猪卵母细胞冷冻保存研究

【目的】本研究试图通过比较猪卵母细胞超低温冷冻保存方法、冷冻承载工具、冷冻卵母细胞的类型，从而有效地保存猪卵母细胞;【方法】利用屠宰场卵巢采集的卵母细胞，以台盼蓝染色、二乙酸荧光素（FDA）染色鉴定卵母细胞冷冻后的成活率，以体外成熟和体外受精鉴定卵母细胞冷冻后的发育能力，研究了不同冷冻方法和不同冷冻保护剂对猪卵母细胞的冷冻效果。【结果】（1）程序化法冷冻保存中，9%乙二醇（EG），10%二甲基亚砜（DMSO），10%甘油（Gly）均对猪MII期卵母细胞有冷冻保护作用，极显著高于对照组（FDA染色成活率33.8%，25.8%，23.5% vs 2.5%，P <0.01），且以9%EG的效果最好，显著高于另外两组（ 33.8% vs 25.8%，23.5%, P <0.05）。（2）玻璃微细管（GMP）法是猪卵母细胞超低温冷冻的较好方法，以普通的麦管（Straw）法进行的程序化冷冻为对照组，GMP管法显著提高猪卵母细胞的冷冻成活率（分别为63.3%和34.5%，P<0.05）。（3）在玻璃化冷冻方法中，不同的冷冻液载体对猪卵母细胞冷冻成活率有影响。以EFS40为冷冻液，Straw和GMP管作冷冻液载体，卵母细胞的成活率分别为45.0%和65.9%，二者差异显著（P <0.05）。（4）用Straw的程序化冷冻法和用GMP管的玻璃化冷冻法对猪GV期卵母细胞冷冻均有效，但二者差异显著（成活率分别为30.0%和59.7%，P<0.05）。冷冻后继续培养，分别有2.8%和6.3%的卵母细胞周围颗粒层发生扩散。（5）冷冻对MII期卵母细胞的发育潜能影响较大，用新鲜精液使其受精，仅有4.9%的受精卵分裂，极显著低于对照组的49.5%（P<0.01）；发育至4-细胞期的比例为1.7%，但未能发育至8-细胞期以上胚胎。【结论】选用MⅡ期卵母细胞、以GMP管为冷冻承载工具、应用玻璃化冷冻方法能够较好地保存猪卵母细胞，为进一步完善猪卵母细胞超低温冷冻保存技术体系提供了参考依据。     

表达高致病性H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白的重组杆状病毒疫苗候选株的构建与免疫效果评估

为了有效防控H7N9亚型禽流感疫情,研制能够预防高致病性H7N9亚型禽流感的疫苗非常必要。研究基于昆虫杆状病毒表达载体系统(BEVS),构建并拯救了一株表达高致病性H7N9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)的重组杆状病毒rBac-GD15HA。间接免疫荧光试验及免疫印迹试验鉴定结果表明rBac-GD15HA的HA蛋白在Sf9细胞中成功表达;重组病毒细胞传代试验结果表明rBac-GD15HA在传代过程中能保持较高的病毒滴度,且遗传稳定;鸡的免疫试验结果显示,重组疫苗在一次免疫后即能诱导较高水平的针对H7N9 AIV的抗体应答,并能提供针对高致病性H7N9 AIV 100%的临床保护。因此,研究结果可作为H7N9亚型禽流感疫苗研发策略的参考,为其防控提供一种安全有效的方法,也为今后广谱流感疫苗的研发奠定一定的基础。     

太子参口含片的制备工艺

[目的]确定太子参口含片的制备工艺及处方。[方法]以太子参多糖含量为活性成分,考察口含片的外观、口感、片重差异、硬度和崩解时限,通过单因素试验筛选最佳辅料,正交试验确定各辅料成分配比,得出太子参口含片的最佳制备工艺。[结果]优选湿法制粒工艺作为太子参口含片最佳制备工艺,优化处方为:填充剂为微晶纤维素(MCC)224 mg、甘露醇60 mg,黏合剂为聚维酮K30(PVP K30)4mg,崩解剂为交联聚维酮(PVPP)4 mg,润滑剂为硬脂酸镁(MS)8 mg。[结论]按该处方制备的太子参口含片硬度、崩解时限等各项指标均符合要求。     

一例蛋鸡住白细胞原虫病的诊治

<正>近几年,笔者为某企业做技术服务,发现蛋鸡住白细胞原虫病在南方较为流行,多数养殖场时有发生,该病俗称白冠病,是一种原虫病,主要以卡氏住白细胞原虫最常见,一般夏、秋季多发,库蠓、蚊子等叮咬为其传播途径。现笔者将工作中接触的一例蛋鸡住白细胞原虫病诊治情况报道如下。1发病情况2014年6月,笔者发现湖南益阳一蛋鸡养殖户饲养的6 000只蛋鸡220日龄左右时发病,初     

中华秋海棠的引种栽培和保护生物学研究

秋海棠属(Begonia Linn.)系秋海棠科(Begoniaceae)多年生草本植物,北京秋海棠科野生仅1种,即中华秋海棠(B.grandis var.sinensis)。对北京周边山区进行的资源调查,发现有野生的中华秋海棠,通过调查和定点观察、试验,了解北京地区中华秋海棠的资源分布与形态特征、及其栽培特性、生物学特性的基本情况,并进行引种栽培研究。     

基于信息熵和灰关联的建三江分局土地利用结构驱动力分析

在GIS技术支持下,基于建三江分局1999—2009年土地利用变更调查数据及相关经济社会统计数据,利用Shannon熵函数分析土地利用结构的熵值特征和土地利用类型的演变规律,同时运用灰色关联度分析法对1999—2009年信息熵变化的驱动力进行分析与探讨。结果表明:1999—2004年建三江分局土地利用结构信息熵持续增长,土地利用结构均衡度持续增加;2005—2009年土地利用结构信息熵持续下降,土地利用结构均衡度下降,优势度上升;2009年各农场土地利用结构信息熵低值区扩大;说明建三江分局土地利用结构较单一,土地利用结构的有序性高。灰色关联分析结果表明:人口因素对信息熵变化驱动更为明显。     

结合响应面设计等方法高效分离微生物代谢产物研究

针对1株放线菌的发酵代谢产物中的抗菌活性物质,对其进行高效率分离提取方法的研究.采用三因素三水平的响应面设计优化薄层层析条件,获得优化条件为氯仿:甲醇:水=6:4.5:0.85,活性粗提物展开为9个组分.通过生物自显影方法定性确定了其中2个组分具有抗菌活性及其Rf值;对活性粗提物利用正相硅胶柱层析法进行分离纯化,分别得到这2个组分,薄层层析检测为单一条带.     

刀鲚MOR-2AK2的克隆、序列分析及组织表达

嗅觉是鱼类感知周围环境的重要工具,可能参与生殖洄游的过程。嗅觉由嗅觉受体(olfactory receptor)基因所编码的受体蛋白识别气味分子所引发,主嗅觉受体(MOR)基因是数量最大的一类嗅觉基因,可识别水溶性气味分子。为了弄清刀鲚定居型与洄游型种群的主嗅觉基因差异,本研究通过RACE技术获得了洄游型刀鲚MOR-2AK2基因,其开放阅读框长度972 bp,为单外显子结构,可编码323个氨基酸残基。预测表明,MOR-2AK2基因所编码的蛋白为7个疏水性的α-螺旋跨膜结构,属于G-蛋白偶联受体。对10种组织所作的定量分析表明,MOR–2AK2基因在嗅囊和性腺中的表达量远远高于其他组织器官,并且嗅囊中的表达量还高于性腺中的7~25倍。MOR–2AK2基因的表达量也存在性别差异,其中雌性嗅囊中的表达量约为雄性中的2倍,但精巢中的表达量却约是卵巢中的2倍。序列分析显示,MOR–2AK2基因的5′-UTR区域存在着一段微卫星序列(GT)5,其中定居型多出洄游型14个碱基(GTGTGTGTGTGTTT),这导致了二者所编码的氨基酸序列的相似度仅为84%。这些结果表明,MOR–2AK2基因不但与嗅觉功能有关,也可能参与了刀鲚的性腺发育或生殖洄游过程,同时也可能与定居型种群的形成相关。     

不同浓度枯草芽孢杆菌水剂对黄瓜枯萎病的防治效果

采用田间试验方法,研究不同浓度枯草芽孢杆菌水剂（AS）对黄瓜枯萎病的田间防治效果及对黄瓜生长和产量的影响。两年试验结果表明,8.3×109 cfu?L-1枯草芽孢杆菌AS对黄瓜枯萎病的防治效果最好,分别为81.8%和77.5%,明显高于5.0×109 cfu?L-1和3.1×109 cfu?L-1枯草芽孢杆菌AS的防治效果,但与50%多菌灵可湿性粉剂（WP）处理无显著差异|枯草芽孢杆菌AS对黄瓜生长无不良影响且具有一定的增产效果,与清水处理相比,2008年和2009年8.3×109 cfu?L-1枯草芽孢杆菌AS处理的增产率分别为5.8%和10.0%。     

深圳市主要植被群落类型划分及物种多样性研究

采用组间平均联结法对深圳市主要植被群落进行划分,并应用Gleason丰富度指数、Shannon-Wiener指数、Simpson指数和Pielou指数对主要植被群落的物种多样性水平进行比较分析。结果表明:深圳市城市森林可以划分为5个群系组和31个群落类型;各群落类型的物种多样性均表现为灌木层>乔木层,常绿阔叶人工林的乔木层和灌木层的生物多样性指数均最低,常绿落叶阔叶人工林乔木层丰富度指数、Shannon-Wiener指数、均匀度指数均最高,常绿阔叶人工林的乔木层优势种比较明显。