鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用

为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒(DTMUV)抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku。Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件。重组抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑。该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21%~7.27%和3.4%~7.2%,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性。用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3%。     

集约化饲养瘦肉型商品猪饲养标准验证试验报告—Ⅱ酮体品质与无脂瘦肉增重及其数学模型估算

试验选取广东省4家典型集约化养猪场400头[杜×(长×大)]三元杂交早期断奶仔猪,用广东省农科院畜牧所提出的饲养标准初稿配制饲粮,分3～8、8～20、20～50、50～90kg 4体重阶段饲养,测定各阶段生产性能,同时分别于20及90kg体重进行屠宰试验。测定宰前活重、热胴体重、瘦肉重、骨重、皮重、脂肪重、最后肋背膘厚、第十肋背膘厚及眼肌面积、瘦肉组织粗脂肪与粗蛋白质含量。分别按如下三种方法求得试验猪标准化胴体无脂瘦肉增重:①实测法,通过测定胴体瘦肉重及瘦肉脂肪含量求得;②估测法I,通过热胴体重、第十肋背膘厚及眼肌面积利用公式求得;③估测法Ⅱ,通过热胴体重、最后肋背膘厚利用公式求得。将求得的标准化胴体无脂瘦肉增重输入NRC(1998)营养需要模型进行运算。 试验结果表明:20kg猪瘦肉率为65.10％,第十肋背膘厚与眼肌面积分别为0.69cm与11.37cm2,胴体瘦肉粗脂肪、粗蛋白质含量分别为6.07％、17.01％,胴体无脂瘦肉粗蛋白质含量18.11％;90kg猪瘦肉率为65.95％,最后肋背膘厚、第十肋背膘厚与眼肌面积分别为2.00cm、2.36cm与42.38cm2,胴体瘦肉脂肪、粗蛋白质含量、胴体无脂瘦肉粗蛋白质含量分别为12.02％、19.81％、22.52％。通过实测法、估测法I、估测法Ⅱ求得试猪标准化胴体无脂瘦肉增重分别为291.0、2     

猪繁殖与呼吸综合征病毒NB/04株全基因组分子特征分析

对猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome viurs, PRRSV）分离株NB/04的全基因组序列测定与分析。该毒株基因组全长15408bp,包含9个开放式阅读框,5’Untranslating Region(UTR)含有189nt,3’UTR含有150nt,其中包含28个Poly（A）。基因组序列分析结果表明,该毒株的Nsp2存在3个核苷酸缺失,3’UTR缺失一碱基。通过与国内外美洲型PRRSV分离株比对分析可知,非结构蛋白区的Nsp2和结构蛋白区的ORF5变异率最大。特别是Nsp2与国内主要分离株的氨基酸相似性在79.3%-96.4之间,ORF5与国内主要分离株的相似性介于86.1%-95.5%。依据Nsp2的推导氨基酸序列进行的系统进化分析可知,NB/04属于北美洲基因型,与BJ-4属于同一分支,而与中国标准株Ch-1a分属于不同的分支,表明浙江PRRSV已发生较大的变异。本研究结果丰富了我国PRRSV毒株的基因组信息数据,为深入研究该毒株的遗传变异与生物学特性之间的关系奠定了基础。     

种鸡免疫H9亚型禽流感油乳剂灭活苗的最佳抗体基础水平探讨

采用禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗对种鸡进行了免疫,监测免疫后H9抗体滴度的变化,结果表明在5log2的抗体水平下,注射禽流感疫苗效果最好。     

大豆黄酮的生理功能及其作为饲料添加剂的应用

介绍了大豆黄酮的来源、分布、理化性质及其在动物体内的吸收与代谢,重点阐述了其雌激素和抗雌激素样作用、促生长作用、抗氧化作用、调节动物繁殖、提高机体免疫力及对内分泌系统影响等多种生理功能及其作用机制,初步探讨了大豆黄酮作为饲料添加剂的应用前景。     

氯化钙对马铃薯试管苗生长和生理指标的影响

在添加不同浓度(0、3、6、9、12、15mmol/L)氯化钙的MS培养基上,研究了钙对马铃薯栽培品种"新大坪"试管苗的生长和生理指标的影响.结果表明:培养基无钙时,试管苗生长势很弱,其株高、有效茎节数、叶片数、干鲜质量、可溶性糖和可溶性蛋白含量均较3mmol/L处理(MS正常钙用量)大幅下降.当MS培养基中添加不同浓度的氯化钙后,上述指标均呈先升高后下降的变化趋势,其中以9mmol/L处理的各项指标表现最佳.MS培养基中添加9mmol/L氯化钙是马铃薯栽培品种"新大坪"试管苗生长的最佳钙浓度.     

转AtNHX1基因马铃薯田间盐胁迫下的生理反应及耐盐性的综合评价

以转AtNHX1基因的8个马铃薯株系(1、2、4、6、8、15、18、19)和未转基因的"甘农薯2号"(CK)为材料,在正常地以及全盐含量分别为0.56%、0.29%的高盐和中盐地上种植,分析其生长和生理指标的变化,通过隶属函数法、相关分析和聚类分析等方法综合评价耐盐性。结果表明:随着盐浓度的增加,转基因株系的株高、叶面积扩展率、单株产量、叶绿素的含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及脯氨酸含量的上升幅度均高于对照植株(为对照的1.17~3.96倍)。而丙二醛(MDA)、相对电导率显著低于对照植株,为对照的63.07%~78.4%和82.7%~86.35%。根据生长和生理指标综合评价各株系的耐盐性,筛选出1个强耐盐株系和3个较强耐盐株系,各株系耐盐性由强至弱为:19158418216CK,AtNHX1的导入显著提高了大田马铃薯植株的耐盐性,利用耐盐性综合评价方法有助于耐盐株系的筛选。     

金沂蒙微生物菌肥在白菜上的适宜用量研究

以常规施肥为对照,研究了不同用量金沂蒙微生物菌肥+常规施肥对白菜株高、产量等的影响。试验结果表明,与不施用微生物菌肥处理相比,在常规施肥基础上,加施微生物菌肥提高白菜产量;考虑成本因素,建议菌肥用量在100~300 kg/667 m2。     

鸭源坦布苏病毒E蛋白的可溶性表达及免疫原性研究

用RT-PCR扩增鸭源坦布苏病毒YY5株的E蛋白基因片段,分别插入到表达载体pMBP-c、pET-GST、pET-His、pET-DsbA中,构建了一系列原核表达载体,转化人大肠杆菌E.coli Trans10或DE3(plysS)宿主菌。工程菌株经诱导后进行SDS-PAGE,结果显示MBP-E融合蛋白得到了有效表达并且以可溶性蛋白的形式存在,且能与自然感染康复的鸭源多抗和鼠源单抗反应。以MBP-E免疫小鼠制备的高免血清,在体外可以中和DDTMUV,中和抗体效价达到1:46。重组蛋白MBP-E具有良好的免疫反应原性、免疫原性和体外免疫保护特性,这为进一步研制DTMUV重组亚单位疫苗奠定基础。