番鸭源禽1型副粘病毒PX2/03株P基因的克隆及原核表达

根据GenBank中水禽源1型副粘病毒(ZJ1)P基因序列设计2对引物,运用RT-PCR技术从1株雏番鸭源禽1型副粘病毒(PX2/03)的基因组中扩增出P全基因的cDNA.测序结果表明,P基因全长1441 nt,包含1个完整的开放阅读框架,编码395个氨基酸.与GenBank中已发表的P基因比对发现,该基因与近年来分离的鹅源禽1型副粘病毒分离株的亲缘关系很近.以分别含BamHⅠ、XhoⅠ的1对引物对该目的基因进行亚克隆后插入到pET32 a原核表达载体中,构建了pETP原核重组载体,将该重组载体转化入BL21(DE3)后,成功诱导表达了分子质量大小约为62 ku的P融合蛋白,经W estern b lotting检测证实表达产物具有免疫活性.     

混合阔叶木KP浆常规三段漂白强化工艺生产性试验

由柞木、桦木、杨木混合木片采用ＫＰ法生产的未漂浆，经ＣＥＨ三段强化漂白后，纸浆白度达到８１％（ＳＢＤ）以上，其裂断长达到了５７９６ｍ。     

雏麻鸭1型鸭肝炎病毒的分离与初步鉴定

鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)简称鸭肝炎,是一种传播迅速、高度致死性传染病。该病主要发生于3周龄以下雏鸭,临床上主要表现痉挛、抽搐和角弓反张等神经症状,病理变化以肝肿大和出血为特征,严重危害养鸭业的健康发展[1]。     

我国鸭呼肠孤病毒感染相关的疫病

呼肠孤病毒感染的宿主范围逐渐扩大,现已成为危害养鸭业的重要传染病之一.近年来,呼肠孤病毒所能感染的鸭的品种呈增多的趋势,临床病型亦有所改变.根据流行病学、病理变化、病毒分离鉴定及试验感染结果,我国养鸭生产中与鸭呼肠孤病毒感染相关的疫病主要有以下4种,分述如下.     

检测鸡血清多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条的研制与应用

为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术,本研究采用胶体金标记兔抗鸡Ig G,制备金标垫,将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔Ig G抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线,优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结果显示,胶体金标记兔抗鸡Ig G的最佳p H为8.5,最佳标记浓度为7μg/mL;r PlpB和羊抗兔Ig G抗体的最佳使用浓度均为0.2 mg/m L。利用该方法检测SPF鸡血清,鸡Pm、鸡大肠杆菌、鸡沙门菌、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒阳性血清,结果显示仅鸡Pm阳性血清检测为阳性,其他均为阴性,表明CGTS的特异性强。将琼脂扩散(AGP)效价为1∶16的鸡Pm阳性血清2倍倍比稀释后以CGTS检测,结果显示1∶320倍稀释仍检测为阳性,表明CGTS的敏感性较高。检测鸡Pm阳性血清和SPF鸡血清时,同批次不同试纸条之间、不同批次之间均无差异,表明该方法的重复性好。对89份鸡血清采用CGTS和间接ELISA检测,结果显示,二者阳性符合率为91.5%,阴性符合率为100%,总符合率为94.4%。禽霍乱灭活疫苗免疫后14 d,66.7%的鸡采...     

一株鹅细小病毒全基因特征分析

根据GenBank登录的鹅细小病毒基因序列和基因组结构特征,采用PCR技术扩增获得一株鹅细小病毒株（Goose parvovirus,GoPV）全基因序列,为中国大陆地区首次报道。GoPV株病毒全基因大小为5106nt,其基因组5’端和3’端均含有相同的末端倒置重复序列（inverted terminal repeats, ITR）,ITR全长为444nt。GoPV基因组主要由左右两侧两个开放阅读框组成,左侧编码非结构蛋白（non-structureprotein,NS）NSl和NS2,右侧编码3种结构蛋白（viral structural protein,VP）VP1、VP2和VP3。NS基因全长为1884nt（537-2420nt）,其中NS2全长1356nt（1065～2420nt）;VP基因全长2199nt（2439-4637nt）,其中Ⅵ叼全长1764nt（2874-4637nt）,VP3全长1605nt（3033-4637nt）,在其右侧的ITR前有一个Poly（A）的尾。GoPV株病毒全基因和欧洲疫苗株（EU583392（VG32／1,Europe））核苷酸同源性最高,高达98．6％。本研究为进一步研究GPV分类地位以及进化关系提供依据,也为研究GPV强毒株和疫苗株之间生物学特性以及GPV治病机理和开发基因工程疫苗奠定基础。     

1、2型鸭疫里默氏菌外膜蛋白分析

采用超声波裂解和超速离心法提取30株鸭疫里默氏菌(Ra,1型和2型各15株)的外膜蛋白(OMP),经SDSPAGE凝胶电泳分析,以上2个血清型Ra的OMP均由13个蛋白多肽组成,其分子质量大小为20-100ku,相同血清型的电泳图谱相似,不同血清型的电泳图谱差异较大.经软件分析,1型RaOMP的主要条带有5条,其分子质量分别为95.0、87.7、73.2、55.4、49.8ku,占OMP总量的60.1%;2型RaOMP的主要条带有4条,其分子质量分别为95.5、53.1、50.0、22.4ku,占OMP总量的62.6%.2个血清型菌株有10个蛋白多肽的分子质量大小相似,但含量不同,另有3个蛋白多肽的分子质量差异明显.     

鸭Ⅰ型副黏病毒病弱毒疫苗株的培育

以与报道的鹅源Ⅰ型副黏病毒和鸭源Ⅰ型副黏病毒基因序列同源性高、而与鸡新城疫病毒基因序列同源性低的鸭源Ⅰ型副黏病毒强毒株,通过紫外线照射和番鸭胚、SPF鸡胚及其成纤维细胞传接数十代后,经IVPI、ICPI测定和F基因序列分析为弱毒.     

鹅感染Ⅱ型鸭疫里默氏菌的诊治

在我省,鸭疫里默氏菌病(RA)主要侵害2～5周龄雏鸭。最近,自福州市闽侯县的某鹅场病死鹅脑内和肝脏中分离到Ⅱ型鹅瘟里默氏菌。2002年11月底,闽侯县某鹅场饲养长乐灰鹅200只,于12日龄时发病,病鹅精神萎顿、食欲不振、拉白色稀粪、后躯下坐和张口呼吸,病重鹅表现摇头、颤抖、转圈,至15日龄时已发病32只,发病率为16%,病死率37.5%。心包积液,心包膜增厚,粘附有一层灰白色纤维素性渗出物与胸骨相连;肝脏表面覆盖一层灰白色渗出膜,易剥离;气囊增厚,有淡黄色干酪样物附着;脑外膜充血、淤血。无菌取病死鹅脑组织和肝脏,分别接种于自制血清马丁琼脂…     

禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因的克隆表达及抗原性鉴定

为了对禽多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白H(Omp H)的免疫学活性进行鉴定,本研究根据已发表的多杀性巴氏杆菌X-73株(U50907.1)设计了两对引物,用PCR方法扩增了禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株的Omp H,扩增片段为1 348bp(ORF为1 056bp)。扩增的Omp H与GenBank中登录号为AE004439.1(Pm70株)、EF635422.1(C44-1株)、EU016232.1(P52株)、JQ082510.1(XJ121株)、U50907.1(X-73株)、U52200.1(P-1059株)的序列比对分析结果表明,其核苷酸同源性范围在80.2%~98.4%,氨基酸同源性范围在79.6%~98.5%。扩增了去信号肽的Omp H基因,构建原核重组表达质粒pET-Omp H,转化BL21并诱导表达,SDS-PAGE结果表明,表达蛋白约为56ku,与预期分子量的大小相符;蛋白免疫印迹试验结果表明,该蛋白具有良好的免疫学活性,为建立禽Pm血清学检测方法以及禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白疫苗的研究奠定了基础。