外源ASA、H2O2对牡丹切花衰老过程中生理活性及细胞学特性的影响

为解析外源ASA、H₂O₂作用下牡丹切花衰老的细胞学和生理学机制,本试验以‘凤丹’切花为材料,研究施加不同浓度ASA、H₂O₂对‘凤丹’瓶插切花花瓣生理指标和细胞核形态的影响。结果表明：外源ASA和H₂O₂处理下,切花SOD活性受到抑制,高浓度处理激发了POD活性,CAT活性受到明显影响且整体变化趋向于平缓,MDA含量明显下降。5 mg/L ASA和0.03 mg/L H₂O₂处理,能有效维持切花细胞活性氧清除系统的平衡,减轻活性氧对细胞膜的破坏作用;细胞核完整率较高,瓶插末期仍然维持大部分细胞核规则、明亮,能有效缓解‘凤丹’切花的细胞程序性死亡,也即能延缓切花衰老,有较好的保鲜效果。该研究可为进一步揭示外源H₂O₂、ASA对牡丹切花保鲜时间的延长提供试验和理论依据。     

牡丹转录组SSR信息分析及其分子标记开发

利用Misa软件对牡丹转录组数据进行SSR信息分析和分子标记开发,并通过PCR扩增进行引物多态性分析。结果显示,对牡丹转录组测序获得的131 265条Unigene进行筛选,共获得44 181个SSR位点,分布于38 316条Unigene中,SSR的发生频率和平均分布距离分别为29.19%和2.23 kb。单核苷酸、二核苷酸和三核苷酸为优势重复类型,分别占SSR总数的75.19%、15.02%和6.88%。依据转录组中的SSR信息序列,随机合成60对引物在16份牡丹品种中进行多态性扩增,其中15对引物表现出多态性,各个位点的等位基因数为4～13个,平均等位基因数8.13个,观测杂合度(H_o)、期望杂合度(H_e)、香农多样性指数(I)、多态信息含量(PIC)的平均值分别是0.757 8、0.790 3、1.718 6和0.730 8。     

不同NAA和6-BA对牡丹胚性愈伤组织诱导的影响

以牡丹品种‘凤丹白’愈伤组织为材料,研究不同NAA和6-BA对其胚性愈伤组织诱导效果,以及其抗氧化酶(POD、SOD、CAT)活性和可溶性蛋白变化的影响。结果表明:不同处理中以添加NAA0.2 mg/L+6-BA0.5 mg/L处理的胚性愈伤组织诱导效果最好,该处理下愈伤组织于诱导培养的第20天胚性细胞形成,第25天出现大量胚性细胞,第30天有少量早期球形胚,在胚性愈伤组织形成过程中存在非胚性细胞与胚性细胞、球形胚共存的现象。在此处理下POD、CAT活性在20~25 d呈显著上升趋势,明显优于其它处理,SOD活性在整个处理期间比较稳定,且一直保持较高水平。可溶性蛋白的含量在胚性细胞出现和分化的过程中一直保持较高水平,对形成胚性愈伤组织有促进作用。     

碳源和有机添加物对文心兰原球茎增殖的影响

以薄叶系文心兰Oncidiumaloha'Iwanaga'茎尖诱导形成的原球茎(PLB)为外植体,采用树脂膜培养容器(CP)的液体静置培养方式,比较不同碳源(蔗糖、麦芽糖、山梨醇)和不同有机添加物(蛋白胨、胰蛋白胨、苹果汁、番茄汁、椰子汁)对文心兰PLB增殖的影响.结果表明,以蔗糖为碳源时,PLB在鲜重和干物重方面显著高于麦芽糖和山梨醇处理,同时PLB分化幼苗数较少;不同有机添加物处理,蛋白胨对PLB增殖效果显著,其次分别为蕃茄汁>椰子汁>苹果汁>蛋白胨.在幼苗分化方面,胰蛋白胨、苹果汁和椰子汁处理中,幼苗分化数显著高于蛋白胨和番茄汁处理,并在处理间存在显著性差异.蛋白胨和番茄汁两处理间在鲜重、干物重和幼苗分化数方面无显著性差异.     

牡丹试管苗生根过程中内源IAA及相关酶活性的变化

【目的】研究牡丹试管苗生根期间相关酶活性和内源生长素吲哚乙酸（IAA）含量的变化,以及生根期间茎基部内源IAA的分布,为牡丹快速繁殖提供理论依据。【方法】以牡丹试管苗‘凤丹白’为试验材料,以WPM+WPM（Ca²⁺）+聚乙烯吡咯烷酮（PVP）1 g/L+糖30 g/L+植物凝胶2 g/L(pH=5.8)为生根培养基,研究外源添加不同质量浓度（0（CK）,1,2,3和4 mg/L）IAA对其生根的影响,并测定牡丹试管苗生根期间茎基部过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）、吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性及内源IAA含量的变化,同时对牡丹试管苗生根期间茎基部进行细胞学观察和IAA免疫荧光定位分析。【结果】牡丹试管苗在外源添加3 mg/L IAA的生根培养基中生根率最高（52.00%）、生根指数最大（12.47）,且显著高于其他处理;CK处理的生根率、平均最大根长和生根指数均低于其他处理。在牡丹试管苗生根期间,其茎基部的POD、PPO和IAAO活性始终处于波动变化中;内源IAA含量则呈现先升高后降低的变化趋势,在生根培养5 d时达到最大值62.80 ng/g。细胞学观察结果显示,牡丹试管苗根原基诱导期为接入生根培养基后的3～5 d,对于生根培养基中添加3 mg/L IAA的处理,其试管苗茎基部POD和PPO活性均在培养3 d时达到峰值,IAAO活性在培养3～4 d处于显著下降趋势,而内源IAA含量在培养3～5 d处于升高趋势。免疫荧光定位分析表明,在牡丹试管苗生根期间,内源IAA以茎基部维管束中分布最多,且一直作用于根原基形成和伸长的部位,荧光信号强弱与其含量相一致。【结论】在牡丹试管苗生根期间,外源添加IAA后,高活性的POD、PPO及低活性的IAAO有助于根原基的发生,内源IAA在根原基的积累与牡丹试管苗不定根的发生密切相关。     

花生壳在穴盘育苗中的应用研究

以不同的花生壳、草炭、膨化鸡粪配方作为穴盘育苗的基质成分，对几种常见花卉进行育苗试验，结果表明，花生壳可作为穴盘育苗的替代基质，在生产中替代草炭、蛭石、椰子皮或珍珠岩，体积比以草炭：花生壳：膨化鸡粪＝5：4：1的配方为最优，其次为体积比草炭：花生壳＝1：2较好。     

LED不同照光方式对百合组培苗生长的影响

以‘索尔邦’百合为试材，采用不同倾斜角度的LED侧向照光和顶部照光2种照光方式，结合不同造型曲面反光膜和平面反光膜，研究8种不同组合LED照光方式对百合组培苗生长的影响，以期为百合组培及工厂化育苗提供参考依据。结果表明：8种处理中，LED不同照光方式处理的百合组培苗，其形态和生理指标整体优于对照处理。其中，采用倾斜69.77°侧向照光方式和平面反光膜的处理5更有利于百合组培苗茎叶的生长，其在叶幅、地上鲜质量、地上干质量、叶绿素b含量、叶绿素总含量等方面高于其它处理；而在根系发育方面，采用倾斜79.89°侧向照光方式和曲面反光膜的处理2百合组培苗整体优于其它处理，其根数、根鲜质量、根干质量、根系活力等多个指标显著高于其它处理。因此，采用倾斜69.77°侧向照光方式和平面反光膜的处理5在促进百合组培苗茎叶生长方面效果最佳，采用倾斜79.89°侧向照光方式和曲面反光膜的处理2有利于百合组培苗根系生长。     

LED不同照光方式对百合组培苗生长的影响

以‘索尔邦’百合为试材，采用不同倾斜角度的LED侧向照光和顶部照光2种照光方式，结合不同造型曲面反光膜和平面反光膜，研究8种不同组合LED照光方式对百合组培苗生长的影响，以期为百合组培及工厂化育苗提供参考依据。结果表明：8种处理中，LED不同照光方式处理的百合组培苗，其形态和生理指标整体优于对照处理。其中，采用倾斜69.77°侧向照光方式和平面反光膜的处理5更有利于百合组培苗茎叶的生长，其在叶幅、地上鲜质量、地上干质量、叶绿素b含量、叶绿素总含量等方面高于其它处理；而在根系发育方面，采用倾斜79.89°侧向照光方式和曲面反光膜的处理2百合组培苗整体优于其它处理，其根数、根鲜质量、根干质量、根系活力等多个指标显著高于其它处理。因此，采用倾斜69.77°侧向照光方式和平面反光膜的处理5在促进百合组培苗茎叶生长方面效果最佳，采用倾斜79.89°侧向照光方式和曲面反光膜的处理2有利于百合组培苗根系生长。     

牡丹远缘杂交种子败育PsMTERF2基因的克隆、表达与生理机制分析

【目的】探究PsMTERF2基因在牡丹远缘杂交种子发育过程中的分子及生理机制，为克服牡丹远缘杂交种子败育的研究提供理论依据。【方法】采用RT-PCR技术克隆得到牡丹MTERF2基因，并对其进行生物信息学分析；采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测并比较PsMTERF2基因在牡丹种子不同发育时期（‘凤丹白’自交与‘凤丹白’ב粉玉奴’授粉后14，18和28 d的正常与败育种子）的表达与牡丹不同组织（根、茎、叶、花瓣、花药、鳞芽、柱头、种子）中的差异性表达；测定不同发育时期正常种子与败育种子中可溶性总糖、蔗糖、果糖、淀粉和可溶性蛋白的含量，并分析其与PsMTERF2基因表达量的相关性。【结果】牡丹MTERF2基因CDS全长972 bp，编码323个氨基酸，相对分子质量为3.77×10⁴ D，理论等电点为8.87，具有3个跨膜螺旋区，不具有信号肽切割位点；进化树及三级结构分析显示，牡丹MTERF2基因具有7个MTERF结构域，蛋白结构较为复杂，其碱基序列与AtMTERF2同源性较高，故命名为PsMTERF2，GenBank登录号为MZ505000。PsMTERF2基因在牡丹自交种子各发育时期的表达量均高于同一发育时期的杂交种子，且在种子发育后期二者差异更显著；PsMTERF2基因在牡丹不同组织中均有表达，但在种子、柱头和花药中的表达水平相对较高。授粉后14和28 d，可溶性总糖、蔗糖、果糖、淀粉和可溶性蛋白在自交正常种子中的含量均高于杂交败育种子，其中淀粉和可溶性蛋白含量与PsMTERF2基因相对表达量显著正相关，其余指标与PsMTERF2基因相对表达量正相关但相关性不显著(P>0.05)。【结论】PsMTERF2基因可能通过影响代谢产物的合成参与调控种子发育的后期进程。