SYBR Green荧光RT-PCR法快速检测毛皮动物源犬瘟热病毒

根据犬瘟热病毒(CDV)H蛋白基因的保守序列设计了1对引物,经过各反应体系和反应条件的摸索和优化,建立了CDV的SYBR GreenⅠRT-PCR荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,建立的方法特异性较好,几种非CDV病原体检测均为阴性;敏感性实验表明其敏感性可达1个TCID50,高于普通RT-PCR和胶体金检测试剂盒;重复性试验表明所建立的检测方法非常稳定;临床检测中,在39份样品中检测到28份阳性样品,高于普通RT-PCR方法的检出率。该方法检测成本低、特异性强、敏感性高、重复性好,可推广应用于毛皮动物CDV的大规模高通量的检测。     

采用RAPD技术分析4个猪种的遗传资源多态性

以野猪、杜洛克、东北民猪和杂种猪(杜洛克×野猪)为试验材料,采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术从DNA水平对这4个猪品种的遗传资源多态性进行了研究,计算了4个猪品种之间的遗传相似度。本研究还从133个引物中筛选出10个可以对4个猪品种进行遗传检测的多态性引物,共检测出89条扩增片段,其中多态性片段53条,多态率59.55%。这10个引物在4个品种中共产生品种特异带30条,反映了4个猪品种间的遗传变异,它们可能成为明显区分这4个猪种的稳定的遗传标记。     

雏鸡盲肠肝炎的诊断与防制

鸡盲肠肝炎是由组织滴虫属的火鸡组织滴虫(Histomonos meleagridis)寄生于禽类盲肠和肝脏引起的一种原虫病,又称组织滴虫病或黑头病[1].本病以肝脏肿大、表面散布大小不等的圆形、绿色或黄白色坏死溃疡和盲肠发炎肿大为特征.多发于雏火鸡和雏鸡,成年鸡也能感染,但病情较轻.     

野猪、家猪及其杂种猪ACSL4基因部分内含子的克隆和多态性分析

克隆猪ACSL4基因的内含子3和5,寻找其SNP位点。通过酚-氯仿法从野猪、家猪及其杂种猪的耳组织中提取基因组DNA。根据GenBank网站的猪ACSL4基因cDNA全序列设计两对引物进行PCR扩增,利用PCR-SSCP对获得的序列进行了多态性分析。对猪基因组进行PCR扩增,对获得的内含子3(232 bp)和内含子5(241 bp)序列进行克隆和测序,结果表明,基因片段分别是包含部分外显子3、4,完整的内含子3序列和部分外显子5、6,完整的内含子5序列,与人的该基因分别有72.87%和78.62%的同源性。多态性分析发现,该基因的两个内含子较为保守,未检测到多态位点。该研究为深入探讨该基因与肉质性状的关系以及丰富猪的种质资料库和分子育种提供了理论依据。     

野猪输卵管上皮细胞的原代培养与生物学特性研究

采用组织块贴壁培养法分离获得野猪输卵管上皮细胞,并进行传代、冻存和复苏,并对其生物学特性进行观察研究.结果表明:组织块在培养2d开始有细胞爬出,7d左右可长满全皿,原代细胞形态呈菱形,其中混有少量成纤维细胞.传代2～3次,细胞生长状态最好,4代后细胞退化;细胞经冷冻保存再解冻后细胞死亡率上升.通过此方法能够获得较纯的野猪输卵管上皮细胞,为野猪资源保存和进一步的研究提供技术支持.     

卵母细胞核因子促进核移植四倍体胚胎早期发育研究

研究旨在探讨猪卵母细胞核因子在重编程过程中发挥的作用。将体细胞引入未去核的MⅡ期卵母细胞中,构建体细胞核与卵母细胞核共存的核移植四倍体胚胎。通过分析核移植四倍体胚胎的早期发育情况探讨卵母细胞核因子对核移植四倍体胚胎早期发育的影响。结果显示,核移植四倍体胚胎、孤雌二倍体胚胎及孤雌单倍体胚胎这3组胚胎的卵裂率极显著高于核移植二倍体胚胎（P<0.01）,且核移植四倍体囊胚率及总细胞数也极显著高于核移植二倍体囊胚（P<0.01）。与通过标准核移植程序构建的核移植二倍体胚胎相比,核移植四倍体胚胎具有更强的发育能力。本研究建立了一个体细胞核与完整卵母细胞核因子物质共存的四倍体胚胎模型,有助于研究供体核与卵母细胞核之间的联系,为研究核因子在重编程过程中发挥的作用提供了平台。     

猪Myf5基因外显子1的多态性分析

利用PCR-SSCP技术,以民猪、三江白猪、大白猪、长白猪、军牧1号、杜洛克和双肌臀大白猪共7个猪种为研究对象,根据GenBank上猪的Myf5基因外显子1序列设计了4对引物,进行了SNPs检测,并检测到了多态,发现在1 288 bp处有一个点突变G→C。经计算各基因型频率、基因频率和试验统计表明:随民猪、三江白猪、大白猪、长白猪、军牧1号、杜洛克和双肌臀大白猪瘦肉率的升高,等位基因M的基因频率也大致按此顺序呈上升趋势。     

猪BMP-6基因在不同组织中的表达谱分析

为了研究猪BMP-6基因的组织表达特性,试验采用实时定量PCR技术分析了BMP-6基因在猪脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、大肠、肌肉、卵巢等11种组织中的相对表达情况。结果表明:BMP-6基因表达谱广泛,其中BMP-6基因在卵巢中的表达量最高,肝脏中的表达量次之,胃和小肠中的表达量最低。说明BMP-6基因可能与繁殖性状相关。     

鸡品种血浆酯酶多态性研究

用改进的聚丙烯酰胺凝胶系统对 6个鸡品种的血浆酯酶 (Es)进行了多态性检测 ,共检测到 Es- 1～ 5的 5个区 ,对其中 2个区进行了表型、基因型和基因频率的统计和计算 ,在 Es- 1区检测到 A1,A2 ,B,B0 ,C及本研究首次发现并暂命名的 C0 带。对该 6条带的遗传机制以显隐性的拟等位基因组的理论进行了重新解释。在 Es- 5区检测到 2种类型 AA和 AB,AB仅见于肉鸡 AA(80 % )和海兰褐 (50 % ) ,其余均为 AA型     

民猪、长白猪TLR5基因变异的比较分析

为了进一步研究Toll样受体5(TLR5)基因与疾病抗性/易感性的关系,试验以抗病性具有明显差异的民猪和长白猪为试验材料,采用PCR产物直接测序的方法,比较分析TLR5基因的变异情况。结果表明:猪TLR5 c.834 T>G点突变在2个品种间的分布具有极显著差异(P<0.01),民猪以G为优势等位基因,长白猪以T为优势等位基因,在该群体中没有发现GG纯合体。TLR5 c.834 T>G点突变很可能与民猪抗病性强有关。