番鸭细小病毒和鸭3型腺病毒的分离鉴定及其全基因组序列分析

广东省湛江市某鸭场饲养的15日龄番鸭发病,病鸭主要表现张口呼吸、腹泻等症状,病死率达40％左右.为明确其病原,采集病死鸭肝脏、脾脏等组织进行PCR检测,病原分离鉴定,全基因组序列测定与分析,动物回归试验.结果显示,从该群病死鸭中同时分离到1株番鸭细小病毒(MDPV)与1株鸭3型腺病毒(DAdV-3),分别命名为MDPV...     

两株鸭源禽呼肠孤病毒S3基因序列分析

禽呼肠孤病毒（avian reovirus,ARV）属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）正呼肠孤病毒属（Orthoreovirus）。ARV病毒粒子为无囊膜的20面体,双层衣壳,直径60-80nm,氯化铯浮密度为1．36～1．37g／mL。基因组为10个节段的双股RNA,根据核酸电泳迁移率的不同,可以分成3组：3个大基因节段（L1、L2、L3）,3个中基因节段（M1、M2、M3）,4个小基因节段（S1、S2、S3、S4）。编码的蛋白至少有14种,     

禽多杀性巴氏杆菌C48-1株omp基因克隆及序列分析

根据Genbank中禽多杀性巴氏杆菌的omp（outer membrane protein）基因核苷酸序列设计1对特异性引物,应用PCR方法扩增出禽多杀性巴氏杆菌（5∶A）C48-1株的omp基因全长片段,与克隆载体pmD18-T连接后,转化感受态细胞,对经PCR鉴定和酶切鉴定均为阳性的克隆进行测序。结果表明omp基因全长2 376bp,编码791个氨基酸。序列分析表明该菌株与PBA100株、P52株、EU570212、PM70株核苷酸同源性为48.7%～98.6%,氨基酸同源性为34.8%～99.0%。     

不同基因型禽Ⅰ型副粘病毒致病性及全基因组序列分析

为了解当前流行于鸭群的禽Ⅰ型副粘病毒的致病性和分子特征,测定分析了两株病毒对不同动物的致病性、病毒的遗传进化地位及其全基因组序列.结果表明,所分离的两株病毒中,M4毒株与疫苗Ulster株同源性最高,为基因Ⅰ型,基因组全长15186 nt,PX2/03毒株则与近来分离自水禽的FP1/02等高致病分离株的同源性最高,为基...     

种番鸭减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因的克隆与序列分析

运用PCR技术从表现产蛋异常的种番鸭分离鉴定的减蛋综合征病毒(EDSV)E05株中分段扩增六邻体蛋白基因,分别与克隆载体pMD18-T连接后,转化感受态细胞,对经PCR鉴定和酶切鉴定均为阳性的克隆进行测序.结果表明,E05株六邻体蛋白基因长度为2733 bp,共编码910个氨基酸.序列分析表明,该株病毒与鸡源EDSV 127株和鹌鹑源EDSV QU株六邻体蛋白基因的核苷酸同源性分别为99.6%和96.0%,氨基酸同源性分别为99.9%和99.3%.     

检测鹅细小病毒环介导等温扩增方法的建立及结果判定方法改进

利用新兴的环介导等温扩增技术,建立了一种灵敏、特异、快速的体外环介导等温扩增检测方法.针对鹅细小病毒VP3基因的8个位点设计了6条特异性引物,建立了一种快速检测鹅细小病毒的LAMP方法.试验结果表明LAMP方法在恒温65℃水浴下50 min内即可完成GPV的检测,且其检测灵敏度达150 pg·μL-1;与其他常见的病毒无交叉反应.以钙黄绿素和Mn2+作为荧光指示剂,可快速、直观判定反应结果,可见该方法为适合基层及现场快速检测、实用灵敏的分子生物学方法.     

蛋鸭主要病毒病感染检测与分析

为明确引起蛋鸭产蛋下降的病毒病,自2011年来以建立的(RT-)PCR方法对我国部分省(区)临床调查采集和送检的表现产蛋下降蛋鸭样品进行禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、禽1型副粘病毒和鸭瘟病毒检测,结果感染阳性率分别为25.1%(212/843)、27.7%(298/1076)、9.3%(46/495)和1.3%(8/614),其中鸭坦布苏病毒病和禽流感是危害我国蛋鸭养殖业的主要疫病;经对549份后备未开产蛋鸭组织样品进行鸭坦布苏病毒感染检测发现其阳性率为40.8%,按年份统计以2015年的阳性感染率最高达70.5%。以上检测结果揭示随着时间的推移,鸭坦布苏病毒不仅严重危害我国开产蛋鸭群导致产蛋量急剧下降,还严重危害后备未开产蛋鸭群,表现迟开产、产蛋率不稳定、产蛋率持续走低或产蛋高峰维持时间短等多种产蛋异常现象,表明我国蛋鸭群存在严重的坦布苏病毒早期感染问题,应引起我国蛋鸭养殖者和有关部门的高度重视。     

检测鸭坦布苏病毒乳胶凝集试验的建立及初步应用

以制备的鸭坦布苏病毒单克隆抗体致敏乳胶,建立检测鸭坦布苏病毒抗原的乳胶凝集方法。经优化后确定其最佳致敏抗体量为300μg、最佳致敏时间为3 h、致敏温度为37℃。以乳胶凝集试验和RT-PCR对73份自然感染病例进行检测,分别检出阳性27、31份,两者检出的阳性符合率为87.1％。本方法快速、简便,适用于基层应用。     

鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗的研制

为研制鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗,以鸭疫里默氏菌血清1型 RAf63株和2型 RAf34株为菌种,培养,灭活,浓缩,混合后制成二价灭活疫苗。2倍量接种6 d 樱桃谷鸭测定疫苗的安全性;接种6 d 樱桃谷鸭,免疫后5、10、14、21、35、49、63、70 d,进行攻菌试验,测定疫苗的免疫原性。结果表明,该疫苗安全,免疫后14 d 产生保护,保护率为90％,免疫持续期可达60 d。研制成功可用于预防由血清1型和2型鸭疫里默氏菌引起的鸭传染性浆膜炎。     

樱桃谷种鸭鸭1型甲肝病毒的分离鉴定及其VP1基因的序列分析

从某樱桃谷种鸭场病死樱桃谷种鸭的肝脏中分离到1株病毒（命名为HeNl403）,该病毒能在79h内致死10日龄番鸭胚,对8日龄雏番鸭的致死率为33．3％。应用鸭l型甲肝病毒特异性引物对HENl403分离株讲行RTPCR检测,可扩增到约200bp的目的条带,并对分离株的VPl基因进行扩增,得到714bp的基因片段。