生防链霉菌Men-myco-93-63遗传转化体系的建立和优化*

摘要：玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病自然衰退土壤中的一株拮抗菌。该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌、瓜类白粉病菌等多种重要的植物病原菌具有很强的抑制作用,有良好的生防应用潜力。分别以基因整合型质粒pSET152和基因破坏型质粒pKC1139为出发质粒,ET12567(PUZ8002, pSET152/ pKC1139 ) 为供体,Men-myco-93-63孢子和菌丝体为受体,选取MS、PDA、TSB琼脂培养基、燕麦培养基为不同的培养基进行接合转移试验。结果表明MS培养基为接合转移的最适培养基,经验证,已成功地将质粒pSET152/ pKC1139转入到了Men-myco-93-63 中。以孢子为受体时,孢子预萌发条件为50℃热激10 min,.37℃温育2.5 h,转化效率是10-7~10-6。以菌丝体为受体时,转化效率是10-7~10-6,但菌丝培养过程中容易出现污染。另外,抗生素的覆盖时间对接合转移效率的影响较明显,16-18 h覆盖效果最好。     

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中3个调控基因的检测

玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63及其发酵液对多种重要植物病原菌均表现出很强的抑制作用,在植物病害生物防治方面有很大的应用潜力。根据天蓝色链霉菌A3(2)调控基因tcrA、sarA和scrX序列设计引物,扩增Men-myco-93-63基因组DNA,分别获得705bp、1 472bp和473bp的片段,经测序和比对,上述片段与天蓝色链霉菌A3(2)的tcrA、sarA和scrX基因在核苷酸序列和氨基酸序列上同源性均为99%,因此,推测玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中很可能含有这些调控基因。Men-myco-93-63中这3个调控基因的初步检测为玫瑰黄链霉菌功能基因的获得、菌株的遗传改良和代谢调控途径的研究提供了重要依据。     

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63负调控基因nsdAmgh的克隆及序列分析

nsdA (Negative regulator of Streptomyces differentiation)基因是天蓝色链霉菌中发现的与抗生素合成相关的负调控基因.根据天蓝色链霉菌 A3(2)的序列设计引物扩增玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 菌株中的该基因,经测序和序列分析表明,由保守序列引物nsdA-2R和nsdA-2L克隆到的Men-myco-93-63 菌株中的该基因 800 bp片段与已知nsdA基因核苷酸保守区域序列同源性达到99%,由全长序列扩增引物nsdA WZ-R和nsdA WZ-L克隆到的该基因包含一个完整的开放阅读框,共编码 369 个氨基酸,与变铅青链霉菌和天蓝色链霉菌A3(2)中的nsdA 基因的核苷酸序列同源性达到100%,氨基酸序列同源性达到99%.该全长基因命名为nsdA_(mgh),其在玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 中的发现为阻断该负调控基因以期获得抗生素高产工程菌株提供了重要依据.     

生防链霉菌Men-myco-93-63遗传转化体系的建立和优化*

玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病(S.scabies)自然衰退土壤中的一株拮抗菌.该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)、瓜类白粉病菌(Sphaerotheca fuziginea Poll.)等多种重要的植物病原菌具有很强的抑制作用,有良好的生防应用潜力.为了对玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中一些功能基因进行研究,得到高产抗生素的工程菌株,首先应对该菌的遗传转化条件进行优化.作者分别以基因整合型质粒pSET152和基因破坏型质pKC1139为出发质粒,ET12567(PUZ8002,pSET152/pKC1139)为供体,Men-myco-93-63孢子和菌丝体为受体,选取MS、PDA、TSB琼脂培养基、燕麦培养基为不同的培养基进行接合转移试验.结果表明MS培养基为接合转移的最适培养基,经验证,已成功地将质粒pSET152/pKC1139转入到了Men-myco-93-63中.以孢子为受体时,孢子预萌发条件为50℃热激10 min,37℃温育2.5 h,转化效率是10-7～10-6.以菌丝体为受体时,转化效率是10-7～10-6,但菌丝培养过程中容易出现污染.另外,抗生素的覆盖时间对接合转移效率的影响较明显,16～18 h覆盖效果最好.     

基于微课的翻转课堂在生物防治技术课程中的应用——以河北北方学院为例

生物防治技术是高等农业院校植物保护专业一门实践性很强的专业选修课。本研究将微课与翻转课堂结合运用于课程实践之中,针对前期调研结果对课程教学设计、教学资料、互动平台、评价方式等方面进行详细分析,最终能够增加学生学习兴趣,提高学生参与度,使学生专业基础扎实,实践能力强,对课程的掌握程度高。     

八棱海棠常见病害发生规律及防控研究进展

八棱海棠原产于河北省怀来县,是果树优良的砧木,而且其经济、观赏、药用价值也非常高。八棱海棠生长过程中,各种病害的发生对其自身的价值和产业的健康发展造成了巨大的影响。从病害管理的角度出发,总结归纳了八棱海棠病害的主要发生种类及病害的研究进展,分析了目前病害防控过程中存在的问题,提出了综合防治措施,在一定程度上有效控制病害的发生发展,促进八棱海棠田间管理水平的提高。     

玫瑰黄链霉菌对根结线虫的防效及对土壤微生物区系的影响

利用玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 菌株的固、液体发酵物防治设施番茄和黄瓜根结线虫,研究其对根结线虫的防效以及施用生防菌对土壤微生物区系的影响。结果表明：Men-myco-93-63 菌株固体发酵物1 V∶200 V对黄瓜和番茄根结线虫病的防效分别达到了65.62% 和57.69%;施用生防菌使得植株根际土壤中细菌数量增加了19.57%,放线菌数量增加了316.67%,真菌数量降低了28.57%,以上3 种可培养微生物总量由7.4×10⁶ cfu·g^-1增加到16.75×10⁶ cfu·g^-1,增加了126.35%。     

咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119复配对葡萄灰霉病的防效

为探究杀菌剂与解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens X-119菌株复配防治葡萄灰霉病的可行性,通过平板试验筛选抑菌效果较好的杀菌剂与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株进行复配,测定不同体积比复配剂对葡萄灰霉病的防效,并通过对菌丝形态、产孢量、产核能力及协同转运蛋白超家族（major facilitator superfamily,MFS）相关调控基因表达水平的观察筛选得到最优复配组合。结果显示,咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株体积比为8∶2时的复配剂对葡萄灰霉病菌Botrytis cinerea H259、H261 菌株的抑制效果最佳,毒性比率分别为 1.77 和 1.73,防效分别为 90.91% 和72.33%;离体果实防效分别为83.06%和65.48%,温室防效分别为76.72%和76.24%,且复配剂防效高于单剂。且该复配剂可阻碍葡萄灰霉病菌菌丝正常生长,显著降低其产孢能力和产核能力。实时荧光定量PCR结果显示,该复配剂处理葡萄灰霉病菌后细胞膜转运蛋白相关调控基因BCIN_09g00960、BCIN_03g02340和BCIN_09g00210的表达水平下调趋势显著。表明咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株复配表现出良好的防控效果,生产中可将咯菌腈与解淀粉芽胞杆菌X-119菌株按体积比8∶2复配用于葡萄灰霉病防治。     

126种中草药提取物对两种植物病原菌的抑菌活性

以黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum lagenarium)和白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)为供试真菌,采用生长速率法对126种中草药的80%乙醇提取物进行了离体生物活性测定。结果表明:在提取物供试质量浓度为0.01 g/mL条件下(初筛),龙葵、猫爪草、枇杷叶等27种中草药提取物对至少一种病原真菌的菌丝生长抑制率超过50%,有6种提取物对2种病原菌抑制率均达50%以上。将初筛抑制率达50%以上的提取物浓度稀释为0.005 g/mL,进一步对相应病菌进行测试,发现有11种中草药提取物对黄瓜炭疽病菌的抑制率达60%以上,有3种提取物对白菜黑斑病菌的抑制率在40%以上。     

冀北高原地区山野菜资源开发利用现状与发展对策

冀北高原地区位于河北省北部,属于高寒地区,经济条件落后,当地山野菜资源较丰富,营养价值、中药药用价值、经济价值很高,但是基础研究薄弱,利用率低,开发面狭窄,缺乏深入加工。简述了山野菜的定义、分类及资源特点,以及冀北高原地区的气候条件,归纳了该地区对于山野菜资源的研究现状,开发与综合利用特点,最终提出了山野菜的可持续发展途径,认为山野菜的开发利用要在本着保护资源的基础上进行相应的调查研究,人工栽培技术推广,精深加工,提高附加值,防治过度开发。