基于转录组序列的火龙果SSR和SNP多态性分析

为深入挖掘火龙果SSR和SNP分子标记,以自交亲和型火龙果新种质‘黔蜜龙’转录组序列为基础,系统分析了SSR和SNP位点多态性和分布特征。转录组序列组装共获得96 800个unigene,其中28 471个unigene在数据库中得到注释,在各个数据库中均得到注释的有5 800个。从unigene中搜寻到26 167个SSR位点,出现频率为0.35个/kb。SSR重复类型共180种,单核苷酸重复最多(66.00%),其次为二核苷酸重复(23.01%)、三核苷酸重复(9.99%),其他类型较少(1.00%)。SSR长度在10~381 bp,10~11 bp的SSR有7 988条(30.53%),长度12~20 bp的有15 901条(60.77%),长度21~40 bp的有1373条(5.25%),长度大于40 bp的有905条(3.46%)。unigene中共有357 330个SNP位点,发生频率为1/204 bp,其中碱基转换位点226 165个(63.29%),碱基颠换位点141 165个(36.71%)。6种单碱基变异类型中,C/T、A/G的发生频率最高,分别占31.91%和30.38%。A/T、A/C、T/G和C/G这4种颠换类型分别占SNP总数的7.85%、7.85%、7.2%和13.09%,碱基转换类型比例高于颠换类型。火龙果转录组序列中的SSR和SNP位点丰富,筛选多态性、准确率高的引物,有望在火龙果遗传多样性分析、品种鉴定和遗传图谱构建等方面得到应用。     

华中樱桃种子萌发特性研究

为探究华中樱桃种子萌发特性,提高华中樱桃萌发效率,本文以湖南省湘西自治州产当年生华中樱桃种子为材料,测定其长、宽、厚和千粒重;对种子采用不剥壳、剥壳、剥壳后破皮三种处理,测定其在不同处理下的吸水性能;用0、50、100、150、200 mg·L^-15个浓度GA₃溶液浸泡剥壳后种子和剥壳后破皮种子,对带壳种子用低温层积和交替变温层积处理,研究不同处理对华中樱桃种子萌发的影响。结果表明：(1)华中樱桃种子平均长7.34 mm,平均宽5.33 mm,平均厚4.30 mm,平均千粒重68.54 g。(2)华中樱桃种壳和种皮对种子吸水性能有不同程度的抑制作用,带壳种子、剥壳种子和剥皮后破皮种子分别在吸水32 h、50 h、52 h后达到吸水饱和状态,其饱和吸水率分别为34.31%、55.25%、63.85%。(3)剥壳加赤霉素处理可打破华中樱桃种子的休眠,剥皮后破皮种子在200 mg·L^-1GA₃溶液中浸种4 h后发芽率最高,为60.67%。(4)低温层积处理珍珠岩效果优于河沙,4℃珍珠岩层积90 d处理种子...     

西番莲病毒病害研究进展

病毒病是危害西番莲产业的主要病害之一,严重影响西番莲的产量和品质。目前,国外对西番莲病毒病研究较多,并取得了一定进展。中国西番莲病毒相关研究仅涉及病原鉴定,在病毒流行病学、致病机理和抗病资源鉴选等方面鲜有报道。本文重点综述了国内外已经报道的西番莲病毒种类、侵染特性、检测技术以及主要防治策略,并对西番莲病毒病的主要研究方向进行了展望,以期为中国西番莲病毒病的研究和防治提供参考。     

柑橘叶片蛋白质高效提取与溃疡病PthA蛋白Western blot分析

利用三氯乙酸-丙酮法、Tris-HCl提取法、改良的PBS法对柑橘叶片进行蛋白质提取比较研究, 发现改良的PBS法提取蛋白质，不仅提取效率高, 质量好，浓度高，而且杂质干扰较少, 技术操作简单。通过研究确定了一套适用于柑橘叶片蛋白质的提取、定量、凝胶制备、电泳、转膜、封闭、抗体孵育以及显色的Western blot方法。 利用这一方法对转pthA-nls基因的糖橙、转pthA-nls基因的冰糖橙叶片蛋白质进行了研究，发现与抗柑橘溃疡病相关的蛋白PthA在48 kD成功表达。     

转基因甜橙定量PCR分析体系的建立

以转pthA-nls基因甜橙45d叶龄叶片、枳橙的根、茎、叶不同器官以及非转基因枳、枸橼、温州蜜柑、沙田柚的45d叶龄叶片为试材,采用SYBR Green Ⅰ荧光染料法,检验不同柑橘类型以及枳橙不同器官中β-actin基因表达的稳定性,并以β-actin基因内参基因对pthA-nls庙基因在转pthA—nls基因甜橙中的表达量进行分析。结果表明：β-actin基因在柑橘的不同类型及同一类型的不同组织中表达均较恒定,可作为内参基因用于柑橘基因的定量PCR分析;同时,试验还应用建立的方法体系分析转dthA-nls基因甜橙,基本明确各转基因株系中目的基因表达水平。     

枸橼C-05抗柑橘溃疡病相关PRR基因LYK5的初步鉴定

为筛选出抗溃疡病病菌相关PRR(Pattern Recognition Receptors)基因,本研究以接种了溃疡病菌Xcc的抗病种质枸橼C-05(JY C-05)和感病种质冰糖橙(BTC)、酸橙(SC)及早蜜椪柑(ZM)为研究对象,利用荧光定量PCR分析PRR基因的表达,结果显示PRR基因中的LYK5(LYSIN MOTIF-CONTAINING RECEPTOR-LIKE KINASE5)基因在枸橼C-05中表达上调而在其它感病种质中表达下调,表明LYK5基因可能与枸橼C-05抗溃疡病相关;对枸橼C-05和感病种质LYK5核酸序列及氨基酸序列进行差异分析,发现枸橼C-05 LYK5基因与冰糖橙、来檬(LM)有差异,但是与大香橼(DXY)和爪哇柠檬(ZWNM)LYK5基因相似度为100%,说明基因结构差异不是枸橼C-05的LYK5基因参与抗溃疡病的原因;进一步对其蛋白关键结构域进行比较分析,显示LYK5蛋白质信号肽第16位氨基酸、LysM基序区域(第203号氨基酸,第209号氨基酸)和蛋白激酶结构域(第394位,第449位,第468位,第492位,第647位氨基酸)存在差异;同时,对其三级结构进行比对发现枸橼C-05 LYK5蛋白结构与感病种质冰糖橙、来檬、爪哇柠檬和大香橼并无差异,进一步表明LYK5基因参与枸橼C-05抗溃疡病的过程不是由其蛋白结构差异所致。分析枸橼C-05和其他柑橘种质的LYK5启动子,大多数元件的差异不能区分抗病和感病柑橘种质,只有枸橼C-05缺失激活分生组织特异性调控元件,其他柑橘种质均有该元件,这是不是LYK5在接种Xcc的不同柑橘中表达差异的原因还有待进一步探究。     

樱花远缘杂交胚抢救技术

【目的】为提高樱花杂交育种效率,对樱花远缘杂交胚离体培养进行胚抢救。【方法】以迎春樱桃为母本,华中樱桃、尾叶樱桃、钟花樱桃为父本进行远缘杂交,对不同时期的坐果率进行统计,确定杂交种胚败育时期;对不同时期杂交胚进行萌发实验,确定杂交胚抢救适宜时间。以1/2MS培养基为基本培养基,添加不同浓度的6-BA、KT和NAA混合物以研究植物生长调节剂对种胚萌发及幼苗生根的影响;将胚抢救苗分别接种到MS、1/2MS、WPM培养基中,研究其根系生长情况;以泥炭、珍珠岩（1∶1）,椰糠、珍珠岩（1∶1）,黄土、珍珠岩（1∶1）3种基质栽植胚抢救苗,筛选适合胚抢救苗移栽基质。【结果】以迎春樱桃为母本的杂交组合中,胚败育发生时间在授粉后15 d;胚抢救适宜的时间在授粉后25 d;诱导杂交胚萌发的适宜基本培养基为1/2MS培养基;诱导胚抢救苗生根的适宜培养基为WPM培养基;不同杂交组合的杂交胚萌发和胚抢救苗生根需要的植物生长调节剂配比不同;幼苗适宜移栽基质为泥炭、珍珠岩（1∶1）,成活率95%以上。【结论】该技术对于樱花远缘杂交获得新种质资源有良好的效果,能明显提高樱花远缘杂交育种的成功率,对樱花育种意义重大...     

湖南地区柑橘类植物景观资源的分析及配置模式研究

柑橘类植物株型饱满、花繁香郁、秋季金果累累。柑橘象征品性高洁,寓意吉祥安康,再加上特殊的药用价值和芳香功能,使之能成为一种优良的现代景观植物。湖南地区柑橘资源丰富,诸多品种同时具备观赏性、食用性及药用价值。本文分析了湖南地区柑橘类植物的生长习性、观赏特点,挖掘其在园林景观设计上的应用价值,提出了适合这类植物的果林式、庭荫式、盆栽式和篱垣式四种园林配置方式,为园林设计中植物选择和配置提供参考。     

47份樱花种质资源的基因分型和遗传多样性分析

为给优异樱花种质的保存和利用提供理论依据,对47份樱花种质资源进行了RAD简化基因组测序,挖掘高一致性的群体SNP,应用RAxML、ADMIXTURE、GCTA、PopGenome和Arlequin 3.0等生物信息学软件进行了系统进化树构建、基因分型分析、主成分分析和核苷酸多样性分析。经过基因型完整性过滤和紧密连锁位点筛选后,共获得79 667个高一致性群体SNP。系统进化、遗传结构和主成分聚类分析结果基本一致,47份种质资源分为8个类群,各类群的核苷酸多样性(π)和平均期望杂合度(He)分别为Ⅰ：0.128 19,0.119 94;Ⅱ：0.139 64,0.130 55;Ⅲ：0.215 5,0.164 73;Ⅳ：0.086 82,0.061 22;Ⅴ：0.095 49,0.069 73;Ⅵ：0.191 22,0.106 1;Ⅶ：0.168 5,0.158 78;Ⅷ：0.290 98,0.183 43。类群Ⅳ与Ⅴ之间的遗传分化程度最高(FST=0.461 289),其次是类群Ⅳ与Ⅵ(FST=0.456 958),类群Ⅶ与Ⅷ之间的分化程度最低(FST=0.097 613),各类群之间的...     

利用小RNA测序技术检测贵州西番莲病毒

病毒病害是西番莲重要病害之一,明确病毒种类可为病害防治提供理论依据。本研究应用小RNA测序技术对6份疑似病毒侵染的西番莲叶片样本进行病毒种类鉴定,发现混合样本中含有黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）和夜来香花叶病毒（Telosma mosaic virus, TeMV）。应用RT-PCR分别扩增6份样本中2种病毒的外壳蛋白（coat protein, CP）基因序列,进一步证实6份样本中均含有CMV和TeMV。CMV的CP基因开放阅读框大小为657 bp,与已报道的其他分离物的一致性为82.3%~95.9%;TeMV的CP基因开放阅读框为816 bp,与其他分离物的一致性分别为87.8%~99.3%和87.8%~98.3%。上述结果表明,贵州西番莲中的病毒是CMV和TeMV的分离物,分别命名为CMV-GZ（CP基因登录号为MH623077）、TeMV-GZ1（MH623078）和TeMV-GZ2（MH623079）。