆鱼（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓｏｌｉｖａｃｅｕｓ）淋巴囊肿病（ＬｙｍｐｈｏｃｙｓｔｉｓＤｉｓｅａｓｅ简称ＬＤ）是由虹彩病毒科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ）淋巴囊肿病毒（ＬｙｍｐｈｏｃｙｓｔｉｓＶｉｒｕｓ简称ＬＣＶ）引起的一种鱼类传染病。该病毒易感鱼类广泛,对鱼类危害严重．本次发现该病在６个牙鲆鱼养殖场呈亚急性暴发。病鱼体表可见有明显的瘤样囊肿物,囊肿细胞大的达到５００μｍ。牙鲆鱼淋巴囊肿病暴发在我国为首次,疫源为外来。已建议采取综合防治措施控制疫源,防止扩散,尽快扑灭此病。     

水生动物及其养殖场的消毒

水生动物及其养殖场的消毒刘荭王侃（深圳沙头角动植物检疫局５１８０８１）国际兽疫局在１９９５年出版的《国际水生动物卫生法典（鱼类、贝类和甲壳类）》中,对鱼卵、渔场、贝类养殖场和甲壳类养殖场的消毒管理工作进行了较为详尽的阐述。我国是水产养殖和消费的大国,...     

泰国输华斑节对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒的检测与分析

为研究进口斑节对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus,IHHNV)的风险,本文采用了世界动物卫生组织(OIE)2015版手册中推荐的PCR方法,对2015年从泰国输华的329批次斑节对虾进行了IHHNV检测分析。结果发现,其阳性率高达36.8%,且主要是感染1型和2型,以及风险不明的未知型。因此,来自泰国的斑节对虾具有较高的IHHNV传入风险,应加强针对IHHNV的进口监测,减少其对我国对虾养殖的影响。     

鱼类病毒性出血性败血症病毒核蛋白基因的原核表达

通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得编码病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)核蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,并在E.coli BL21(DE3)中得到表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定。结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为1 221bp核蛋白基因片段,诱导表达重组质粒pET28a-N,经SDS-PAGE检测,IPTG终浓度为1mmol/L时,诱导5h蛋白表达量最高,获得的目的蛋白大小与N蛋白的预测分子质量一致,约为48ku。诱导后的菌液进行超声波破碎后,将沉淀和上清分别用于SDS-PAGE电泳,结果表明目的蛋白主要以包涵体的形式存在。表达蛋白经过复性、纯化,得到了较高纯度的可溶性蛋白。经Western-blot检测表明,该表达产物能被羊抗VHSV阳性血清特异性识别。     

实时定量PCR技术及其在水生动物研究中的应用

<专刊>= <栏目>=研究论文 <图片>= <表格>= <连载>= <来源>= <中图分类号>=Q7 <主题分类>= <行业分类>= <本刊专题>= <本刊编号>=1005-8737-(2007)07-116-07 <基金项目>=国家质量监督检验检疫总局基础项目(2006IK003). <注释>= <参考