HPLC测定饲料源小肽产品中赖氨酸含量

将蛋白饲料源小肽产品按照GB/T 18246-2000中酸水解法进行水解及相应的处理,获得氨基酸混合液与2,4-二硝基氯苯(CDNB)衍生化反应后,其中赖氨酸生成二硝基氯苯赖氨酸(DNP-LYS),经日本岛津SPD-10AVG高效液相色谱(HPLC),C18柱分离,UV350 nm检测,衍生后氨基酸混合物得到较好的分离,赖氨酸最低检出量2μg.     

环境雌激素对胚胎发育的影响

胚胎发育是非常复杂而且变化极为协调的生理过程。在此过程中,外界环境中多种因素的影响都可能导致胚胎发育异常、胚胎死亡及胎儿畸形。随着环境污染的日趋加重,环境雌激素对胚胎发育的影响日益受到科学家的重视。但环境雌激素对胚胎发育的作用机制尚未完全阐明。文章就环境雌激素对胚胎发育的影响及其机制进行综述。     

牛MyoG基因启动子的克隆及功能的初步分析

本研究旨在比较日本和牛MyoG基因的不同长度片段启动子的活性强弱并初步探讨其中的机制。根据GenBank已公布的牛MyoG基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增日本和牛MyoG基因的一系列启动子缺失序列,构建重组克隆载体pMD18-T-MyoGpro,对阳性克隆进行限制性酶切鉴定、测序及生物信息学分析,进而构建一系列启动子缺失片段的pGL3-MyoGpro双荧光素酶表达载体,转染牛肌源干细胞(MDSCs)和牛胎儿成纤维细胞,并进行双报告基因活性检测。结果表明,日本和牛MyoG基因的166～2 125bp启动子都能不同程度的启动双荧光素酶报告基因在牛肌源干细胞中的表达,且具有肌肉特异性。通过生物信息学分析得知日本和牛MyoG启动子序列中有1个TATA盒,15个E-box,并可能含有MyoD、MEF2、MEF3、MTBF、TEF1、PRDF、Sp1、多个SRF、ERE、GRE及多个Oct-1等转录因子调控结合位点,本试验通过比较不同长度启动子片段的活性并结合对上述转录因子的分析,认为这些转录因子可能对启动子活性起着重要的调控作用。对牛MyoG基因启动子的克隆与功能和序列分析为进一步研究MyoG基因的表达调控奠定了基础。     

不同中药对奶牛乳腺上皮细胞抗氧化能力的影响

为研究中药对奶牛乳腺抗氧化能力的影响,选取7种中草药(王不留行、黄芪、漏芦、木通、通草、蒲公英、甲珠)测定其对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞抗氧化能力的影响.测定了奶牛乳腺上皮细胞中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)质量分数、一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果表明中药组奶牛乳腺上皮细胞SOD、GSH-Px和CAT活性高于或显著高于正常对照组(P＞0.05,P＜0.05,P＜0.01),MDA、NO、NOS质量分数低于或显著低于正常对照组(P＞0.05,P＜0.05,P＜0.01).中药能减少脂质过氧化产物MDA的生成,同时提高奶牛抗氧化酶活性,增强了奶牛的抗氧化能力.     

不同中药提取物对小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白表达的影响

为探讨中药对小鼠乳腺上皮细胞泌乳功能的影响,选取5种与泌乳相关的中药(王不留行、甲珠、通草、蒲公英、漏芦)研究其对体外培养的小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白表达的影响。采用荧光定量RT-PCR及毛细管电泳技术分别对β-酪蛋白的mRNA和蛋白表达水平进行检测,并应用激光共聚焦显微镜技术检测泌乳信号转录因子Stat5的含量变化。结果表明,通草、蒲公英和漏芦能显著促进β-酪蛋白的表达,王不留行和甲珠能极显著促进小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白的表达。提示王不留行、甲珠和通草可通过影响乳腺上皮细胞乳蛋白基因的表达而促进泌乳,其机理尚待进一步研究。     

牛肌肉抑制素前肽对牛肌卫星细胞增殖的影响

通过PCR扩增目的基因,构建真核表达载体,利用PEI转染牛肌卫星细胞,转染后48与72 h通过CCK-8与流式细胞术检测细胞增殖的变化,通过RT-PCR检测目的基因的表达,通过RT-PCR与Western blot检测下游基因P21,CDK2的表达变化.结果表明,在两个时间点,实验组细胞活力明显升高(P<0.01),G0/G1期细胞所占的比例明显下降(P<0.01),S期细胞所占比例明显上升(P<0.01),MSTN前肽基因有大量表达,P21表达下降,CDK2表达上升.结果揭示,在牛肌卫星细胞中,MSTN前肽通过下调P21,上调CDK2的表达量促进细胞增殖.旨在揭示牛MSTN前肽基因对牛肌卫星细胞(MDSC)增殖的影响,为后续的转基因牛试验提供理论依据.     

天蚕素B基因在奶山羊乳腺上皮细胞系中的稳定表达

采用RT-PCR方法,以家蚕cDNA为模板扩增天蚕素B(Cecropin B)基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pECFP-C1,构建CecropinB真核表达载体,经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染奶山羊乳腺上皮细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的奶山羊乳腺上皮细胞系,用RT-PCR及琼脂糖扩散试验检测抗菌肽CecropinB基因及其表达活性。结果成功构建了pECFP-B真核表达载体,并建立了稳定转染的奶山羊乳腺上皮细胞系,成功地表达了目的基因,为进一步研究CecropinB的功能奠定良好的实验基础。     

奶牛乳腺发育与泌乳过程中能量代谢的变化

为确定奶牛乳腺发育与泌乳各时期能量代谢状况及建立生物调控技术,应用试剂盒及高效液相色谱法(HPLC),对奶牛乳腺发育与泌乳过程中能量代谢重要指标进行了测定。结果表明,己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、甘油三酯、葡萄糖、乳糖、β-酪蛋白、ATP酶、能荷值和NADPH等指标在不同时期都存在差异,即青春期14个月时的葡萄糖浓度最高,妊娠4个月时的NADPH含量最高,围产前期时的甘油三酯含量、乳糖含量和能荷值最高,泌乳7 d时异柠檬酸脱氢酶活性和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性最高,泌乳140 d时的Ca2+Mg2+-ATP酶的活性最高,泌乳280 d时的Na+K+-ATP酶活性最高,退化期3 d的β-酪蛋白含量最高,退化期30 d时的己糖激酶活性最高。揭示了奶牛乳腺发育与泌乳过程中能量代谢的变化规律。     

乳脂合成前体对奶牛乳腺上皮细胞亚细胞蛋白质组学影响

向奶牛乳腺上皮细胞中添加β-羟基丁酸钠,利用双向电泳技术进行细胞亚细胞蛋白质组学方面的研究。结果表明,β-羟基丁酸钠对奶牛乳腺上皮细胞亚细胞蛋白表达有显著影响。Imagemaster6.0软件分析出4个表达上调的蛋白点,鉴定分别是ENO1、α-glucosidase、plastin3和ARPC2。通过实时荧光PCR检测以上蛋白在mRNA水平的表达差异,结果均有不同程度的提高,其中以ENO1、α-glucosidase及Arpc2提高显著(P<0.05)。研究所筛选出的蛋白,将有助于进一步揭示奶牛乳腺上皮细胞增殖和泌乳机制。     

王不留行增乳活性单体对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳性能的影响

应用CASY细胞分析仪及HPLC分别检测王不留行邻苯二甲酸二丁酯对乳腺上皮细胞增殖、细胞活力及乳腺上皮细胞分泌β-酪蛋白、乳糖的影响,研究王不留行增乳活性单体邻苯二甲酸二丁酯对奶牛泌乳中期乳腺上皮细胞增殖和泌乳性能的影响。试验结果表明,王不留行增乳活性单体成份邻苯二甲酸二丁酯对奶牛乳腺上皮细胞的增殖和细胞活力提高均显著(P0.05);能显著提高乳腺上皮细胞β-酪蛋白的表达(P0.05),也能提高乳糖的分泌(P0.05,P0.05)。因此,王不留行增乳活性单体邻苯二甲酸二丁酯可显著提高乳腺上皮细胞的增殖和泌乳能力。