表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的新城疫病毒感染性克隆的构建及病毒拯救

应用反向遗传技术对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株感染性克隆PBRN-FL质粒进行操作,构建插入欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF5基因的重组质粒LaSota-ORF5并进行病毒拯救及鉴定。依据GenBank所发表的欧洲型PRRSV LV株ORF5序列,设计引物扩增ORF5片段,通过PBRN-FL质粒上P和M基因间的PmeⅠ酶切位点插入目的片段,构建重组质粒LaSota-ORF5。采用磷酸钙转染法将重组质粒和PCI-NP、PCI-P、PCI-L等3种辅助质粒共转染BSR-T7/5/细胞拯救病毒并对其分别进行RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)和Western blot(WB)试验鉴定。结果显示:拯救病毒的RT-PCR产物测序结果正确,IFA出现绿色荧光,WB试验条带大小符合预期,证明GP5蛋白有效表达。结果表明:成功构建并拯救得到重组病毒rLaSota-GP5,为制备表达PRRSV GP5蛋白的重组NDV疫苗奠定基础。     

硝基蓝四唑试验检测牛猪疾病的效果

硝基蓝四唑(NBT)试验是了解中性白细胞吞噬能力及细胞内杀菌能力的简易方法,也是鉴别疾病的一种辅助手段。此法检测牛猪疾病简便易行。PARK等、奥田等及田所等分别对200例幼令患畜和1,500例病畜做了NBT试验,表明细菌、真菌、病毒等的感染症都可引起NBT值的变化。     

NDV-F基因稳定表达P815细胞株的建立

在成功地构建NDV-F基因真核表达载体pCDNA3-NDV-F的基础上,应用脂质体LipofectamineTM2000介导使其转染小鼠肥大细胞瘤细胞株（P815）,以G418加压筛选（600μg/ ml）得到稳定的克隆并扩大培养成系。应用Trizol法提取细胞RNA,经RT-PCR鉴定,转染细胞在1600bp处出现目的条带。收集转染细胞,经Western blot和免疫荧光法检测到目的蛋白的表达。进一步将获得的细胞株在液氮中冻存6个月以检测其稳定性,实验证明该细胞株仍能很好的表达F基因。本实验采用脂质体法已成功建立了能够稳定表达NDV-F基因细胞株,为进一步研究ND核酸疫苗的效果奠定良好的实验基础。     

浅谈环境污染对养猪业可持续发展的影响因素

近年来,在养猪业规模养殖迅速崛起的同时,猪粪便造成的污染也呈现出加重的趋势。许多大型养猪场缺乏处理能力,将粪便倒入河流或随意堆放。这些粪便进入水体或渗入浅层地下水后,大量消耗氧气,使水中的其它微生物无法存活,从而产生严重的"有机污染"。按粪便排泄量计算,1头猪     

怀念我的战友——检疫犬“豆豆”

2008年4月1日,南京检验检疫局机场办事处迎来了一位特殊的战友——检疫犬“豆豆”的标本。“豆豆”是南京检验检疫局机场办事处一头优秀的检疫犬,一个月前因病离开了我们,因“豆豆”生前表现突出,战功累累,上级决定将“豆豆”制成标本,并永久地陈列在机场办事处的荣誉室。细雨绵绵的清明时节,我带着“豆豆”平日最喜欢吃的火腿肠,去探望这头与我相伴了3年多的亲密战友,抚摸着没有体温的“豆豆”,我百感交集,昔日“豆豆”与我们共同战斗和生活的情景历历在目……     

雌性羽被的发生机制

鸡的羽毛有反毛、丝毛;羽色有斜纹、轮状、条纹、尖纹、点状斑等;冠形有单冠、豆冠、蔷薇冠、核桃冠和凤冠。变化极其丰富,这些性状大部分遗传方式已经清楚。本文综述近50年来关于雌性羽被发生机制的研究进展.一、鸡的性别与羽被鸡的性转化是自然发生的。内分泌学者过去早就采用切除或移植性腺、内服性激素等处     

黑龙江鱼籽酱俏销亚欧美

黑龙江省江滨农场鱼籽酱加工厂，今年创产值56万元，为国家作出了很大贡献。     

包膜氮肥配施不同用量钾肥对多年生黑麦草植株生理指标及产量的影响

通过盆栽试验研究包膜氮肥配施不同用量钾肥对多年生黑麦草(Lolium perenne)生长特性及产量的影响,以期明确适宜黑麦草生长的最佳施肥配比。结果表明,与普通尿素相比,包膜氮肥显著提高了黑麦草植株SPAD值、株高、叶面积、净光合速率(P <0.05),明显延长了黑麦草绿期,防止早衰。施用等量钾肥条件下,包膜氮肥处理比普通尿素处理4次刈割的SPAD值分别提高11.2%、 6.9%、 33.6%和195.2%,株高分别增加14.1%、 6.0%、 25.1%和85.4%。包膜氮肥处理较普通尿素处理的干草产量提高了12.4%～25.0%。包膜氮肥配施中量钾肥处理能最大程度增加叶面积指数和净光合速率,提高黑麦草产量,因此推荐作为最佳施肥配比,为黑麦草的氮钾肥合理施用提供理论依据。     

细菌染色体DNA G+C mol%含量测定方法研究进展

生物体的遗传物质DNA中四种碱基G、C、A、T的排列和比例是DNA特性的决定因素。染色体DNAG Cmol%含量即DNA的碱基组成具有种特异性且不受菌龄和外界因素的影响,成为细菌分类和菌种鉴定的重要指标,其测定方法不断被改进和创新,主要包括纸层析法、浮力密度法、高效液相色谱法、热变性温度测定法(Tm法)和荧光法等,其中Tm法操作简便、精确度高、重复性好,最为常用,此法在国外早已发展,在国内也引起越来越多的重视,此法利用DNA的增色效应求Tm值(热变性温度),G Cmol%含量与Tm值呈正比例关系。简略比较了测定细菌染色体DNAG Cmol%含量的五种主要方法,具体介绍了Tm法测定细菌染色体DNAG Cmol%含量的原理、测定程序、操作注意事项、G Cmol%含量测定的意义和应用局限性及G Cmol%含量测定方法的前景展望。     

ECM 830电穿孔仪在毕赤酵母电转化中的应用

用线性化质粒与酵母细胞混合后进行电转化,培养细胞,菌体计数,通过计算转化率探索ECM 830电转仪的转化条件,确定出毕赤酵母电转化最佳条件,低电压模式;电压300 V;脉冲长度15 ms;脉冲次数为1次;为ECM 830电转仪在酵母转化中的应用提供依据.