鸭圆环病毒和鹅圆环病毒三引物鉴别检测方法的建立

【目的】建立一种可同时检测并鉴别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的PCR方法。【方法】根据已发布的鸭圆环病毒和鹅圆环病毒基因组分子特征设计3条引物,应用3条引物建立了一种在一个反应管中可检测并鉴别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的三引物PCR方法。【结果】该方法可特异性扩增鸭圆环病毒和鹅圆环病毒,并根据扩增片段大小鉴别病毒种类,检测最低限分别为110、80 pg·μL^-1。应用该方法对临床疑似病例样品进行检测,其结果与用2种病毒对应的单病毒PCR检测方法一致。【结论】建立的三引物PCR方法特异性强,敏感性高,丰富了水禽圆环病毒病的临床病例的诊断及流行病学监测的技术手段。     

死亡番鸭胚中绿脓杆菌的分离鉴定及药敏试验

绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)也称铜绿假单胞菌,是假单胞菌属的代表菌种,是具有荚膜、鞭毛和无芽孢的革兰阴性杆菌.该菌广泛分布于自然界,对环境抵抗力较强,是常见的条件致病菌之一.随着家禽养殖业的不断规模化发展,绿脓杆菌感染家禽变得越来越常见,对养殖业造成一定的损失.近年来,本病在辽宁、北京、天津、河北、四川和福建等地均有发生,其主要原因是注射污染、环境恶劣、营养不良、运输等应激因素[1].在关于绿脓杆菌致死胚的报道中,最常见的是对鸡胚的侵害[2-4],其次是对鹅胚[5],但目前对番鸭胚的侵害未见报道.     

鸭疫里氏杆菌最新研究进展

鸭疫里氏杆菌（Riemerellaanatipestifer，RA）（原称鸭疫巴氏杆菌－Pasteurellaanatipestifer）可侵害雏鸭、雏鹅、雏火鸡以及野鸡等多种雏禽，但主要侵害２～７周龄雏鸭，由该菌引起的鸭疫里氏杆菌病（原名鸭传染性浆膜炎、鸭疫巴氏杆菌病）目前已成为危害养鸭业的主要细菌性传染病，除直接引起感染鸭出现急性或慢性败血症、纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎，还可引起干酪性输卵管炎、结膜炎、关节炎，此外因饲料转化率降低、生长发育迟缓而带来的间接经济损失也十分严重，发病率５％～９０％，病死率高达８０％。该菌最早由Rie…     

福建省鸭禽流感病毒分离株（A/Duck/Fujian/FQ107/2007〔H9N2〕）全基因测序及遗传进化分析

为了解一株可引起产蛋鸭产蛋异常的H9N2亚型禽流感病毒A/Duck/Fujian/FQ107/2007（H9N2）（以下简称Dk/FQ107/07）分离株的分子特性及其遗传进化地位,运用RT-PCR方法对其基因组进行扩增,克隆至pMD18-T载体后测序。结果显示,Dk/FQ107/07病毒株的血凝素（haemagglutini,HA）蛋白裂解位点的氨基酸组成为-PARSSR↓GLF-,其静脉接种指数（intravenous pathogenicity index,IVPI）为0.04,符合低致病性禽流感病毒特征;Dk/FQ107/07株HA基因与A/chicken/Shantou/5269/2005（H9N2）同源性最高,为98.9%,和我国首次哺乳动物流感病毒分离株A/Swine/HongKong/9/98（H9N2）有较近的遗传进化关系,三者均属于经典的H9N2/Y280群系;神经氨酸酶（neuraminidase,NA）基因与中国大陆首次分离株A/chicken/Beijing/1/1994（H9N2）相比,在63、64、65位点上缺失3个氨基酸（T、E、I）;核蛋白（nucleoprotein,NP）基因与高致病性鸭源禽流感分离株A/Duck/Fujian/1734/05（H5N1）和A/Duck/Fujian/9713/2005（H5N1）在同一遗传进化分支上,而从聚合酶（polymerase PA,PA）基因的遗传进化分析发现其基因属于H9N2/Y439群系。由此可见,Dk/FQ107/07可能是由不同禽流感病毒基因亚群间发生自然重排的产物。     

种番鸭肠炎沙门氏菌的分离鉴定

自表现产蛋异常(产畸形蛋、产蛋量下降)种番鸭群的死亡种番鸭肝脾中分离到1株细菌,经鉴定为肠炎沙门氏菌(抗原结构式为1,9,12∶g,m∶-)。通过毒力试验,结果表明其对雏鸭和小鼠致病性很强,经药敏试验测得该菌对丁胺卡那霉素和环丙沙星敏感。     

种番鸭产蛋下降综合征病毒的分离及其PCR鉴定

从临床表现产蛋率下降、产蛋异常的种番鸭输卵管粘膜中分离到1株病毒,经血凝及血凝抑制试验鉴定为产蛋下降综合征病毒,命名为E05。参照GenBank上发表的鸭源产蛋下降综合征病毒基因组序列的保守区设计1对引物,通过PCR技术扩增出286 bp的基因片段,将扩增产物与T载体连接后,转化感受态细胞,筛选出阳性重组质粒进行测序分析。测序结果与GenBank上已发表的EDSV 100kD蛋白序列比对,扩增片段与已登陆的基因片段完全相符,同源性100%。     

第二届全国水禽疫病防控研讨会在福州隆重召开

2013年7月5～7日,由国家水禽产业技术体系和中国畜牧兽医学会禽病学分会主办,福建省农业科学院畜牧兽医研究所、福建农林大学动物科学学院和莆田广东温氏家禽有限公司共同承办,福建省华融禽业有限公司、福建省龙海市顺兴良禽种鸭场     

禽坦布苏病毒NS1基因的原核表达

根据GenBank中登录的禽坦布苏病毒(avian Tembusu virus,ATMV)WR株非结构蛋白NS1基因设计特异性引物,采用RT-PCR方法从禽坦布苏病毒WR株核酸中扩增其NS1基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上构建原核表达重组质粒pGEX4T-NS1,进行条件优化诱导表达,将表达的目的蛋白经SDSPAGE分析。结果表明,分子量约为62kD的重组目的蛋白得到表达。     

鸭肠炎病毒疫苗株EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立

鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)疫苗株自1960年以来一直被用于防控DEV感染,该疫苗安全稳定、生产技术成熟、可快速诱导机体体液免疫和细胞免疫。DEV的基因组庞大,复制非必需区多,可容纳多个外源基因的插入,被广泛用来作为基因工程载体来开发疫苗。当前,尚未见仅针对DEV疫苗株的实时荧光定量PCR检测方法相关研究报道。本研究通过分析DEV疫苗株和强毒株UL2基因特点,明确DEV疫苗株在UL2基因上存在528bp连续核苷酸缺失,设计针对该差异的实时荧光定量PCR引物,建立了EvaGreen实时荧光定量PCR检测DEV疫苗株的方法。结果表明,建立的检测DEV疫苗株实时荧光定量检测方法,当UL2基因含量为5.25×101~5.25×106拷贝·μL~(-1)时有良好的线性扩增,其标准曲线方程Y轴截距为34.95,斜率为-3.218,扩增相关系数为0.999,扩增效率为100%;敏感性强,最低检测限为52.5拷贝·μL~(-1);特异性好,对DEV疫苗株扩增产物的熔解曲线分析,仅出现1个单特异峰值[Tm=(90.62±0.28)℃],无引物二聚体,对其他鸭源传染病病原(如鸭肠炎病毒强毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、番鸭源鹅细小病毒、新型基因重组型鸭细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭源鹅多瘤病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.55%~1.72%和0.92%~2.49%。本研究建立了DEV疫苗株实时荧光定量检测方法,为评价DEV活载体基因工程疫苗免疫防控机制提供参考。     

雏番鸭胰腺型鸭1型甲肝病毒分离鉴定及VP1基因分析

采集自胰腺发黄或出血的雏番鸭病料经RT-PCR检测为鸭1型甲肝病毒阳性后,接种11日龄非免疫番鸭胚获得一株病毒(命名为MPZJ1206)。该株病毒在不同温度下均不凝集鸡、鸭和绵羊红细胞;鸭胚中和试验表明蚀斑纯化毒可被经典的鸭1型甲肝病毒高免血清特异性所中和。该株病毒对7日龄雏番鸭的致死率为38.5%,病死鸭剖检病变与临床发病鸭相同,且从病死鸭脏器中回收分离到的病毒经鉴定仍为鸭1型甲肝病毒。应用鸭1型甲肝病毒VP1基因特异性引物从该株病毒克隆获得的714bp的基因片段,与经典鸭1型甲肝病毒分离株Du/CH/LGD/111239VP1基因的同源性最高,为99.1%,经遗传进化分析表明该株病毒属鸭1型甲肝病毒谱系。以上结果表明,雏番鸭胰腺炎是由鸭1型甲肝病毒感染所致,这一新病型明显不同于经典的鸭1型甲肝病毒感染引起的肝脏出血,鉴于此,建议将本试验分离株命名为胰腺型鸭1型甲肝病毒。