CHO表达生长激素释放因子的生物活性测定

在对生长激素释放因子(GRF)基因改造和化学合成，并构建了其真核表达载体pCDNA3-GRF(1-32)的基础上．用Lipofectin将上述载体转染CHO细胞进行瞬时表达，采用体外单层垂体细胞培养的方法对表达的GRF(1-32)进行了体外生物活性测定，即先将垂体用酶进行消化，再将消化细胞培养，形成单层细胞，利用其能合成与释放生长激素的能力来检测GRF的活性。结果表明：表达产物可刺激生长激素释放，并且比对照组提高3．8倍，     

猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白原核表达系统的建立

依据GenBank已发表的猪干扰素α1(poIFN-α1)成熟肽基因序列,胸腺肽α1(THY-α1)蛋白序列及Escherichia coliB密码子使用频率表,优化并人工合成poIFN-α1和THY-α1基因,利用SOE-PCR法在poIFN-α1和THY-α1之间设计1个13肽Linker。将融合基因克隆至pRSFDue-t 1表达载体,转化BL21(DE3)感受态,37℃培养至菌液OD600为0.6~0.8,IPTG(0.5 mmol/L)诱导,20℃培养12h,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明:目的蛋白为菌体内可溶性表达,经强阴离子交换层析和疏水层析纯化获得高纯度poIFNα1-THYα1融合蛋白。     

热应激对小鼠精液品质的影响及其在全球变暖背景下的生态意义

为了研究全球变暖和局部极端高温气候对雄性小型啮齿类动物繁殖能力的影响,建立小鼠热应激模型,设立5个温度组28、31、34、37和40℃,其中28℃组为对照组。在14d内分别在第1天—第3天、第5天、第7在、第10天和第14天检测小鼠的精子活力、精子顶体完整率、精子畸形率。结果显示,温度越高,精液质量下降越快;温度在较温和的范围内变动时,精液质量随温度的升高而呈现下降的趋势,但经过一段时间的适应,有所回升;在极端温度(40℃)胁迫下,小鼠的精液质量持续下降而不能得到恢复。这说明,高温影响下,雄鼠的繁殖能力存在适应性生理调节过程,但影响是相当明显的,至少在短期内不能恢复到原来水平。由此可以推断,自然界中,较长的精液品质下降期和恢复期可能打破了与雌鼠发情周期的同步化(如果高温对雌鼠影响不大),在自然界中可能对雌鼠的受孕率产生明显影响。此外,即使雌鼠能在雄鼠精液品质恢复期之前受孕,精子损伤也会明显降低受孕率,还可能产生活力低下、畸形或存在其他生理缺陷的后代,进而影响成活率。     

热应激与畜牧业

近年来,夏天持续高温天气所引发的热应激对畜牧业的影响越来越大,南方地区尤重,经济损失严重。因此,研究热应激的发生机制与机理、积极探索有效的预防措施,减缓热应激所产生的不利影响,对畜牧业生产具有重要意义。     

原生质体介导的外源性GRF基因在家兔体内的表达

生长激素释放因子 (ＧＲＦ)是由动物下丘脑合成并分泌的一种多肽激素 ,能特异性地诱导生长激素的合成与分泌 ,提高体内生长激素的水平以促进动物的生长。但ＧＲＦ在人和动物体内降解速度很快 ,半衰期短 ,直接应用有较大困难 ,通过对ＧＲＦ的一级结构进行改造 ,提高了其生物活性和在生物体内的稳定性 ,为生产应用创造了条件。但目前外源性ＧＲＦ的应用仍存在造价高、操作复杂等缺点。由于原生质体具有制备简单、经济实用等优点[1 ] ,带有目的质粒的原生质体已用于细胞融合技术中[2 ] ,但目前为止利用原生质体对动物肌肉进行基因转染的报道还…     

间接ELISA测定GRF方法的建立

建立了间接ELISA测定生长激素释放因子（GRF）的方法，其工本程序为，抗原包被，5％牛血清白蛋白和5％猎血清封闭，一抗反应（山羊抗人GRF1－29抗体）二抗反应（生物素化兔抗山羊IgG），链霉卵白素－HRP反应，DAB显色，最佳工作条件为，一抗1：1600，二抗1：3200，链霉卵白素－HRP0.5mg/L, 在上述条件下，绘制了标准曲线（2－40ng)，并测定了中国仓鼠肾细胞（CHO）表达GRF的含量。     

二丁酰环腺苷酸(dbcAMP)对猪生长及糖代谢的调控

通过皮下注射和饲料添加不同剂量二丁酰环腺苷酸（dbcAMP)进行饲养试验，研究其对猪生长和糖代谢调控的效果。结果表明：皮下注射1.0mg/kg和饲料添加20mg/kg为最佳调控剂量，在生长猪阶段，日增重分别提高13．61％和15．41％（P＜0．05）；料重比分别降低18．81％和19．10％（P＜0．01）；在肥育猪阶段日增重和料重比差异不显著（P＞0．05）。肥育猪肝糖原含量分别降低27．32％和27．18％（P＜0．05）；肌糖原含量分别降低28．79％和31．79％（P＜0．05）。血糖含量在生长猪和肥育猪阶段都明显提高（P＜0．05）。证明dbcAMP对猪的生长性能和糖代谢有明显调控作用。     

猪IGF-1R胞外域编码区2种单倍型对基因表达的影响

试验从筛查到的大型猪和小型猪胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）基因胞外域编码区上的4个同义突变形成的2种单倍型入手,分析不同猪种IGF-1R的2种单倍型是否影响其转录和翻译。通过构建包含IGF-1R 2种单倍型的表达载体（大型猪组命名为LP组,小型猪组命名为BM组）,利用qRT-PCR和Western blot,在转录和翻译水平上分析大型猪和小型猪IGF-1R的2种单倍型对基因表达的影响。结果表明：LP组的IGF-1R mRNA表达量显著高于BM组（P<0.01）;进一步检测发现,与LP组相比,BM组的IGF-1R蛋白质表达量显著降低（P<0.05）。大型猪和小型猪IGF-1R胞外域编码区2种单倍型在转录和翻译水平影响基因表达,进而可能调控动物的生长发育,为进一步研究小型猪形成机制提供数据。     

红松松子壳多糖的单糖组成及结构特征

采用超声辅助热水法提取红松松子壳多糖(PPSP),分离纯化得到两种主要成分PPSP2-2和PPSP3-1。通过高效液相色谱法检测所含单糖种类及比例,PPSP2-2单糖组成及其摩尔比为Man∶Rha∶GlcA∶GalA∶Glc∶Gal∶Xyl∶Ara∶Fuc=7.2∶12.2∶3.6∶11.8∶11.0∶20.2∶10.5∶18.4∶5.1;PPSP3-1单糖组成及其摩尔比为Man∶Rha∶GlcA∶GalA∶Glc∶Gal∶Xyl∶Ara∶Fuc=4.6∶5.6∶2.9∶44.9∶23.8∶9.1∶2.5∶5.2∶1.3。通过红外检测法确定PPSP2-2是以吡喃糖的酸性糖形式存在,结构中存在α构型糖苷键,确定PPSP3-1是酸性糖,并且存在吡喃糖。     

GHRP-6温敏型凝胶的制备及其对小鼠生长的影响

采用开环聚合法合成PLGA—PEG-PLGA共聚物,制备GHRP-6温度敏感型缓释凝胶并对其体外释药和对小鼠生长的影响进行研究。以PLGA—PEpPLGA为载体材料制备GHRP一6缓释凝胶制剂,采用BCA法测定体外释放度,并对体外释放数据用Korsmeyer-Peppas方程进行拟合;分别对分组小鼠皮下注射GHRP-6凝胶（2．0g／L）、GH—RP-6（2．0g／L）、空胶和生理盐水,隔周称重。结果表明合成产物符合PLGA—PEG-PLGA共聚物的特征,质量分数为15％、20％、30％的共聚物水溶液的胶凝化温度在32～37℃;GHRP-6在浓度为15％、20％、25％共聚物中释放出95％以上的药物分别需要16、18、20d,其释放曲线均符合Korsmeyer-Peppas方程模型,且具有良好的相关性;各组小鼠在注射35d后,GHRP-6凝胶组的累积增重分别比生理盐水组、空胶组、GHRP-6组高45．18％（P〈0．01）,39．090．4（P〈0．01）,21．80％（P〈0．01）。由此表明GHRP一6在凝胶中的释放达到预期要求,且对小鼠的生长有显著的促进作用,因此GHRP-6的PLGA—PEGPLGA凝胶有望开发成为一种长效促生长的注射制剂。