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棉花恢复系中含有26S rRNA序列的GH18Rorf392基因克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
以Y18R×P30A杂交F1代自交材料播种后根据雄蕊形态学判断其育性,然后分别提取可育和不育材料现蕾3~5 d的幼蕾总RNA。通过抑制差减杂交的方法获得来自棉花恢复系的EST序列之后,以该EST序列设计引物再做5’和3’RACE,从而获得其全长cDNA序列。由于该基因来源于陆地棉(Gossypium hirsutum)恢复系Y18R,并且编码392个氨基酸的蛋白质,因此,将其命名为GH18Rorf392。该基因的5’端是一个全新的序列,3’端含有26S rRNA序列。该基因可能对研究棉花育性相关功能有帮助。 相似文献
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根据透明颤菌血红蛋白(VHb)的氨基酸序列,按照植物偏爱密码子,对透明颤菌血红蛋白基因(vgb)进行优化改造,同时考虑到可实现分别克隆拼接的酶切位点,设计并合成了22条单链DNA短片段,通过拼接获得了全长450 bp的透明颤菌血红蛋白基因vgbM,并将其克隆至pUC19上,获得重组质粒pGSVHB。利用设计的引物,通过PCR在vgbM基因的5′端引入NcoⅠ位点,将其克隆到原核生物高效表达载体pBV221上,获得质粒pBV221SVHB。转化E.coli. BL21并经热激诱导表达后,在培养物中检测到了约16 kD的VHb蛋白。经CO差示光谱分析测定,该蛋白具有生物活性。为透明颤菌血红蛋白基因vgbM在植物基因工程研究中的应用奠定了基础。 相似文献
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