土壤拮抗链霉菌R15β-1,3-葡聚糖酶的纯化与部分特性分析

拈抗链霉菌（Steptomyces spp．）R15菌株是从大白菜植株根际土壤分离得到的,其代谢产生的抗菌物质对多种植物病原真菌有很强的抑制作用。采用ABP选择性培养基诱导培养法,获得4株（R8,R15,R31和AS）产β-1,3-葡聚糖酶菌株。其中链霉菌R15菌株在ABP平板上培养7d后,透明圈最大（〉12mm）,澄清度最高。从R15菌株提取酶液,经10％～75％的硫酸铵沉淀盐析、羟基磷灰石柱层析及DEAE-52柱层析得到纯化,纯化倍数为13．98,回收率达4．031％。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶的分子量为41.3kDa。酶特性研究结果表明。该酶作用的最适温度为55℃,最适pH为5．0,低于55℃、pH7．5以下酶较稳定。Fe^3＋、K^＋、Cu^2＋、Hg^2＋对酶有抑制作用,而Ca^2＋、Fe^2＋、Ba^2＋、Mn^2＋、Al^3＋及Zn^2＋对酶有激活作用。     

野生紫平菌丝生长营养物质优化研究

采用单因素试验方法,研究野生紫平菌丝在不同营养条件下的生长状况。结果表明：培养基中适宜菌丝生长的碳源是麦芽糖,其次是蔗糖和淀粉;氮源是蛋白胨,其次是酵母浸粉;适宜的碳氮比是25∶1;母种培养基中需添加复合维生素B 10~15 mg/L,硫酸镁3.0~4.5 g/L。最适培养基配方为：麦芽糖20.36 g,蛋白胨2.64 g,硫酸镁4 g,复合维生素B 15 mg,琼脂20 g,加水至1 000 m l。     

土壤拮抗链霉菌R15菌株发酵产物的抑菌作用

对一株土壤拮抗链霉菌（Streptomyce spp.）R15菌株发酵液的抑菌效果、热稳定性和酸碱稳定性以及作用机制进行了初步研究。结果表明，拮抗链霉菌R15发酵液对棉花枯萎病菌分生孢子萌发抑制作用强，抑制率达98.37%。烟草赤星病菌孢子萌发后芽管顶端膨大成球形，芽管停止生长；烟草炭疽病菌孢子萌发后不能产生附着胞，且芽管顶端有突起。处理烟草黑胫病菌和辣椒疫霉病菌菌丝畸变、扭曲、菌丝壁消解；R15通过菌丝缠绕、穿透、紧贴的方式重寄生于烟草黑胫病菌菌丝上，致使菌丝断裂。链霉菌R15发酵液的热稳定性和酸碱稳定性较强，在20~55℃，pH3~9范围内都具有抑菌活性。     

拮抗菌R31菌株种的鉴定

利用有益微生物防治农作物病害是今后的重要方向。近年来从山东省各地采集农作物根际土壤,筛选出一批对主要农作物的病原菌有显著抑制作用的拮抗菌,其中编号Ｒ３１菌株对番茄细菌性疮痂病菌等有显著的抑制作用,现将Ｒ３１菌株种的鉴定结果报道如下。１材料与方法１．１...     

内生细菌作为生防因子的研究进展

详细综述了内生细菌作为生防因子的四大优点即占据有利的生态位，能经受住植物的作用与病菌直接作用 及作为外源基因的载体等。阐明了其生防机制，包括产生抗生素、某些酶类等次生物质，诱导植物产生ISR，促进植物生长，与病菌竞争生态位等，另外对内生细菌在植物体内的转运情况，及对未来内生菌大田应用需要解决的问题也进行了讨论。     

山东省烟草青枯病的发生和病原菌鉴定研究

１９９０年在山东沂南县调查发现烟草枯萎的病株，分离到细菌菌株。经对各菌株致病性测定，格兰氏染色反应，细菌形态，培养性状，生理生化测定和血清学反应鉴定，结果表明，这５个菌株均属于青枯假单胞杆菌Ｐｅｓｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｉｕｍＥ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ。     

烟草青枯病研究进展

本文概述了烟草青枯病的研究进展。阐明了烟草青枯病菌种以下分类及其变异，生态学特点和防治的研究现状，以及防治对策等进行了探讨。     

拮抗链霉菌R15β-葡萄糖苷酶的纯化及特性研究

 从山东泰安郊区大白菜植株根际土壤中分离筛选获得一株拮抗链霉菌(Streptomyces spp. )R₁₅菌株。采用固体发酵、粗酶液 (NH₄)₂SO₄分级沉淀、DEAE-52阴离子交换柱层析和Sephadex G75凝胶柱层析等步骤从链霉菌(Streptomyce spp.)R₁₅中分离纯化获得β-葡萄糖苷酶。结果表明, 纯化倍数16.28, 回收率为14.59％, SDS-PAGE电泳测得相对分子量为63.89 kDa。经TLC分析酶解产物, β-葡萄糖苷酶与水杨苷反应生成D-葡萄糖和水杨醇。以水杨苷为底物时, 该酶的Km值为10.644 mmol/L, Vmax为0.525 μmol·L^-1·min^-1。该酶的最适温度为65℃, 70℃以下相对稳定;最适pH为5, pH 3~7之间相对酶活在75％以上。Cu²⁺、Hg²⁺和Fe²⁺对酶有抑制作用, 其中Hg²⁺和Cu²⁺的抑制作用最强, 酶活力完全丧失;而Ca²⁺, Mn²⁺对酶均有激活作用, 相对酶活分别高达137.18%和119.52%。     

大肠埃希氏菌F18菌毛FedF蛋白的表达与鉴定

根据已发表的F18菌毛F亚单位的基因序列(fedF)设计了1对引物．利用PCR技术分别扩增到F18ab和F18ac菌毛的fedF编码序列，并按预定的阅读框架分别插入表达载体pGEX-6p-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游，获得重组质粒pPFedF／ab与pPFedF／ac，然后转化大肠埃希氏菌BL21获得重组菌PPFedF／ab与PPFedF／ac。测序结果表明，fedF编码序列大小均为837bp，与GenBank中登录的EedF结构编码序列(Z26520)大小一致。通过对菌体裂解物进行SDSPAGE电泳分析以及Western-blotting鉴定，证明重组大肠埃希氏菌PPFedF／ab与PPFedF／ac均可以表达融合蛋白形式的FedF(分别命名为GST-FedF／ab与GST-FedF／ac)。