杀线虫细菌W3胞外体壁降解蛋白酶的纯化及部分特性

[目的]为筛选和开发高效新型生物杀线虫剂提供依据。[方法]以土壤中筛选的1株具有明显杀线虫活性的细菌菌株W3为供试菌种,对其进行发酵培养,采用硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子柱层析等方法从发酵液中分离W3菌株的杀线虫活性成分,并对各活性成分的杀线虫活性进行测定。[结果]W3菌株粗蛋白处理线虫4h后,虫体活动异常,部分虫体静止不动,处理36h后大部分虫体不活动,部分虫体体壁断裂现象,最终所有线虫被完全消解;从发酵液中纯化出1种能降解线虫体壁的胞外蛋白酶,该酶的分子量约为45KDa,其作用的最佳pH值为7～8,最佳温度为45℃。[结论]W3菌株胞外蛋白酶具有明显的杀线虫活性和线虫体壁降解活性。     

全细胞催化生产γ-氨基丁酸转化液脱色工艺研究

针对本实验室1株高产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,简称GABA)的大肠杆菌,以麸酸为底物利用全细胞催化的方法生产GABA,研究了生产GABA的转化液脱色工艺。试验采用活性炭结合树脂层析的脱色方法,首先对14种脱色树脂的脱色能力进行筛选,结果表明FPA53阴离子交换树脂的脱色效果显著优于其他树脂,通过单因素试验对树脂的脱色温度、pH进行优化,得到FPA53树脂的理想脱色条件与转化液初始条件相近,为温度40℃、pH6。在该条件下,转化液的脱色率达到了85.1%,GABA回收率达到98%以上,谷氨酸去除率达到23%以上。对6种活性炭进行筛选,结果表明2号竹清活性炭的脱色效果显著优于其他活性炭,通过单因素试验对活性炭的添加比例进行优化,得到1%的活性炭添加比例为试验理想比例,在此条件下,转化液的脱色率达到92.8%以上,GABA回收率达到99%,而液体损失率只有2%。最后,将筛选得到的活性炭与脱色树脂结合使用,结果显示,结合使用后的转化液脱色率可以达到99.5%以上,GABA回收率达到98%以上,结晶颗粒洁白无杂色。该研究结果为GABA精制及其大规模工业生产提供基础。     

辅酶Q_(10)菌种选育及高通量筛选研究进展

辅酶Q10在预防和治疗人体疾病上起到非常重要的作用,广泛应用于化妆品和保健品领域,其市场需求和工业产量均持续扩大。微生物发酵法制备辅酶Q10是目前最经济且有前景的方法,而选育获得高产菌株是微生物发酵生产的关键。通常,采用传统或现代遗传改造技术处理菌株,产生大量突变后代,然后从中筛选出增幅最大的高产菌株。由于微生物突变是随机不定向的,因此高通量的筛选技术是实现突变库快速高效筛选和提高育种效率的保障。综述了近年来国内外在辅酶Q10高产菌株选育方面的技术和原理进展,以及显色定量法、紫外薄层色谱、HPLC,UPLC等技术在其高通量筛选方面的应用等相关研究进展。     

重组大肠杆菌全细胞催化合成四氢嘧啶

四氢嘧啶是天冬氨酸的环状氨基酸衍生物,广泛应用于化妆品、食品、药品等领域。通过比较了5个不同来源的四氢嘧啶合成基因簇ectABC,发现从专性嗜碱芽孢杆菌(Bacillus pseudofirmus OF4)来源的基因簇整合到大肠杆菌BW25113中后,得到的重组菌pYB1s-BPectABC/BW25113产四氢嘧啶能力最好。利用单因素试验初步优化了pYB1s-BPectABC/BW25113全细胞催化条件:以100 mmol·L^-1天冬氨酸钠和100 mmol·L^-1甘油为底物,在100mmol·L^-1 KCl的转化液(pH=7.0)中,30℃下反应24h,最终四氢嘧啶的产量可达3.10g·L^-1,转化产率达到0.129g·L^-1·h^-1。本研究初步得到了四氢嘧啶合成重组菌pYB1sBPectABC/BW25113,为后续四氢嘧啶的研究奠定了基础。