以鸡恒定链(Ii)为载体的新城疫病毒-F蛋白表位基因疫苗的免疫原性

本文研究了以鸡恒定链基因(invariant chain,Ii)为载体的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F基因片段的基因疫苗及其小鼠的免疫应答.首先,用重叠延伸法经3轮PCR获得以NDV-F343表位基因(327-359 AA)取代鸡恒定链中Ⅱ类分子相关肽段(class-Ⅱassociated invariant chain peptide,CLIP)片段序列,构建了基于恒定链的NDV内源性靶向基因疫苗(C1-△CLIP-Ii-F343).其次,在观察C1-△CLIP-Ii-F343和无恒定链载体的C1-F343转染真核细胞中,发现它们均能在COS-7细胞中高效表达.最后,将25只6～8周龄的雌性Balb/c小鼠(Mus musculus)随机分为5组,用C1-△CLIP-Ii-F343和非靶向性疫苗(C1-F343)进行免疫,以C1-△CLIP-Ii、pEGFP-C1和生理盐水作为对照.经3次免疫后,取小鼠尾部血对小鼠的体液免疫进行检测.结果表明,在C1-△CLIP-Ii-F343和C1-F343免疫组小鼠血清中均可检测到针对NDV的特异性抗体,其滴度分别达到1/6400和1/1600.进一步Western blot研究结果表明,抗体与接种NDV的鸡胚尿囊液和原核表达的PET-NDV-F306蛋白均产生特异性结合.研究结果提示,鸡恒定链作为载体的NDV基因疫苗能够刺激小鼠产生特异性的体液免疫应答,为新城疫疫苗开发提供了一个新的思路.     

CD14分子的研究进展

CD14是一种髓样单核细胞的分化抗原,主要存在于单核细胞、巨噬细胞和中性白细胞的表面,为脂多糖/脂多糖结合蛋白(LPS/LBP)复合物的受体蛋白。CD14在机体免疫系统的病理反应中起关键作用,以CD14依赖及非依赖方式诱导产生细胞因子,可导致或参与炎症反应引起组织器官损伤。本文主要就人CD14的发现与认识历程、分类与分布、结构与生化特征、功能与作用机理及其研究意义进行了较为系统的综述。     

分布稻田的三种不同体色泥鳅组织LDH同工酶的研究

本文报道了应用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析研究分布于稻田的三种不同体色泥鳅在心肌,骨骼肌,肝脏,眼,血清七种组织器官中ＬＤＨ同工酶的表达特征。电泳图谱表明,这些组织分布和活力均具有明显的组织特异性;在脑组织ＬＤＨ２活性最强,其它组织如血清,眼,卵巢,肝脏,心肌等组织中ＬＤＨ３活力最强,此外,在肝脏中存在由Ｌｄｈ－Ｃ编码的Ｃ带。     

鲫与8种淡水鱼血清和体表粘液蛋白分子及其抗原相关性分析

应用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳,琼脂免疫扩散和免疫电泳分析比较了鲤形目鲤亚目的其他８种淡水鱼和血清,体表粘液蛋白及其抗原相关性。这８种鱼分别是鲤亚目鲤形科的鲤,鲂草鱼,鳅科的泥鳅,鲇亚目鲇科的鲇,尝科的黄颡鱼,鳢形目乌鳢科的乌鳢和合鳃目合鳃科的黄鳝等。结果表明,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱中各种鱼的血清和体表粘液共有和特有蛋白组分的比例数在不同目,科和种之间判别不明显。     

用鼠红细胞膜纯化中华绒螯蟹血清凝集素的方法

本研究建立鼠红细胞膜吸附法纯化中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素的方法,并与硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和离子交换层析等其他提取方法进行比较。实验结果表明,中华绒螯蟹血清经鼠红细胞膜吸附后,再由EDTA把结合的凝集素从膜上解离,可以获得纯化的高活性凝集素。该纯化物在PAGE中出现2个清晰的区带,一个是大分子的b带,另一个则是由3种大小相近的小分子组成的c区带;在SDS-PAGE中,则显示出3个分子量接近、约为100 000的条带。经50％饱和硫酸铵盐析或用Sephadex G200凝胶过滤层析法可浓缩但不能纯化中华绒螯蟹血清凝集素。经DEAE-Sephadex A50离子交换层析法可获得2个蛋白峰,其中只有1个峰有凝集活性,在PAGE中表现为a蛋白带。凝集活性较高、分子量较大的蛋白带。上述实验结果表明,应用鼠红细胞膜法可纯化中华绒螯蟹血清凝集素。     

鸡恒定链分子跨膜区2个氨基酸残基在形成MHCⅡ-Ii复合物中的作用

本研究旨在探明鸡恒定链跨膜区特定氨基酸在形成MHCⅡ-Ii复合物聚合中的作用特征.用大引物PCR定点突变法将鸡Ii链跨膜区2个氨基酸Gln47和Thr50分别突变为丙氨酸(Ala),再连接到pEGFP-C1载体中,构建含Ii-GFP融合基因的真核表达载体.同时还分别构建了含pDsRed2-N1-MHCⅡα、pDsRed2-N1-MHCⅡβ、pEG-FP-N1-MHCⅡa和pEGFP-N1-MHCⅡβ真核表达载体.用脂质体介导法将这些重组质粒单独或共转染至COS-7细胞,培养48 h后经荧光显微镜检测野生型Ii和突变型Ii与MHCⅡ类分子的细胞定位,并通过免疫共沉淀研究它们之间的相互关系.结果显示,野生型Ii链与MHCⅡα或MHCⅡβ之间存在细胞内的共定位,而突变型Ii与MHCⅡα或MHCⅡβ在细胞中共表达后未出现共定位现象.免疫共沉淀结果显示,在野生型Ii链与MHCⅡa或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均能检测到MHCⅡa-li、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物,而突变型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均检测不到MHCⅡα-Ii、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物.因此Ii链跨膜区Gln47和Thr50 2个氨基酸对于MHCⅡ-Ii复合体的形成是至关重要的.     

鸡CD4基因片段原核表达及其单抗制备

将PCR扩增的鸡CD4基因片段克隆到pET-32a原核表达载体,构建获得原核表达重组载体pET-32a-CD4.重组载体导入大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和树脂纯化获得融合蛋白His-CD4.以此融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤细胞技术制备了1株能够稳定传代并分泌抗CD4多肽单抗的杂交瘤细胞株,命名为3E12.经检测该抗体亚类为IgG2b,单抗腹水的间接ELISA效价为1:105,Western blot结果显示单抗与CD4多肽能特异性地结合.     

猪瘟病毒E2基因的克隆及其初步鉴定

[目的]为了研究猪瘟病毒E2蛋白的抗原性质和进一步筛选保护性抗原表位。[方法]克隆猪瘟病毒E2蛋白的部分基因片段,通过自行设计的一对引物,应用RT-PCR从猪瘟兔化弱毒株细胞培养物,扩增出一DNA片段,并对其进行鉴定。[结果]经初步鉴定,该片段大小约703 bp,核苷酸序列测定结果表明该片段为E2蛋白基因。[结论]该研究为筛选CSFV抗原奠定了基础。     

厄尔尼诺和拉尼娜事件下西北太平洋柔鱼栖息地时空分布差异

柔鱼（Ommastrephes bartarmii）是短生命周期头足类,其栖息地受气候和环境因子的调控。本文基于2006—2015年9—11月西北太平洋36o—48oN,150o—170oE海域内柔鱼的生产捕捞数据结合关键环境因子海表温度（SST）和海面高度距平（SSHA）,构建了SISST和SISSHA（suitability index,SI）各月不同权重的栖息地指数模型（HSI）,按照模型性能验证并筛选出每月最优模型。此外,利用最优模型预测柔鱼栖息地适宜性,并比较不同ENSO事件下柔鱼栖息地时空分布的差异性,评估生境质量与柔鱼资源丰度与分布的关系。结果显示,9-11月对应最优HSI模型的SISST和SISSHA权重比例分别为：9月为[0.9 0.1],10月为[0.7 0.3],11月为[0.8 0.2],可以看出SST各月贡献最高,表明水温对柔鱼栖息地时空分布的影响最为关键。基于最优模型对比分析厄尔尼诺年份（2009和2015年）与拉尼娜年份（2007和2011年）柔鱼的生境质量、资源丰度和渔场纬度重心,可知,相对于厄尔尼诺事件,拉尼娜事件的发生有利于柔鱼的生存,促使其适宜生境范围扩大,产量提升,柔鱼偏好的水温向北移动驱使渔场位置同样北移。