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犬瘟热病毒Guizhou株血凝素基因的克隆及序列分析 总被引:8,自引:0,他引:8
参照已发表的文献合成1对引物,以犬瘟热病毒Guizhou分离株感染Vero细胞收获病毒提取的RNA为模板,RT-PCR扩增获得血凝素蛋白基因(H)901~1661位大小为761bp的片段,并将PCR扩增产物进行克隆和测序。将Guizhou株与GenBank数据库中的31株CDV及国内NanjingOP株的H基因序列进行同源性和系统发生树分析,发现Guizhou株的H基因部分序列与疫苗毒株Convac和Onderstpoort的同源性最低,只有90%;与日本野毒株Tanu96、KDK-1、Hmanatsu、Yanaka、UENO的同源性较高,为96%~98%;且与国内从大熊猫和小熊猫分离的野毒株GP和LP的同源性也较高,为98%和96%。系统发生树分析显示,Guizhou株与国内野毒株GP和LP,及日本的5个野毒株应属同一类,其中和GP株基因型最近,推测这些毒株间有更近的共同祖先。因此怀疑该病毒较适应于野生动物,且在我国某些地区的野生动物中可能存在自然疫源性传播。 相似文献
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高母源抗体雏鸡对鸡新城疫V4苗的免疫应答 总被引:1,自引:0,他引:1
高母源抗体雏鸡对鸡新城疫V4苗的免疫应答余旭平朱凤君纪素华陈亚香应琦华徐仲均(浙江农业大学动物科学学院,杭州310029)新城疫病毒V4株是澳大利亚学者于1967年自健康鸡群中分离到的自然无毒株[1],该株病毒的一个显著特点是它的热稳定性,经进一步选... 相似文献
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参考已发表的番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus, mDRV)的S4序列,自行设计1对扩增σC基因的引物,对mDRV ZJ99株的RNA抽提物进行RT-PCR扩增,成功地获得了843 bp特异性的扩增片段(GenBank: AY619690)。将PCR产物克隆测序,BLASTn比较结果显示, mDRV ZJ99株σC基因与福建MW9710株对应基因的同源性为98%,与法国89026和89330株对应基因的同源性分别为92%和93%; BLASTp比较结果显示, ZJ99株编码的σC蛋白与MW9710、89026和89330株相应蛋白分别具有94%、89%、 89%同一性(identity)和95%、92%、93%相似性(similarity)。进一步将σC基因亚克隆至原核表达载体pET28a, 转化大肠杆菌(Escherichia coli )BL21(DE3),IPTG诱导阳性重组子,SDS-PAGE电泳检测发现, σC蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式高效表达,目的蛋白的表达量可达到细菌总蛋白的22.9%。 相似文献
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应用体内诱导抗原技术检测细菌体内表达基因的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
细菌的致病过程是与宿主细胞相互作用的复杂过程,它涉及病菌众多毒力基因产物即毒力因子的协同作用,并能与宿主的免疫系统一同进化[1]。目前对很多细菌的毒力因子和致病机制的研究虽取得了一定进展,但对其毒力因子的具体数量、本质和细菌如何逃逸宿主免疫反应并最终致病的分子机理等尚不清楚,这正是抗菌药物和疫苗研发滞后的症结所在。为研究细菌的毒力因子,人们已建立了许多方法,如克隆筛选法、调控筛选法等,这些方法均在体外进行,并已成功地鉴定出许多细菌的致病基因。然而,致病菌在宿主体内所处的环境和体外有着明显不同,为了适应这种环… 相似文献
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用普通BHI和缺铁BHI培养基培养禽多杀性巴氏杆菌C48-19(血清1型)、P1059株(血清3型),提取外膜蛋白(OMPs),SDS-PAGE电泳比较不同培养条件下两株细菌的外膜蛋白,发现缺铁培养时2株细菌均增加了87、81、79、64、60.5ku铁调控外膜蛋白(IROMPs)。以C48-19株攻毒后耐过的鸡血清作为抗体进行免疫印迹,检测到其中的87、79和60.5ku蛋白是2株细菌共同的、具有交叉免疫反应性的IROMPs,推测这3种蛋白可能是这2个菌株的共同抗原,并可能在C48-19感染的鸡体内特异表达;对鸡胚尿囊液中培养的C48-19株OMPs的SDS-PAGE电泳和免疫印迹试验,也观察到类似IROMPs的表达。这些IROMPs的发现为亚单位疫苗的研制提供了候选蛋白。 相似文献