猪链球菌的鉴定及其PCR分型方法的建立

自2001年7月份,浙江省和周边地区大面积爆发了一种主要表现为病猪持续高温、食欲废绝、皮肤发红为主要特征的“猪高热综合症”,给养殖业带来了巨大的经济损失.经研究,“猪高热综合症”是一种多病原参与的传染病,其中包括PRRSV、PCV-2等,此外细菌在其中也起一定的作用.最近,我们分离到了2株细菌,分别命名为zj1株和zj2株,经鉴定均为猪链球菌,然后参考文献设计了一对引物,用于对常见血清型进行分型PCR,结果表明zj1株猪链球菌为血清2型,而zj2株不是所设计引物可以分辨的血清型.     

兔大肠杆菌异位感染的诊断及病原鉴定

随着养兔业规模的扩大．气候变化、环境污染等的加剧．兔的条件性细菌病也越来越多。同时．异位感染、继发感染等流行形式和菌株耐药性的出现．也使兔病的流行和防治变得越来越复杂，给养兔业造成较大的经济损失。现将浙江省2例兔大肠杆菌异位感染的诊治情况报道如下。     

猪场空气细菌数量与猪高热综合征的相关性研究

自2001年入夏以来,浙江、上海等许多地区的猪群中流行以持续高热、气喘、皮肤发红为主要特征的猪"高热综合征",给养猪业带来了巨大的损失.但到目前为止,其主要病原依然未被确定.为了研究空气中细菌含量与该病的发生和严重程度之间的关系,我们对浙江省几个不同规模、不同发病情况的猪场的空气细菌含量进行了测试.结果发现:该病的发生及严重程度与猪舍内空气的细菌含量存在着明显的正相关性.     

蜂粮酿制过程中细菌的变化规律

采用营养琼脂培养基、改良"LB"培养基、MRS(4.5)、MRS(6.5)培养基分别对中国茶(Camelliasinensis)的手采花粉(floral pollen)、蜂花粉(corbicular pollen)和不同酿制时间的蜂粮(bee bread)样品中的细菌进行菌落计数和分析.酿制初期的蜂粮样品在MRS(4.5)培养基和MRS(6.5)培养基上生长的细菌菌落数占优势,随酿制时间的延长而迅速下降;5、10、15、21 d蜂粮样品在改良"LB"培养基上生长的细菌菌落数占优势;60 d蜂粮样品在营养琼脂培养基上生长的细菌菌落数占优势.     

耐热鸡新城疫V4苗对高母源抗体雏鸡的口服免疫试验

用两个剂量分别以拌料和连续添加的方式，对具新城疫高母源抗体的雏鸡进行耐热新城疫弱毒Ｖ４苗的口服免疫试验，并用Ⅳ系苗滴鼻滴眼免疫作对照．血清ＨＩ抗体测定结果显示，４个试验组的ＨＩ抗体水平在全程的８次测定中均较低且消长平缓，攻毒试验显示试验组与对照组相当，均具有较高的保护率．在进行免疫试验的同时，对试验鸡进行称重，经Ｖ４苗免疫的试验组的体重比对照组增加．     

嗜水气单胞菌细胞提取物特性的分析

对六株嗜水气单胞菌的全细胞和外膜成份在不同的培养条件下进行SDS-PAGE、免疫转印分析.在同一培养条件下6个供试菌株全细胞的蛋白质电泳图谱不同.同一菌株在五种不同的培养条件下,其蛋白质电泳图谱相似但有差异.6株菌株的细菌外膜提取物的蛋白质电泳图谱不同,同一菌株在5种不同的培养条件下,其蛋白质电泳图谱相似但有差异,但所有的图谱均具有34 kDa和30 kDa的条带.用Schiff's试剂,银染及生物素标记(BS-1,ConA,UEA-1)法测定及分析提取物中糖或碳水化合物的特征.生物素标记及经蛋白酶K处理后的所有菌株的提取物均显示不同分子量碳水化合物的条带,但具有相同分子量的条带,其中32 kDa条带被三种生物素及银染所显示,而34 kDa仅被生物素BS-1和UEA-1所识别.经Schiff's试剂染色后,仅出现少量的条带.用免疫转印法测定菌体提取物的抗原性,结果显示,提取物有多条不同的条带被两种血清所识别,且用活菌制备的血清比死菌的要强得多.所有菌株在不同培养条件下的提取物均具35 kDa条带被鱼血清所识别.所以,35 kDa条带可能是嗜水气单胞菌的共同抗原.同时,用ELISA法测定,证明鱼血清与其它菌株间有较强的交叉反应.     

规模猪场猪瘟及猪蓝耳病的免疫效果分析

正猪瘟(HC)是由猪瘟病毒引起的急性、烈性传染病,发病率和死亡率可达90%以上,世界动物卫生组织(OIE)规定为A类传染病,我国将其列为一类动物疫病。猪蓝耳病(PRRS)自2001年传入我国猪场后,生猪疫病的防治变得更为复杂,对猪瘟的免疫效果影响较大,个别猪场时有零星疫情发生,造成了一定的经济损失。为进一步研究猪瘟及猪蓝耳病疫情的防控措施,特进行本试验,现报告如下。     

鹅圆环病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立鹅圆环病毒(GoCV)抗体的检测方法,本研究通过原核表达重组核衣壳(Cap)蛋白,将纯化的该重组蛋白作为ELISA检测的包被抗原,利用交叉反应性,以羊抗鸡IgG(HRP-IgG)作为二抗,经反应条件的优化,建立了检测鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法。确立的ELISA反应最适条件为:抗原包被浓度为2.05μg/mL,待检血清稀释度为1∶50,HRP-IgG稀释度为1∶2000,待测血清和二抗均于37℃反应1.5h,底物于室温显色10 min。经38份阴性血清检测确定阴阳性临界值为0.25。特异性试验结果显示,该方法与大肠杆菌、新城疫、禽流感H5和H9、小鹅瘟、鹅副粘病毒抗原阳性血清均无交叉反应;重复性试验结果显示,其批内和批间变异系数均小于10%。应用该方法检测了从4群GoCV PCR检测阳性种鹅群采集的血清,结果显示其血清阳性率在60.0%～90.9%。本实验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和重复性,为进一步开展GoCV流行病学调查提供了一种便捷可靠的手段。     

猪圆环病毒复合PCR检测方法的建立

根据已发表的PCV—1和PCV-2全基因组序列，设计了3条引物，组成PCV-2的特有引物对和PCV-1、PCV-2的共有引物对，分别扩增长度为472bp和339bp的片段。为验证PCR扩增的特异性，将472bp的扩增产物纯化后，克隆到pMD18-T载体，转化大肠埃希氏菌TG1，对阳性克隆进行酶切及PCR鉴定，并测序。将该序列递交NCB1进行BL-AST同源序列比较，发现它与美国、加拿大及我国台湾的PCV-2毒株核苷酸序列的同源性均在99％以上，与PCV—1毒株的同源性为86％。结果显示，该方法最少可用于3μg病料组织和0．75pg DNA的PCV-2检出．具有很高的灵敏性。应用该PCR方法检测了浙江省和上海市47份“猪高热综合征”病料，PCV-2感染阳性率为36．17％，PCV—1单独感染阳性率为34．04％。