植物基因工程与抗病育种

概述基因工程的创立发展过程和转基因植物的作用,论述抗病育种的基本原理,并就目前基因工程在抗病育种中应用的现状及存在的问题进行分析讨论。     

对虾白斑综合症病毒PCR检测体系的优化研究

通过改进WSSVPCR模板制备方法、引物的筛选、PCR反应的优化,建立稳定的WSSVPCR检测体系。结果表明,该体系具有稳定、快速、灵敏等特点,可用于生产中对WSSV的检测。     

香蕉条斑病毒病研究进展

香蕉条斑病毒病是世界上分布最广泛的香蕉病毒病害之一。本文综述了香蕉条斑病毒病的主要特性、病毒检测技术及病害控制方法的研究进展。     

浅谈生物技术的过去、现在和未来

简要论述了生物技术创立与发展历程，概括了现代生物技术的主要内容与取得的成就，并对21世纪生物技术的发展对人类的贡献做出了展望，告诫人们应该用历史的、实践的观点正确看待生物技术的作用。     

黄灯笼辣椒组织培养研究

以黄灯笼辣椒子叶和下胚轴为外植体,研究了不同激素组合、苗龄、AgNO3（不同浓度）等对辣椒再生的影响。结果表明：①10～15d苗龄的外植体分化频率最高;②添加5．0mg／L的AgNO3可有效地减轻外植体或愈伤组织褐化程度;③最佳芽诱导分化培养基为MS＋BA5．0mg／L＋IAA1．0mg／L;④最佳芽伸长垮养基为MS＋BA3．0mg／L＋IAA1．0mg／L＋GA34．0mg／L;⑤最佳生根培养基为MS＋IAA0．5mg/L。     

感染高粱花叶病毒甘蔗叶片cDNA文库构建及评价

为了研究甘蔗花叶病与甘蔗寄主致病的互作分子机制,利用SMART技术成功构建了感染高梁花叶病毒甘蔗叶片的cDNA文库,用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验.采用Omega公司Plant RNA Kit提取感染高粱花叶病毒甘蔗叶片总RNA,经过Oligotex纯化获得mRNA,将其反转录成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR扩增双链cDNA.经SfiI酶切并去除短片段后,连接到pGADT7-SfiI载体上,成功获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒.经检测构建的文库容量为1.6×106 cfu,文库滴度2.2× 106 cfu/mL,文库cDNA插入片段长度主要分布在700～2 000 bp,文库重组率约为96％.结果表明,该文库质量较好,为筛选分离抗病功能基因及开展寄主与病毒互作的研究奠定了基础.     

香蕉束顶病毒海口分离物核穿梭蛋白（NSP）的纯化及抗血清制备

本研究以本实验室保存的含重组载体pDEST17-NSP的原核表达菌株E．coliBL21（DE3）为材料，于25℃、0．1mmol／LIPTG条件下诱导4h，集菌后超声波破碎，获得以包涵体形式表达的约20kD的融合蛋白。实验结果表明，将沉淀的融合蛋白溶于含6mol／L尿素的Binding Buffer中，再经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化后，可获得高纯度的融合蛋白。将纯化融合蛋白经12％SDS-PAGE电泳，切胶回收目的带，液氮研磨并按1：1（W／V）混合佐剂，4次免疫家兔，获得BBTV病毒核穿梭蛋白的特异性抗血清。以融合蛋白作抗原，间接ELISA法测定其抗血清效价为1：5000。田间检测样品的最佳抗血清工作浓度为1：500。Western Blot鉴定结果表明抗血清能与目的蛋白特异性结合。本研究的结果将为下一步NSP基因转录调控和蛋白功能研究奠定一定基础。     

齿兰环斑病毒外壳蛋白基因的表达及其表达产物抗血清的制备

用pET－21d构建齿兰环斑病毒（ORSV）外壳蛋白基因大肠杆菌表达载体pEO。经SDS－PAGE和Westernblotting分析，含pEO的大肠杆菌正确表达了ORSV外壳蛋白基因。此表达产物为融合蛋白。用表达产物制备抗血清，并应用于间接酶联法检测ORSV，具有较高的灵敏度（10ng／mLORSV）和特异性。     

黄瓜花叶病毒2b基因在大肠杆菌中的表达及其自激活特性检测

2b蛋白是黄瓜花叶病毒与植物寄主相互作用的一种重要多功能蛋白。用PCR方法扩增目的基因2b,经酶切、连接将其克隆至带有λcI基因的pBT载体上,构建与λcI基因融合的表达载体pBT-CMV 2b,转化大肠杆菌XL1-Blue MRF′报告菌株,用IPTG诱导表达黄瓜花叶病毒2b基因。Western blot分析结果表明,2b-λcI融合蛋白已成功表达,大小约为38 ku,与预期大小一致。pBT-CMV 2b与空质粒pTRG共转化XL1-Blue MRF′报告菌株,同时以pBT空质粒和pTRG-Gal11p共转化作为对照。结果显示,CMV 2b蛋白未产生自激活作用,从而为利用大肠杆菌双杂交系统筛选与2b蛋白相互作用的蛋白质研究奠定基础。