CRISPR系统促进脂肪干细胞成骨分化与抑制成脂分化的研究

本研究旨在优化组织培养法分离小鼠脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells,ASCs）,为研究成骨分化和成脂分化在间充质干细胞分化过程中的相互影响奠定基础。通过细胞形态学观察、细胞生长曲线和流式仪器检测所分离获得的间充质干细胞的特性,利用CRISPR-dCas9系统在快速促进间充质干细胞成骨分化的前提下观察其对成脂分化的影响,并通过生化染色、实时荧光定量PCR和免疫细胞学等手段进行分析。结果显示,接种3~5 d后可见细胞从组织块周围爬出,光镜下可见细胞形态多为成纤维细胞样的梭形细胞,且形态单一均匀,具有较高的爬出率,可以大大提高脂肪间充质干细胞的分离效率;通过CRISPR-dCas9系统激活Runx2和Osterix基因后可以促进间充质干细胞的成骨分化,实时荧光定量PCR及油红O染色结果显示,CRISPR-dCas9系统可以同时抑制间充质干细胞的成脂分化;通过CRISPR-dCas9-KRAB系统同时抑制成骨相关基因Runx2和Osterix后可以促进成脂分化。本研究利用组织贴壁法成功获得了高纯度的脂肪间充质干细胞,具有间充质干细胞的特性和分化能力;利用CRISPR系统可以同时过表达Runx2和Osterix两个基因,可以在进成骨分化的同时抑制成脂分化,表明成脂分化和成骨分化的相关性,为基因编辑在间充质干细胞诱导分化和临床应用方面提供了新的思路和方法。     

牦牛EPF的原核表达及多克隆抗体制备

本试验旨在制备牦牛早孕因子(early pregnancy factor,EPF)多克隆抗体,为牦牛妊娠早期高效快速诊断技术研究奠定基础.采用RT-PCR方法,从牦牛胎盘和卵巢组织中提取RNA,反转录为模板后进行EPF基因扩增,并将其克隆到改造后的载体pET28-His10-Sumo上,构建pET28-His10-Su...     

幼年牦牛松果体的光镜和电镜观察

利用光镜和电镜技术对幼年牦牛松果体的组织形态结构特征进行了研究。结果表明，光镜下，幼年牦牛松果体由松果体细胞、少量的神经胶质细胞、毛细血管和神经等组成。电镜下，松果体细胞的电子致密度低，细胞质内含有丰富的线粒体、粗面内质网、滑面内质网、高尔基复合体、微管、微丝和核糖体，典型异质细胞器突触带呈球形，多位于质膜附近。神经胶质细胞内的线粒体丰富，胞体突起呈球形膨大伸入到松果体细胞之间。松果体细胞以及神经胶质细胞间均存在突触和连接复合体。牦牛松果体内的毛细血管为连续型，远腹侧血管周围可见色素细胞。     

智能通风在储粮降温中扩大应用的研究

智能通风技术初步实现了粮情监测系统功能从单一粮情监测向粮情智能控制的过度。通过将智能通风和人工通风两种储粮通风方式的降温效果、换气效果和设备能耗进行对比,得出如下结论:①智能通风能够杜绝有害通风和无效通风,并能及时控制通风降温过程中粮温的回升;②在相同时间内,与人工通风相比,经过智能通风的仓房各层粮温和总平均粮温降幅较大,温差小,全仓粮温较为均匀;③智能通风可以减小冬季通风降温过程中粮温变化幅度,延缓春季粮温回升速度,提高储粮稳定性;④与人工通风相比,智能通风的单位能耗较低。     

稻渔综合种养的科学范式

探讨不同养殖模式下金背鲤 (Cyprinus carpio var. Jinbei) 肠道菌群和鱼肉风味品质差异,对金背鲤的繁殖优化具有重要意义。采用高通量测序技术对稻田放养和池塘养殖模式下金背鲤的肠道微生物进行测序,利用液相色谱和顶空固相微萃取-气相色谱-离子迁移谱联用 (HS-SPME-GC-IMS) 技术测定其滋味物质、挥发性风味化合物,结合感觉阈值计算滋味活性值和相对气味活度值。结果显示：两种养殖模式的金背鲤肠道细菌群落结构差异显著,稻田放养 (FGF) 组以弧菌 (Vibrio)、拟杆菌 (Bacteroides)、交替单胞菌 (Alteromonadales)、希瓦氏菌 (Shewanella)、嗜冷假单胞菌 (Pseudomonas psychrophile) 和Brevinema属为主,池塘养殖 (FGP) 组以莫拉克斯氏菌 (Moraxella) 和克雷伯菌属 (Klebsiella) 为主;FGF组中鲜味肌苷酸含量及其滋味活性值 (1.676 g·kg⁻¹, 6.705) 远高于FGP组 (0.246 g·kg⁻¹, 0.985),FGF组鲜味氨基酸和甜味氨基酸含量 (0.143和2.052 g·kg⁻¹) 高于FGP组 (0.109和2.001 g·kg⁻¹),而其苦味氨基酸 (3.193 g·kg⁻¹) 却低于FGP组 (3.836 g·kg⁻¹);金背鲤的挥发性化合物组分复杂,其关键气味化合物 (ROAV≥1) 和对整体风味有修饰作用的化合物 (0.1≤ROAV<1) 的种类存在差异。菌属与风味物质的相关性分析显示弧菌属、拟杆菌属、克雷伯菌属和摩根菌属 (Morganella) 与风味物质呈显著相关 (0.01≤P<0.05 & 0.001≤P<0.01 & P<0.001)。研究表明,养殖模式影响了金背鲤的肠道微生物,并间接影响了其风味品质。     

成年牦牛皮肤中血管与神经的组织学观察及HIF-1α在皮肤中的表达

本研究旨在探讨牦牛不同部位皮肤内血管和神经的分布情况,及检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在不同部位皮肤上的定位及相对表达量,探究牦牛皮肤对高原低氧环境的适应机制。采用HE、Masson’s三色和Verhoeff VG染色法,对成年牦牛皮肤内血管和神经结构进行观察与分析;采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法,对HIF-1α的mRNA和蛋白在成年牦牛皮肤组织中表达与分布进行研究。结果表明,颈部血管与神经密度最高,前臂部和小腿部次之,跖部最低,部位间差异显著（P<0.05）。HIF-1α主要表达在表皮层、毛囊的上皮根鞘、皮脂腺、汗腺、血管、神经;颈部、前臂部和小腿部强阳性表达,跖部阳性表达。HIF-1α mRNA的相对表达量跖部明显低于其他部位（P<0.05）,其他三个部位两两比较差异不显著（P>0.05）。HIF-1α蛋白相对表达量颈部最高,跖部最低,差异显著（P<0.05）。研究结果提示,成年牦牛不同部位皮肤内不同血管和神经形态结构相似,密度从颈部到前肢再到后肢差异显著。HIF-1α的差异性表达进一步说明皮肤在牦牛适应低氧环境中发挥作用。     

火炬松纸浆材林土壤管理模式研究

通过对整地、施肥、抚育等研究 ,分析了林分的生长效应、效益 ,分别提出了在中、高立地条件下的火炬松纸浆材林的土壤管理模式。     

山茱萸炭疽病发生消长动态及防治措施

山茱萸[Macrcarpium officinale(sieb．et Zucc．)Nakai]是我国传统的名贵中药材之一，在淳安县临歧、威坪等地有悠久的栽培历史，是当地农民经济收入的主要来源。炭疽病[Colletotrichum gloeosporioides Penz]是山茱萸的主要病害，成年树发病尤其普遍；该病主要危害果实，其次为叶片及枝条，是影响山茱萸产量和品质的主要障碍因子。为了进一步掌握山茱萸炭疽病的发生消长规律，了解病菌侵染的薄弱环节，探索持久控制山茱萸炭疽病的防治策略，     

超声波辅助法提取胶原蛋白工艺研究

以青海牦牛蹄筋为原料,利用超声波辅助胃蛋白酶法提取牛蹄筋胶原蛋白,并采用Design-Expert对超声波功率、超声时间、胃蛋白酶的加入量进行响应面优化.结果表明:最优提取条件为超声功率366W,超声时间7.4min,加酶量1∶133,在该条件下牛蹄筋胶原蛋白的提取率为31.04%,而传统胃蛋白酶法提取得率为20.35%,提取率提高了10.69%,说明该方法优于传统的提取方法,对胶原蛋白提取工艺的大规模生产应用具有实际意义.     

施用长效复合肥对柑桔产量和品质的影响

我们采用合成和包膜的工艺 ,研制了柑桔专用长效复合肥。这种肥料具有缓释特性 ,可减少养分损失 ,提高肥料利用率 ,减少施肥次数 ,省工省肥。为验证其肥效 ,进行了本试验。1　材料与方法试验设在浙江省永康和龙游 ,土壤为培泥沙土和黄筋泥 ,肥力中等。试验设普通复合肥 (对照 )和长效复合肥两个处理 ,以下简称普通肥和长效肥。两种肥料的Ｎ、Ｐ2 Ｏ5、Ｋ2 Ｏ含量均为 15 0 %、6 1%、10 9% ,均株施 1 5ｋｇ。长效肥于 5月 9日作稳果肥一次施入 ,普通肥分两次施入 ,间隔 1个月。沿树冠外围 ,施入深约 15ｃｍ的土层中。试材为 10年生晚熟温州…