发根农杆菌介导的杨梅遗传转化研究初报

为了建立发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes介导的杨梅Myrica rubra遗传转化体系,利用携带拟南芥Arabidopsis thaliana LEAFYcDNA片段的发根农杆菌R15834感染东魁杨梅M. rubra‘Dongkui’和荸荠杨梅M. rubra‘Boji’的子叶、叶片和茎段。结果表明,只从东魁杨梅子叶上诱导出毛状根,而且产生毛状根的东魁杨梅子叶数在10%以下。杨梅子叶产生毛状根受多种因素影响,新种子比旧种子容易产生毛状根,在1/2 MS(Murashige and Skoog)培养基培养较在MS培养基上培养好。东魁杨梅子叶上的毛状根经聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测和Southern杂交检测,证实已将拟南芥的LEAFYcDNA片段成功导入并整合到东魁杨梅子叶中。图2参10     

金柑LEAFY同源基因克隆与全序列分析

通过PCR扩增，从融安金柑基因组DNA中克隆出一条2361bp的DNA片段，该DNA克隆含有1个2081bp的LEAFY同源基因全长序列（FcLFY）。金柑LEAFY同源基因包含2个内含子和3个外显子，编码398个氨基酸。比对结果表明，金柑LEAFY同源基因与甜橙、枳的LEAFY同源基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性均为98％。该研究为今后从分子水平上研究金柑开花调控机理打下了坚实的基础。     

硫和钴在杨梅植株体内的分布及对生长的影响

 杨梅对硫有较强的吸收能力, 3 年生‘东魁’杨梅定植一年后, 在未施任何肥料的情况下,使土壤含硫量下降了37.7 %。杨梅吸收硫主要积累在叶片和根瘤中, 叶片和根瘤中的含硫量是根的2 倍左右。杨梅吸收钴主要积累在根瘤和根中, 根瘤和根中钴含量是叶片的4.88 和4.48 倍。每株施硫酸钴15 和30 mg 能促进杨梅对硫和钴的吸收利用, 且硫和钴优先向根瘤运输和积累; 根瘤和叶片含硫量分别是根系含硫量的3.38～4.58 倍和2.75～3.72 倍, 根瘤含硫量又是叶片含硫量的1.23 倍; 根瘤含钴量分别是根和叶的1.39～1.90 倍和3.53～4.55 倍。每株施硫酸钴15 和30 mg , 能显著增加杨梅植株的生物量、株高、根瘤量和固氮酶活性, 且根瘤的固氮酶活性是对照的8～18.35 倍。提出硫元素与Frankia 放线菌的共生固氮有关, 有利于根瘤形成和固氮。     

融安滑皮金柑种胚发育的细胞学观察

【目的】观察不同发育时期融安滑皮金柑种胚发育情况,探讨其败育的原因,为该品种资源的创新利用及金柑育种研究提供科学依据。【方法】以融安滑皮金柑为试材,采用石蜡切片、植物显微技术等方法,对其胚珠发育过程进行系统的观察研究,并对成熟果实种子败育情况进行统计分析。【结果】融安滑皮金柑在授粉阶段和胚囊发育阶段表现正常;胚珠发育至花后7d,一部分因极核未能正常受精而导致胚胎败育,另一部分因内、外珠被发育时期紊乱使珠心和胚囊发育受到扰乱而导致胚胎败育。融安滑皮金柑成熟果实中,每果种子数5～9粒,其中饱满种子（2．3±0．17）粒,败育种子（9．7±0．17）粒,败育率（80．8±1．45）％,正常种子为多胚性。【结论】融安滑皮金柑种子败育属于中途败育类型。     

2009年广西荔枝、龙眼寒冻害调查与分析

2009年1～2月对广西武鸣、扶绥、桂平、武宣、象州等地的荔枝、龙眼果园寒冻害情况进行调查,以探讨广西荔枝、龙眼的冻害类型、受害程度及相关分级标准,为广西荔枝、龙眼寒冻害预警及防治提供指导。结果表明,所调查荔枝、龙眼果园受害率从5.00%～100.00%不等,主要表现为叶片、枝条、顶芽及花穗等不同程度坏死干枯,甚至整株死亡,其中末次梢平均受害率为83.15%;根据叶片、末次梢、顶芽等受害表观症状,认定广西荔枝、龙眼寒冻害等级多在0～2级之间,而个别地区的冻害等级则介于0～5级之间;低温霜冻是造成广西荔枝、龙眼寒冻害的主要原因,但果园地形、地势、风向、管理水平及周围环境的影响也不容忽视。     

杨梅组织培养防污染与防褐化研究

[目的]研究杨梅（Myrica rubraSieb et Zucc.）组织培养过程中防污染和防褐化问题。[方法]以东魁杨梅品种茎段作为离体培养材料,研究不同消毒灭菌方法、不同茎段部位和不同防褐化措施对外植体离体培养的影响。[结果]以75%乙醇1min＋0.1%HgCl27min对外植体的灭菌效果最好,污染率为30.00%,褐化枯死率为30.00%,茎段诱导成功率为40.00%;在3个茎段部位中,以半木质化茎段诱导效果最好,污染率为30.00%,褐化枯死率为33.33%,诱导成功率为36.67%;在培养基中添加活性炭1.5g/L＋聚乙烯吡咯烷酮（PVP）2.5g/L对外植体防褐化效果最好,褐化率由对照的60.93%下降到21.88%。[结论]该研究可为杨梅优良品种的扩繁推广和高效遗传转化体系的建立奠定良好的基础。     

桂西南早熟荔枝实生资源调查

为深入了解桂西南早熟荔枝实生资源状况,通过实地考察分布地区并对其植物学性状调查分析。结果表明：桂西南早熟荔枝实生资源主要分布在广西崇左市的龙州县、大新县、天等县,百色市的靖西县、德保县、田东县、田阳县,河池市的大化县、都安县等地;该资源平均树龄平均69.6年,树体高大直立,叶形有椭圆形等5种,花序较长,果实形状有心形和椭圆形等8种,成熟期多在5月上中旬,早熟性状明显;叶、花和果实的形态类型多样,变异系数20.0%~29.0%的占34.4%,10.0%~19.0%的占46.9%。可见桂西南早熟荔枝实生资源的遗传多样性极其丰富,但是该资源没有得到有效的保护和利用。今后应提高群众的资源保护意识,开展实生选种,实现资源的有效利用。     

杧果低分子量热激蛋白基因MiHSP17.6的克隆及表达分析

采用RT-PCR与RACE相结合的方法获得了杧果低分子量热激蛋白基因的cDNA全长序列,命名为MiHSP17.6,GenBank登录号为KJ459857。序列分析显示,该基因序列全长为680 bp,其中开放阅读框为462 bp,编码154个氨基酸,5′非编码区和3′非编码区长度分别为80 bp和135 bp。杧果MiHSP17.6与其他物种的低分子量热激蛋白同源性介于74% ~ 82%。实时荧光定量分析表明,MiHSP17.6在‘四季杧’不同组织器官中均表达,在果实发育的中期表达水平持续上升。高温（44 ℃）、低温（4 ℃）、盐（NaCl）、聚乙二醇（PEG）、脱落酸（ABA）、双氧水（H2O2）和水杨酸（SA）处理均诱导该基因表达,因此推测MiHSP17.6的功能可能与杧果果实发育和抵御逆境胁迫相关。     

低温胁迫下龙眼碳酸酐酶基因（CA）的克隆与表达分析

 应用蛋白质组学研究低温胁迫下龙眼叶片蛋白质组变化时发现碳酸酐酶（CA）蛋白下调表达。利用RT-PCR方法克隆CA基因的全长cDNA,GenBank登录号JN033201,长度为1 119 bp,包括1个966 bp的开放阅读框,编码321 bp的氨基酸序列,同源性分析表明,12个不同植物同源性为81% ~ 88%。龙眼CA基因具有典型的CA结构域,并且非常保守。实时荧光定量分析结果表明,CA在龙眼根、茎、叶中都有表达,为组成型表达,在叶中的表达量最高,茎和根中的表达量最少。CA基因在低温胁迫下随着低温胁迫时间的延长而发生变化。将CA在大肠杆菌中表达,获得1个约40.5 kD的外源蛋白。推测CA表达与低温胁迫有关。     

荔枝FLOWERING LOCUST(FT)同源基因cDNA全长克隆及其表达

应用RT-PCR方法在首次克隆获得荔枝AP1同源基因cDNA全长基础上,又得到2个荔枝FT同源基因cDNA全长,分别命名为LcFT1和LcFT2(基因登录号分别为:JN214350、JN214351)。LcFT1基因开放阅读框522 bp,编码174个氨基酸,推测蛋白质分子质量为19.65 ku,等电点为8.68。LcFT2基因开放阅读框522 bp,编码174个氨基酸,推测蛋白质分子质量为19.56 ku,等电点为7.34。蛋白质二级结构预测表明,LcFT1和LcFT2蛋白都具有4个α螺旋,10个β折叠区。同源分析表明,LcFT1和LcFT2基因在不同植物中的一致性为72%～82%。半定量RT-PCR分析表明,三月红荔枝花芽分化期LcFT1和LcFT2基因只在叶中表达,并且在成熟叶中表达量最多。研究将有助于进一步了解荔枝开花的分子机理及其成花的生物学发育过程。