民猪AMPD1基因的克隆与真核表达载体的构建

为了研究腺苷-磷酸脱氨酶1(AMPD1)基因多态性,试验采用比较基因组学与克隆测序相结合的方法对比分析民猪AMPD1基因的DNA及cDNA全序列,并构建pcDNA3.1(+)-AMPD1真核表达载体。结果表明:AMPD1基因的13个外显子上有20个点突变,第1外显子第39位碱基突变造成MsⅡ酶切位点的缺失,第1 367位碱基突变造成BspAⅠ、MgoⅠ、NphⅠ等31个酶切位点的缺失并且成功构建了pcDNA3.1(+)-AMPD1真核表达载体。     

猪黑素皮质激素受体-4基因(MC4R)启动子克隆及其分析

本研究旨在对猪黑素皮质激素受体-4基因(MC4R)的转录调控机制进行初步探讨.首先通过PCR方法扩增MC4R基因5’上游启动区l 234 bp(-1 264～-31 bp)的片段,再利用生物信息学方法对这一区域内潜在的转录起始位点进行了预测,最后采用步移缺失获得了11段长度不等的启动子片段,并分别克隆到荧光素酶(LUC)报告基因表达质粒(pGL3-Basic)中.同时,通过双荧光素酶报告活性分析检测MC4R基因启动子区不同长度片段在猪上皮型肾细胞(PK15)中瞬时转染后的活性.结果表明,猪MC4R 5’端-682 bp处存在1个潜在的转录起始位点(TSS),细胞检测结果显示-514～-486bp区域内存在控制MC4R基础转录活性的顺式调控元件,推测该序列内的热休克转录因子(HSF)结合位点可能对MC4R基因的表达调控及功能行使具有重要作用.     

猪魏氏梭菌的分离与鉴定

笔者从某猪场疑似猪魏氏梭菌病病例中分离到一株魏氏梭菌,为了研究其生物学特性及其发病机理,对分离菌进行了形态培养、生化试验、动物实验等鉴定,鉴定结果为C型魏氏梭菌.药敏试验表明本株魏氏梭菌对青霉素、磺胺药敏感性较高.     

乙型脑炎病毒结构蛋白基因的克隆表达与免疫特性分析

研究分别克隆了乙型脑炎病毒SA14-14-2株的结构蛋白C、PrM/M及E蛋白基因.将3个结构蛋白基因分别插入表达质粒pET30(a)中,成功构建3个原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后利用IPGT诱导,SDS-PAGE分析结果表明,3个结构蛋白获得了表达,表达产物大小与预期一致.Western-blot分析结果表明:表达产物中PrM/M和E蛋白具有很好的免疫反应性,可被抗乙型脑炎病毒血清很好地识别;而C蛋白的免疫反应性较差,不能很好地被乙型脑炎病毒阳性血清识别.该结果提示,乙型脑炎病毒结构蛋白中除E蛋白外PrM/M蛋白也很可能具有诊断抗原的应用潜能.     

野猪和家猪MC4R基因的分子扫描及两个变异位点的PCR-RFLP分析

黑素皮质素受体4是在人类肥胖研究中发现的重要调节因子,参与调节动物的体重、采食量和能量稳态。猪MC4R基因第7跨膜结构功能域的一个高度保守区内的错义突变(G→A)与脂肪性状相关显著。本研究对野猪、民猪、大白猪MC4R基因进行克隆测序,寻找新的多态位点;并对其中的HindⅢ和ClaⅠ位点的突变进行了酶切多态性分析,建立了基于限制性内切酶HindⅢ和ClaⅠ的MC4R基因型的PCR-RFLP分子检测方法。     

FST基因的过表达对猪成纤维细胞内基因及生物学通路的影响

应用Illumina HiSeq测序平台,对过表达FST基因的细胞和正常细胞进行转录组测序,并对筛选的差异表达基因进行基因功能注释及信号通路分析。结果表明：过表达FST后共有286个基因的转录发生了变化,其中176个上调,110个下调。这些差异基因共得到44个GO功能注释,其中单一生物过程、代谢过程、细胞过程;细胞器、细胞区域、细胞和黏合terms下聚集的差异基因数量最多,均>100个。共发现9条显著富集的Pathway,包括与细胞增殖相关的细胞周期、DNA复制、碱基切除修复、p53信号通路等,与卵母细胞发育相关的卵母细胞减数分裂和孕激素介导的卵母细胞成熟通路。说明在成纤维细胞中过表达FST后,最显著的特征是与细胞增殖分化相关的基因和生物学通路被富集。     

猪子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞的分离培养

为了获得高纯度的猪子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞,对猪子宫内膜进行胶原酶消化,分离基质细胞和腺上皮细胞进行体外培养,研究其生长特性.结果表明:猪子宫内膜组织在37℃、通过1 g/L胶原酶Ⅰ消化90 min可以获得游离的腺体,对腺体进行培养时上皮细胞比例可达70％以上.培养过程中采用差速消化和差速贴壁可以成功分离腺上皮细胞和基质细胞.基质细胞最适贴壁时间为25 min,腺上皮为3h.纯化的基质细胞生长迅速,可传5代以上,上皮细胞生长缓慢,并且成片脱落.     

小RNA在民猪不同组织和PK15细胞中的表达及温度影响

为探究小RNA miR-148和miR-29与民猪抗寒之间的关系,采用qPCR方法检测了miR-148和miR-29在民猪不同组织中的表达情况,同时检测PK15细胞在25℃条件下分别培养0,24,36,48,72 h后miR-148a-3p和miR-29b的表达量变化。结果表明:组织表达谱中miR-148和miR-29在卵巢和精子中的表达量最高,在其他组织中表达量最高可达胃中表达量的42倍,最低仅为胃中表达量的0.3倍,且差异极显著(P<0.01)。25℃条件下猪肾上皮细胞(PK15)随着培养时间的延长,miR-148a-3p和miR-29b的表达量变化明显,miR-148a-3p的表达量在0～36 h变化不明显,36～72 h表达量先升高后降低,miR-29b的表达量在0～72 h变化呈先降低后升高再降低再升高的波浪型变化;不同时间点靶基因DNMT1及DNMT3B的表达量变化显著,但与miR-148a-3p和miR-29b的表达量变化趋势相反。说明小RNA的表达呈现明显的组织特异性;在低温环境下,培养时间对miR-148a-3p和miR-29b及其靶基因的表达量有较为明显的影响...     

全方位入手实现无抗、替抗养猪

抗生素是由微生物( 包括细 菌、真菌、放线菌属) 或高等动植 物在生命过程中所产生的,具有抗 病原体或其他活性的,一类次级代 谢产物,能对抗在人或动物体内的 致病菌等病原体,可治疗大多数细 菌、立克次体、支原体、衣原体、 螺旋体等微生物感染导致的疾病. 现临床常用的抗生素有微生物培养 液中提取物以及用化学方法合成或 半...     

鸡大肠杆菌灭活苗的研制及其应用

为预防鸡大肠杆菌病的发生,从武威地区发病鸡群分离的埃希氏大肠杆菌分离株经雏鸡毒力复壮后,于普通肉汤培养基中增菌培养,经甲醛灭活后制成灭活菌苗,通过实验室各项检验后免疫鸡群,经安全检验和效力检验证明该灭活菌苗安全有效。接种1月龄仔鸡可产生坚强免疫力,能有效预防仔鸡大肠杆菌病的发生。