LT粘膜佐剂对鸡新城疫疫苗的免疫增强作用研究

研究大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白(heat-labile enterotoxin,LTRG)对鸡新城疫(Newcastle disease virus,NDV)疫苗经不同途径接种效果的影响.以NDV LaSota株作为共免疫原,与LTRG重组蛋白经滴鼻、口服及肌肉注射三种途径接种雏鸡,通过血清IgG抗体、HI抗体及粘膜分泌型IgA抗体水平变化,评价不同途径接种LTRG对NDV疫苗的免疫效果的影响.结果显示:①三种途径接种,LTRG均能显著增强NDV疫苗的免疫抗体水平,免疫雏鸡血清抗体和粘膜抗体水平均高于NDV疫苗单独免疫组;②LTRG对NDV疫苗免疫增强作用,以滴鼻接种最显著:二、三免后LTRG+NDV滴鼻组与NDV组血清IgG、粘膜IgA差异均显著(P＜0.01、P＜0.05);LTRG+NDV口服与NDV组血清IgG差异不显著(P＞0.05)、粘膜IgA差异板显著(P＜0.01);LTRG+NDV肌注与NDV组IgG差异不显著(P＞0.05)、粘膜IgA差异显著(P＜0.05);③三种免疫途径比较:血清IgG抗体水平差异均不明显(P＞0.05);滴鼻、口服免疫可诱导雏鸡产生较高的粘膜IgA抗体、血清HI抗体.由此可见:LTRG粘膜佐剂对NDV疫苗免疫增强作用,以粘膜(滴鼻、口服)途径接种效果最为显著,能诱导高水平的粘膜IgA抗体及血清抗体.     

猪流感病毒SYBR GreenⅠ定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为研究猪流感病毒(SIV)感染后SIV在体内的分布规律,本研究设计针对SIV NP基因保守区引物,建立了SIV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法对SIV核酸检测灵敏度为30TCID50,对健康猪肺组织cDNA、猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)核酸呈阴性反应。采用建立的荧光定量RT-PCR方法对人工感染A/swine/Shanghai/1/2007/H1N2(Sw/SH/1/2007)猪进行检测,结果显示:病毒在猪鼻腔粘膜持续存在至感染后第8d;肛门拭子在感染后2d～8d可持续检测到病毒核酸;喉头、气管在感染后第3d可检到病毒核酸,并持续至第10d;肺部淋巴结、脾脏在感染后5d～7d检测到病毒核酸阳性;其它脏器均未检测到病毒核酸,从而确定呼吸道系统及脾脏是SIV定殖的主要场所,SIV感染猪后向外排毒周期约为1周。     

多重RT-PCR检测猪流感病毒及血清亚型

根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%。     

主持辞

正尊敬的各位领导、各位来宾,女士们,先生们:大家上午好!"梅艳争春迎贵客,骏马奔腾谱乐章",阳春三月,我们相聚在美丽的上海,共绘畜牧业的蓝图美景。首先我代表主办方之一的上海市农业科学院畜牧兽医研究所对各位的光临,表示最热烈的欢迎!"2014规模化养猪实用新技术国际研讨会"是为适应养猪业发展的需求、解决生产中的问题而举办的一次新技术交流会。本次会议特邀请了国内外有较高知名度、临床经验丰富的专家,交流养猪生产中的新技术及发展趋势。     

重组猪生长激素对上海白猪、长上白猪的畜牧学效应

在去垂体大鼠实验验证重组猪生长激素(rPGH)活性的基础上，为证明rPGH在本体动物即猪体上的畜牧学效应，使用上海白猪、长上白猪等进行了本体动物试验。     

雏番鸭细小病毒病病毒分离鉴定

采集以腹泻、呼吸困难及主要症状的雏番鸭肝、脾病科，接种14d龄非免疫番鸭胚，80%胚在3～7d死亡，胚体呈弥漫性充血、出血。接种番鸭胚成纤维原代细胞72h可见细胞圆缩、聚团等变化。收集尿囊液及细胞培养物，以番鸭细小病毒（Muscovy duckling parvovirus,MDPV)阳性血清进行聚苯乙烯乳胶凝集，病料培养物均呈阳性反应，提取病料接种的尿囊液及细胞基因组DNA，用自行设计引物PCR扩增到与设计相符的600bp片段，经酶切鉴定，结果表明克隆到的片段为雏番鸭细小病毒特异性片段，从而初步证明分离到的病毒为雏番鸭细小病毒。     

猪卵巢卵母细胞的收集和体外成熟培养

对猪卵母细胞的采集和体外成熟培养(IVM)以及培养液进行了研究.结果表明,在卵母细胞的采集过程中,机械破碎法平均每个卵巢所获得的A、B级细胞数(分别为7.00、20.50)显著多于抽吸法(分别为1.48、 2.73)(P＜0.05).但抽吸法中平均每个卵巢所用的时间(1.05min)却显著少于机械破碎法(15.6min)(P＜0.05).NCSU-23与TCM-199两种培养液对卵母细胞体外成熟率无显著差异(P＞0.05).添加10μg/L rpGH比20μg/L rpGH更有利于卵母细胞的成熟(分别为71.5%、45.5%),两者差异显著(P＜0.05).     

大肠埃希菌热敏性肠毒素B亚基研究进展

产肠毒素大肠埃希菌(EnterotoxigenicE.coil,ETEC)是引起幼畜、婴幼儿及旅游者腹泻的重要病原之一。ETEC产生两类肠毒素,一种是对热敏感的热敏性肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT),另一种是对热不敏感的耐热性肠毒素(heat-stable enterotoxin,ST)。LT不仅是ETEC主要的毒力因子,而且还是一种重要的黏膜佐剂,它由A、B亚基组成,由于LT A具有毒性作用,限制了LT作为黏膜免疫佐剂的应用;而LT B无毒且具有黏膜佐剂活性,使其成为备受关注的佐剂之一。近年来对LT B的结构、介导的免疫调节分子机制、突变体及其佐剂作用已进行了较为深入的研究,为充分利用LT B的黏膜免疫佐剂功能奠定了基础。     

牛乳腺上皮细胞的分离培养

比较了几种乳腺细胞分离培养方法的特点。实验证明：胶原酶消化法和组织块种植法均可用于培养牛原代乳腺细胞。其中,胶原酶消化法容易得到均匀的乳腺细胞,且上皮细胞所占比例也比较高;组织块培养法不容易丢失、损伤上皮细胞,但上皮细胞长出较晚,且占比例较低,然而,用于培养小动物乳腺组织具有优势,并且可结合组织块转移、胰蛋白酶消化纯化上皮细胞,用此方法本实验获得了牛乳腺上皮细胞富集的细胞系;同时讨论了乳腺上皮细胞增殖与分化的关系,提出终末分化的腺上皮细胞已不再分裂增殖的观点。     

番鸭细小病毒病研究进展

本文综述了该病近年来研究的最新动态，包括病原特性、基因组结构及其编码蛋白、免疫原蛋白基因的表达等。为在我国能更好地研究和控制本病提供参考依据。