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【目的】克隆得到粗毛纤孔菌糖苷水解酶5基因,并对该基因进行生物信息学分析、蛋白质原核表达和酶活研究,为糖苷水解酶的利用提供依据。【方法】分离纯化粗毛纤孔菌,并于PDA斜面长期保存。应用TRIzol提取粗毛纤孔菌总RNA,通过AMV反转录系统将RNA反转录成c DNA,构建c DNA文库;应用NCBI BLAST分析并检测糖苷水解酶基因家族5阳性序列,RACE法克隆基因全长命名为Ih GH5-1并提交NCBI注册;ORF-Finder分析Ih GH5-1基因开放阅读框,推导出氨基酸序列;筛选NCBI登录的糖苷水解酶家族5同源序列,Clustal W进行保守结构域区段多序列比对;应用Mega 5.05选用WAG+G模型构建最大似然树;应用PSIPRED server对Ih GH5-1进行α螺旋和β折叠的蛋白质二级结构分析,应用SWISS-MODEL对Ih GH5-1进行三维建模,应用VMD1.8.6分析Ih GH5-1三维结构;设计原核表达引物并进行PCR扩增,将扩增得到的基因片段连接至p QE-30 UA载体并转入大肠埃希菌JM109感受态细胞,诱导表达后通过SDS-PAGE电泳检测表达量;测定糖苷水解酶活性并计算酶活。【结果】TRIzol提取的粗毛纤孔菌总RNA经分光光度计检验符合标准(OD260/OD280=2.0,OD260/OD230>1.8),c DNA文库成功构建并测序;RACE法克隆得到5’序列长度为770 bp,3’序列长度为1 562 bp且含有Poly A的序列,5’和3’序列拼接得到基因全长序列长1 727 bp,NCBI注册号为KM368321;ORF分析得到Ih GH5-1氨基酸序列含有300个氨基酸,分子质量为31.226 55 k D,等电点(p I)为9.24;结构域分析表明Ih GH5-1具有保守的催化结构域;最大似然树分析表明多数子囊菌糖苷水解酶家族5聚在一起,多数担子菌糖苷水解酶家族5聚在一起,粗毛纤孔菌Ih GH5-1蛋白质与太瑞斯梭孢壳霉和球毛壳菌等子囊菌的糖苷水解酶亲缘关系更近;蛋白质三维结构分析表明粗毛纤孔菌Ih GH5-1含有7个α螺旋、4个β折叠,三维比对表明粗毛纤孔菌Ih GH5-1三维结构与其他真菌糖苷水解酶家族5蛋白空间结构相近,进化关系与最大似然树分析相符;原核表达及酶活测定表明该基因成功表达,表达产物在65℃时相对酶活性最高。【结论】本研究可为白腐菌纤维素酶大规模的工业化应用提供前期研究基础和理论依据。 相似文献
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母牛分娩过程中,不能将胎儿顺利地由阴道产出就是难产[1]。母牛难产容易引发胎儿窒息死亡,严重者可造成母牛和胎儿全部死亡,给养牛户带来很大经济损失。临床上治疗母牛难产通常是利用手术矫正方法,让母牛顺利产下胎儿。本文介绍两例典型的母牛倒生难产的处理经过,供同行参考。 相似文献
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广西家禽屠宰加工现状及对策 总被引:1,自引:0,他引:1
<正>2013年H7N9疫情发生后,为彻底隔断人与活禽的直接接触,部分省、区、市对活禽交易采取了一系列措施。2015年广东、浙江开始关闭部分城市主城区活禽交易市场,实行家禽集中屠宰冷链配送生鲜上市。随着越来越多省、区、市出台活禽交易管理办法,特别是随着《畜禽屠宰管理条例(草案)》的颁布施行,对活禽跨省运输提出了更严格的要求,积极发展家禽屠宰加工业,大力推行加工后上市是大势所趋。 相似文献
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黑杨派(Aigeiros)的杂交后代欧美杨(Populus nigra × P. deltoides)在杨树叶锈病研究领域具有重要价值。本研究以叶柄、叶片和茎段作为外植体进行组织培养,构建欧美杨再生体系。分别优化了初代培养、继代培养、抽茎培养和生根培养的培养条件。正交试验结果表明最优初代培养培养基配方:MS 0.5 mg/L 6-BA 0.05 mg/L NAA。最优继代培养培养基配方:MS 0.5 mg/L 6-BA 0.1 mg/L NAA。最优抽茎培养培养基配方:MS 0.1 mg/L 6-BA 0.05 mg/L NAA。最优生根培养培养基配方:1/2MS 0.25 mg/L NAA 20 g/L蔗糖。以上培养基培养分别得到叶柄分化率为86.7%,不定芽诱导率为96.7%,抽茎率为91.7%,生根率为85%。再生苗移栽成活率为91.5%。所获得的欧美杨再生苗扩繁简便,可用于杨树抗叶锈病相关基因转化等研究。欧美杨再生体系为揭示欧美杨的感病机理提供物质基础。 相似文献
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近年来,灵山县委、县政府十分重视莪术生产,把它作为农民增收的重要工作来抓,通过调整种植结构,规划部分山地、坡地大力发展莪术生产,取得了显著成效。1莪术生产取得的主要成绩灵山县种莪术具有较长历史。在上世纪70年代,陆屋、旧州、三隆、太平、伯劳等镇已有莪术种植。但是由于种种原因,从上世纪末一直发展不起来。随着市场经济的发展... 相似文献
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