应用多因子正交试验筛选野生七姊妹离体培养条件

应用正交设计法研究了植物生长调节剂、硝酸银和活性炭等对七姊妹愈伤组织的诱导、不定芽诱导 和生根培养的影响。结果表明:最佳愈伤组织诱导培养基为MS 2．4-D 0．8mg／L 6-BA 0．2 mg／L 蔗糖 30g／L 琼脂7．0 g／L;不定芽诱导最佳培养基为MS NAA 0．1mg／L CPPU0．8 mg／L AgNO34.0mg／L 蔗糖30g／L 琼脂7．0 g／L,分化率为95％,增殖率为5．5;最佳生根培养基为1／4MS NAA 0．3 mg／L IBA 0．3 mg／L 蔗糖20g／L 琼脂4．0 g／L,生根率为90％。     

罗氏沼虾原种在广西水产研究所初显优势

广西水产研究所于去年引进新加坡天然野生罗氏沼虾原种试养，现已取得初步结果。今年进行多批繁殖育苗观察，亲虾抱卵饱满、卵粒不易脱落。孵化出来的幼体体色光泽透亮、食欲好、活力强、个体均匀、健壮、成活率高。     

尼罗罗非鱼外周血白细胞总RNA的分离及反转录验证

应用Trizol一步法对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)外周血白细胞总RNA提取方法进行优化,通过β-ac-tin基因反转录对所分离到的总RNA进行质量验证,并对mRNA的冻干浓缩进行了探讨,确定了一套快速、高效的尼罗罗非鱼外周血白细胞总RNA分离和mRNA浓缩体系。结果显示:获得的总RNA纯度较高,OD260/OD280均在1.9~2.0之间;甲醛变性电泳显示,总RNA完整性良好,28S与18S比值为2∶1;总RNA的分离量与起始白细胞量成正比,每毫升Trizol最大裂解量为1×108个白细胞,可得到总RNA量约为90μg;总RNA的分离量在前四个小时随着沉淀时间的增长而增加,并成功进行了β-actin基因的反转录。mRNA的分离率为1.08%,通过冻干浓缩成功使其浓度提高9倍。结果表明:分离到的总RNA质量可充分满足下游分子生物学实验要求,所建立的mRNA浓缩方法简单易行,可完全解决mRNA起始浓度低的难题。     

甜菜碱对尼罗罗非鱼诱食促长的研究

本试验以罗非鱼基础饲料添加不同浓度甜菜碱纯品及不同复配品组成配合饲料，在４０天饲养试验中所得结果表明，饲料中添加０３％的甜菜碱能明显促进罗非鱼的生长。     

罗非鱼热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达与纯化

以尼罗罗非鱼血液mRNA反转录获得编码罗非鱼Hsp70完整cDNA,重组构建罗非鱼真核表达载体pPIC9K/rtHsp70;在毕赤酵母Pichia pastoris KM71中表达重组罗非鱼的热休克蛋白70（rtHsp70）,对表达上清液进行SDS-PAGE及Western blot分析;采用亲和层析、HiTrap Desalting预装柱脱盐纯化目的蛋白。结果表明：克隆至pMD载体上的基因与目的基因完整编码区序列完全一致;诱导表达上清液经SDS-PAGE及Western blot分析,上清液中蛋白条带大小与目的蛋白相对分子质量大小一致;每升诱导上清液可以获得约2 mg纯化蛋白。本研究中获得的rtHsp70毕赤酵母工程菌及纯化的rtHsp70为后期rtHsp70-肽疫苗研究奠定了基础。     

巴西鲷人工繁殖技术

在广西南宁对巴西鲷进行人工繁殖，2000年4月－6月共催产亲鱼4批次共249尾，雄145尾，雌104尾，产卵730万粒，平均受精率76．54％，获得苗454万尾，孵化率68％。另外对巴西鲷鲷胚胎发育进行了连续观察和显微照相，记录各种时序及其特征。初步了解了巴西鲷在人工繁殖条件下胚胎发育的基本规律。     

罗非鱼海豚链球菌疫苗及其免疫效果的研究

用筛选到的海豚链球菌(Streptococcus iniae)临床分离菌株CMS005,甲醛灭活制备成疫苗并对其进行了注射、浸泡和口服免疫奥尼罗非鱼的效果研究。结果显示:实验室水族箱试验的注射、浸泡和口服免疫的最佳免疫保护率分别为90.5%、61.9%和14.3%,水泥池小网箱试验的最佳免疫保护率分别为100%、86.1%和66.7%。免疫剂量对浸泡免疫效果的影响大于注射和口服免疫,加强免疫可显著提高浸泡和口服免疫效果,超声波处理可以提高浸泡免疫效果。注射和口服免疫7 d和15 d后均可控制罗非鱼海豚链球菌病的继续发生;未免疫组罗非鱼月累计死亡率为4%~16%,而免疫组罗非鱼月累计死亡率低于0.5%;疫苗产生的免疫保护力可持续2~3个月。     

黄沙鳖良种选育研究

【目的】探讨黄沙鳖良种选育技术,为建立黄沙鳖良种场奠定基础。【方法】2004年,从广西横县、灵山、桂平及南宁明阳农场等黄沙鳖养殖产区挑选黄沙鳖表型特征明显、体重1.0kg以上的亲鳖200只,雌雄比3∶1,不同地方的雌雄鳖分别配对（A♀×B♂或B♀×A♂）,人工繁殖,根据表型特征、遗传性状和生长性状等进行选育,挑选色斑清晰对称、体型圆、体色黄、裙边宽、生长快的个体进行养殖。【结果】经稚鳖、幼鳖、成鳖、后备亲鳖等生长阶段的筛选,其选留率和成活率分别为35.3%、69.6%、80.7%、91.3%和82.1%、81.6%、95.7%、97.2%,最终选育获得黄沙鳖纯系亲鳖450只,且经繁殖验证,选育亲鳖繁殖的鳖苗具有明显亲体遗传性状,合格率达90.2%。【结论】采取群体选育的方法,从不同群体挑选亲鳖进行繁殖,通过对其后代各生长阶段不断地筛选,可选育出种质优良的黄沙鳖纯系群体。     

七种常用渔药及组合对罗非鱼致病性海豚链球菌的抗菌试验

探讨了7种常用抗菌渔药对罗非鱼致病性海豚链球菌的体内外抗菌作用.采用二倍稀释法测定了7种渔药对致病菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);在初筛基础上以MIC为单位,1×MIC、5×MIC、10×MIC和20×MIC下平板抑菌圈直径为参数,分别比较所筛选5种药物抗菌效果并优化最佳参数;利用优化的最佳参数比较5种药物单独用药与联合用药对海豚链球菌的抑菌效果;并通过拌饵投喂给药方式对罗非鱼进行5种药物治疗性给药试验.结果表明,抗菌先锋对海豚链球菌的MIC和MBC最小,分别为6.4、12.8μg/mL,其次是伯乐立康,均为12.8μg/mL;而鱼康和肠炎烂鳃灵即使在1638.4μg/mL下也无抗菌效果.5倍MIC下抑菌圈直径为本试验筛选抗菌药物的最佳参数.5MIC时,海豚链球菌对伯乐立康和抗菌先锋敏感,对菌必清、菌毒康和海鱼安中度敏感.菌毒康与海鱼安的联合抗菌效果最佳.鱼体内抗菌试验结果表明,抗菌先锋和伯乐立康的治疗有效率超过75%,达到了理想的治疗效果,是防治罗非鱼海豚链球菌病的首选药物.     

黄沙鳖良种选育研究

【目的】探讨黄沙鳖良种选育技术,为建立黄沙鳖良种场奠定基础。【方法】2004年,从广西横县、灵山、桂平及南宁明阳农场等黄沙鳖养殖产区挑选黄沙鳖表型特征明显、体重1.0 kg以上的亲鳖200只,雌雄比3∶1,不同地方的雌雄鳖分别配对(A♀×B♂或B♀×A♂),人工繁殖,根据表型特征、遗传性状和生长性状等进行选育,挑选色斑清晰对称、体型圆、体色黄、裙边宽、生长快的个体进行养殖。【结果】经稚鳖、幼鳖、成鳖、后备亲鳖等生长阶段的筛选,其选留率和成活率分别为35.3%、69.6%、80.7%、91.3%和82.1%、81.6%、95.7%、97.2%,最终选育获得黄沙鳖纯系亲鳖450只,且经繁殖验证,选育亲鳖繁殖的鳖苗具有明显亲体遗传性状,合格率达90.2%。【结论】采取群体选育的方法,从不同群体挑选亲鳖进行繁殖,通过对其后代各生长阶段不断地筛选,可选育出种质优良的黄沙鳖纯系群体。