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为深入研究鱼类干细胞多能性转录因子Nanog的功能,本实验进行了团头鲂Nanog基因的原核表达和多克隆抗体的制备。首先,从团头鲂卵巢克隆出Nanog基因的编码区,将其连接到p ET32a载体上构建原核表达载体。接着将重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得预期大小的Nanog重组蛋白,并获得大量蛋白以制备抗体。最后通过ELISA检测抗体的效价和采用Western blot技术检测Nanog抗体的特异性。结果显示,在37°C,0.5 mmol/L IPTG诱导4 h可获得Nanog重组蛋白的高效表达;制备的多克隆抗体能够有效识别原核表达的Nanog蛋白及团头鲂肝脏和精巢的内源Nanog蛋白;该抗体也可应用于检测HepG2细胞中过表达的团头鲂Nanog蛋白。本研究为蛋白的原核表达和特异性抗体的制备及验证提供了研究思路,也为研究鱼类Nanog基因功能提供了特异性抗体。 相似文献
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本试验旨在研究饲粮不同铜源及水平对育成期水貂血清铜、锌和铁含量及血清氮代谢、脂类和抗氧化指标影响,以及水貂对不同铜源的相对生物学利用率。选择60日龄健康、体重接近的水貂240只,随机分成10组,每组24个重复,每个重复1只貂。试验采用3×3+1试验设计,对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加3种铜源(硫酸铜、碱式氯化铜、蛋氨酸铜)和3个铜添加水平(10、25、40 mg/kg),预试期7 d,正试期45 d。结果表明:水貂血清铜含量随饲粮铜添加水平增加呈极显著线性增加( P=0.0004)。水貂血清总胆固醇( P=0.0015)、甘油三酯( P=0.0021)和高密度脂蛋白胆固醇( P=0.0101)含量随饲粮铜添加水平增加呈显著或极显著线性降低,然而水貂血清低密度脂蛋白胆固醇含量却未受饲粮铜添加水平的影响(P=0.5790)。水貂血清铜蓝蛋白和铜锌超氧化物歧化酶活性均随饲粮铜添加水平增加呈极显著线性升高( P=0.0001)。以血清铜蓝蛋白活性为指标,以硫酸铜为参比标准物(100%),碱式氯化铜和蛋氨酸铜的相对生物学利用率分别为109.93%和131.06%。以血清铜锌超氧化物歧化酶活性为指标,以硫酸铜为参比标准物(100%),碱式氯化铜和蛋氨酸铜的相对生物学利用率分别为111.01%和118.10%。由此可见,饲粮添加40 mg/kg的铜(基础饲粮铜含量8.05 mg/kg)能提高育成期水貂血清抗氧化酶的活性;育成期水貂3组铜源的相对生物学利用率为:蛋氨酸螯合铜>碱式氯化铜>硫酸铜。 相似文献
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随着人们生活水平的提升,人们对居住环境的功能、品位和美观性也提出了新要求,这也为建筑施工管理工作的开展与强化提供了社会基础。本文结合工程实际,就建筑工程暖通、给排水以及消防工程施工管理要点做了简单阐述。 相似文献
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为更好地推进节水灌溉高质量发展体制机制优化工作,本文基于相关研究工作实践,总结了我国近年来在推进高效节水灌溉发展体制机制方面取得的成就,剖析了我国节水灌溉高质量发展体制机制在实践中存在的若干问题,据此提出了关于优化体制机制改革工作的相关建议,以期为后续开展节水灌溉高质量发展体制机制改革工作提供参考. 相似文献