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克隆岩栖蝮蛇(Gloydius saxatilis)纤维溶解酶(Fibrinolytic enzyme,FLE)基因,分析基因序列并对该基因的功能进行分析;构建真核表达载体并鉴定。从岩栖蝮蛇毒腺细胞中提取总RNA,通过RT-PCR法扩增纤溶酶基因,与pMD18-T载体连接进行TA克隆,再进行序列的测定并且对该序列进行分析。测序鉴定后将纤溶酶基因克隆入真核表达载体pEGFP-C1,构建该基因的真核表达载体pEGFP-FLE,进行双酶切、PCR和测序鉴定。扩增得到包括完整开放读码框在内的长为774 bp的纤溶酶基因序列,成功克隆了编码岩栖蝮蛇纤溶酶的基因序列,开放读码框编码257个氨基酸,其分子质量约为30 KDa,成功构建了真核表达载体pEGFP-FLE。成功克隆岩栖蝮蛇毒纤溶酶基因并构建该酶的真核表达载体为该基因的真核表达及后续研究提供依据。 相似文献
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香菇多糖提取条件的优化研究 总被引:1,自引:0,他引:1
研究了采用微波协同高压热水浸提法从香菇中提取活性多糖的最适条件。通过单因素试验和正交试验,探讨了料液比、微波功率、微波处理时间、高压浸提时间及高压浸提温度对香菇多糖提取率的影响,并以香菇多糖提取率为评价指标,优化提取工艺。试验结果表明,微波协同高压热水浸提法提取香菇多糖的最适条件:料液比为1∶50(g∶mL),微波功率为640 W,微波处理时间为6 min,高压浸提温度为115℃,高压浸提时间为100 min。在此条件下,香菇多糖的提取率为13.8%。 相似文献
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试验研究了超声波协同高压热水浸提法从香菇(Lentinus edodes)中提取活性多糖的最适条件。通过正交试验,探讨了料液比(g/mL,下同)、超声波功率、超声波处理时间、高压热水浸提时间及高压热水浸提温度对香菇多糖提取率的影响,并以香菇多糖提取率为评价指标,优化其提取工艺。结果表明,超声波协同高压热水浸提法提取香菇多糖的最适条件为:料液比1∶50,超声波功率250 W,超声波处理时间8 min,高压热水浸提温度108℃,高压热水浸提时间100 min。在此条件下,香菇多糖的提取率为27.2%。 相似文献
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克隆中介蝮蛇(Gloydius intermedius)纤维溶解酶(Fibrinolytic enzyme,FLE)基因,分析其基因序列并对该基因的功能进行分析.从中介蝮蛇毒腺细胞中提取总RNA,通过RT-PCR法扩增纤溶酶基因,与pMD18-T载体连接进行TA克隆,再进行序列的测定并且对该序列进行分析.扩增得到完整开放读码框在内的长为777 bp的纤溶酶基因序列.成功克隆了编码中介蝮蛇纤溶酶的基因序列,推导其编码的氨基酸序列.开放读码框编码258个氨基酸,含有大量疏水氨基酸.其中,前1~19位氨基酸编码信号肽;根据同源性推测,以His65、Asp110和Ser204组成纤溶酶的活性中心并高度保守;序列内合12个Cys.两两配对结合成的6个二硫键对纤溶酶的高级构型和稳定性至关重要.成功克隆中介蝮蛇毒纤溶酶基因为进一步研究该基因的遗传特征以及为该酶在原核及真核生物中的表达研究提供依据. 相似文献
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目的:克隆中介蝮蛇(Gloydius intermedius)纤维溶解酶(Fibrinolytic enzyme,FLE)基因,分析其基因序列并对该基因的功能进行分析。材料及方法:从中介蝮蛇毒腺细胞中提取总RNA,通过RT-PCR法扩增纤溶酶基因,与pMD18-T载体连接进行TA克隆,再进行序列的测定并且对该序列进行分析。结果:扩增得到完整开放读码框在内的长为777bp的纤溶酶基因序列。结论:成功克隆了编码中介蝮蛇纤溶酶的基因序列,推导其编码的氨基酸序列。开放读码框编码258个氨基酸,含有大量疏水氨基酸。其中,前1-19位氨基酸编码信号肽;根据同源性推测,以His65、Asp110和Ser204组成纤溶酶的活性中心并高度保守;序列内含12个Cys,两两配对结合成的6个二硫键对纤溶酶的高级构型和稳定性至关重要。成功克隆中介蝮蛇毒纤溶酶基因为进一步研究该基因的遗传特征以及为该酶在原核及真核生物中的表达研究提供依据。 相似文献
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为优化低共熔溶剂提取的玉米芯总黄酮的纯化工艺和测定纯化黄酮的活性,本文首先对几种不同特性的大孔吸附树脂进行筛选,并优化了吸附纯化工艺,然后以对羟基自由基(·OH)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS)的清除性能为指标,评价玉米芯黄酮的抗氧化性;又通过体外抑制细菌生长实验来测定黄酮的抑菌性;最后通过体外抑制α-淀粉酶活性实验测定其降糖活性。结果表明,XAD-2树脂和D101树脂在纯化玉米芯黄酮时效果相当,浓度1 mg·mL-1、pH 4.0的待吸附液以15 mL·h-1的速度上样吸附,再用70 mL 70%乙醇洗脱液以60 mL·h-1的速率对树脂进行洗脱,最终可将玉米芯黄酮分别纯化2.05和1.94倍。纯化后的玉米芯黄酮对自由基的清除能力虽弱于VC,但较之纯化前有所增强;玉米芯黄酮对实验细菌均有抑制性,纯化后的玉米芯黄酮对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用强于纯化前;玉米芯黄酮有降糖活性,较高浓度时其降糖能力接近阿卡波糖。可知低共熔溶剂提取的玉米芯黄酮有抗氧化、抑菌和降糖活性,XAD-2大孔树脂和D101大孔树脂皆可用于纯化玉米芯黄酮,纯化效果好。 相似文献
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试验旨在获得高活性的金针菇抗氧化肽,优化益生菌发酵制备金针菇抗氧化肽的条件。试验以金针菇为发酵基质,以抗氧肽对2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除率为指标,对枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和黑曲霉3种益生菌进行了筛选,使用pH值沉淀法分离抗氧化肽的最适pH值,采用单因素和响应面试验对发酵条件(液料比、发酵时间、发酵温度、金针菇用量)进行考察。结果显示,枯草芽孢杆菌适合发酵金针菇制备抗氧化肽;沉淀抗氧肽的最适pH值为6;最佳发酵条件为液料比4.50 mL/g、发酵时间30 h、发酵温度35℃、金针菇用量40.00 g,此条件下金针菇抗氧化肽对ABTS自由基清除率预测值为95.60%,实测值为96.75%,实测值与预测值相差很小,表明此响应面法优化的工艺可靠,截留分子量小于3 kD的抗氧肽活性最强。研究表明,通过此法制备的金针菇抗氧肽具有很强的抗氧化性,为金针菇产品的开发利用提供了参考。 相似文献
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为了从中介蝮蛇毒腺中提取总RNA,研究其具有重要药用价值的纤溶酶,从基因工程的角度进行研究开发蛇毒资源。通过RT-PCR法扩增纤溶酶基因与pMD18-T载体连接进行TA克隆,得到FLE基因,再亚克隆到pPROEXHTb原核表达载体上,构建重组表达载体;将阳性重组表达载体转化到大肠杆菌中诱导表达,采用SDS-PAGE检测该重组蛋白的分子量。结果表明:成功的构建了重组原核表达载体ppPROEXHTb-FLE,并在大肠杆菌中获得表达,重组蛋白分子量约为30 KDa。说明可以采用该方法进行中介蝮蛇毒纤溶酶的原核表达,该研究为进行蛇毒纤溶酶的开发奠定了分子基础。 相似文献