出血性大肠杆菌O157eae-stx1/2B融合基因的构建和表达

构建表达eae和stx1／2B的融合基因，克隆eae基因的C端280个氨基酸残基(Int280)基因部分，以正确地阅读框定向插入到含有stx1／2B融合基因的质粒，构建重组质粒，将其转化于BL21(DE3)，用IPTG进行诱导表达，经SDS—PAGE电泳检测，该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明：目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的50．67％。由于该融合蛋白由eae、stx1B、stx2B等三部分抗原组成，可刺激机体产生针对紧密素和StxB的抗体，在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。     

4种日粮条件下30～150日龄羔羊瘤胃消化代谢功能的变化

将16只30日龄体重约6～10kg装有瘤胃瘘管的罗姆尼与新疆美利奴羊杂交公羔分为4组，分别喂以不同消化能（DE，MJ／kg）和蛋白质（CP，％）水平的日粮（DE／CP：11．91／20、11．91／14、8．15／20和8．15／14），以15d为一研究时间段，每时间段的第9、10和11天在第一次喂料后的第0、1、3、6和9h采取瘤胃液样品，以研究30～150日龄期间羔羊瘤胃消化代谢的变化规律。结果表明，羔羊瘤胃液pH、氨态氮、丙酸、乙＋丙＋丁酸浓度随日龄而不断升高，在100日龄时趋于稳定，并且受日粮营养水平的影响。乙酸浓度的变化虽也受日龄和日粮营养水平的影响，但相对较小。羔羊瘤胃液体积在120日内几乎增加了15倍，并且也受日粮营养水平的影响。研究表明瘤胃消化代谢的发育是渐进性的，在100日龄时各项指标均趋于稳定，并且瘤胃液体积的增大对于瘤胃消化代谢能力的发育起着首要的作用。     

秋末刈割处理对沙地苜蓿冬季根颈非结构碳氮的影响

为解决科尔沁沙地紫花苜蓿秋末是否应该刈割及最佳刈割时期的争议,对秋末不同时期刈割处理和未刈割的8个紫花苜蓿品种根颈中非结构碳氮物质变化进行了测定。结果表明,未刈割紫花苜蓿根颈中可溶性糖含量、淀粉含量均显著高于不同时期刈割的紫花苜蓿根颈中含量(P<0.05);土壤冻融交替期(11月1日),秋末晚割(10月15日)紫花苜蓿根颈中可溶性蛋白含量和游离氨基酸含量与未刈割相比均显著增加(P<0.05)。土壤封冻期(12月1日),未刈割紫花苜蓿根颈中可溶性蛋白、游离氨基酸含量均高于不同时期刈割根颈中含量,其中游离氨基酸含量晚割(10月15日)均显著低于未刈割根颈中含量(P<0.05),可溶性蛋白含量10月1日刈割均显著低于未刈割根颈中含量(P<0.05),且10月1日刈割后苜蓿根颈中游离氨基酸、可溶性蛋白含量经过“增长-降低-稳定”过程。两时期测定结果不同,可能与刈割后苜蓿再生长有关;未刈割与刈割处理不同紫花苜蓿品种间根颈中可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白、游离氨基酸含量存在差异;未刈割紫花苜蓿根颈中C/N显著大于不同时期刈割处理的根颈中C/N。初步结论为:科尔沁地区冬季寒冷、降雪少,秋末刈割导致地上碳水化合物无法向根系运输,且刈割后苜蓿再生长消耗根系营养物质。为确保紫花苜蓿安全越冬保障苜蓿根系中积累大量储藏物质,不适宜秋末敏感期刈割或选择种植刈割后根颈中C/N高的紫花苜蓿品种如东苜1号等。     

耕作方式与长期定位施肥对雨养农田冬小麦产量的调控效应

为了明确西北黄土高原半湿润偏旱区耕作方式与长期定位施肥对冬小麦产量的调控效应,以设在半湿润偏旱区连续12年的耕作与肥料长期定位试验为平台,采用裂区设计,以传统耕作和免耕耕作为主处理,不施肥(CK)、单施无机氮肥(N)、单施无机磷肥(P)、单施有机肥(M)、无机氮磷肥配施(NP)、有机无机肥配施(NMP)为副处理,栽培制度为1年春玉米-3年冬小麦轮作,研究耕作及施肥措施对冬小麦产量的影响及其在生产年型间的变化关系。结果表明,不同年型及耕作方式均以有机无机配施冬小麦产量最高,有机肥单施高于化肥单施,磷肥单施高于氮肥单施。耕作方式间表现为传统耕作高于免耕耕作,年型间表现为丰水年>平水年>干旱年,耕作和施肥方式的增产效果以干旱年最好,平水年和丰水年差异不显著。有机无机配施与传统耕作结合优化了冬小麦冠层温度、叶绿素相对含量等生理指标,提高了光合速率、气孔导度及蒸腾速率,因而改善了有效穗、穗粒数和千粒重等产量性状而使冬小麦增产。在550 mm左右降水量的陇东旱塬雨养农业区,无论何种耕作方式及生产年型,长期采用有机无机或无机氮磷肥配施均表现出持续提高冬小麦产量的良好作用。因此,有机无机配施结合传统耕作是提高陇东半湿润偏旱区冬小麦产量的最佳耕作栽培模式。     

四倍体鸭茅产量及其构成因素的QTL定位

产量相关性状是复杂的数量性状,对鸭茅的单株产量及构成因素进行QTL分析,可提高育种中对产量性状优良基因选择的效率,同时为鸭茅遗传改良、基因克隆及分子标记辅助育种提供理论依据。以四倍体鸭茅“楷模”和“01436”为亲本杂交而成的作图群体为试验材料,于2014年对洪雅、宝兴两个不同生境下鸭茅株高、旗叶长、倒二叶长、旗叶宽、倒二叶宽、茎粗、花序长、分蘖数、单株干重等9个产量相关性状进行了表型鉴定及相关性分析。此外,在已构建的高密度鸭茅分子遗传图谱的基础上,采用MapQTL 5.0进一步对这些性状QTL定位分析。结果表明,绝大多数性状在亲本间呈显著差异且都整体表现出连续变异,符合数量性状遗传的特征;相关性分析表明,大多数产量相关性状均与干重极显著正相关,与单株干重相关性最好的依次为分蘖、株高;QTL分析发现,控制该9个农艺性状的QTL共60个,洪雅38个,宝兴22个,这些QTL分别定位于分子连锁图谱的1、2、3、4、5共5个连锁群上,单个QTL的贡献率为5.7%~24.7%,单个性状QTL个数为2~15个。其中,控制株高、花序长的QTL各12个,控制倒二叶长、茎粗的QTL各4个,控制旗叶宽、倒二叶宽的QTL各2个,控制单株干重的QTL有6个,影响分蘖的QTL为3个,与旗叶长相关的QTL最多15个。     

sikFBA4基因启动子的克隆及低温表达模式分析

天山雪莲生长于常年积雪覆盖高海拔处的高山区域,具有很强的极端低温生境适应能力,属于研究植物低温适应的良好模式植物。前期的研究表明,sikFBA4基因可以显著提高番茄的抗寒能力。为进一步研究sikFBA4基因的耐寒响应模式,以天山雪莲为材料,采用实时荧光定量PCR分析sikFBA4在低温胁迫下的表达模式;利用高效热不对称PCR法(Hi-Tail PCR)克隆sikFBA4启动子序列并进行生物信息学分析。为分析PsikFBA4序列克隆的完整性及转录表达特性,将PsikFBA4与GUS基因融合在烟草中进行瞬时表达。结果表明,sikFBA4在低温胁迫条件下的表达发生瞬时显著上调,并在1 h达到峰值,而后表达下调。通过启动子克隆分析,在PsikFBA4序列-1648 bp位置处具有冷响应元件LTRE;进一步的GUS染色和酶活力测定结果表明,低温能够显著提高GUS基因的表达活性,说明sikFBA4属于低温诱导型基因。SikFBA4基因启动子的克隆、序列分析以及表达分析,为进一步探究雪莲果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(sikFBAs)基因的表达与调控机制奠定了基础。     

高寒区轮作模式对当归田土壤特性及药材产量的影响

连作重茬造成当归产量逐年下降。采用药用植物秦艽(QJ)、羌活(QH)轮作当归(DG),以当归连作为对照,通过测定土壤和药材产量指标,利用主成分分析确定各指标权重,并结合隶属综合因子分析和聚类分析,旨在揭示不同药用作物轮作当归对土壤环境与药材产量的影响,为筛选适宜当归栽培的轮作模式提供科学依据。结果表明,不同作物轮作对当归田土壤特性和药材产量均具有显著影响,秦艽轮作当归可有效改善土壤特性,使当归成药期土壤磷和钾含量处于较低水平,而有机质维持在较高水平,对土壤水分的季节调控作用更为显著,与当归连作相比较,当归成药率提高94.10%,药材单根鲜重和药材鲜产量分别提高53.46%和125.56%,而羌活轮作当归土壤pH最高,有机质含量最低,当归连作土壤有机质含量虽高,但土壤富集磷和钾,对土壤水分季节性调控作用最小,当归成药率和药材产量均低。不同轮作模式当归成药率和药材产量依次为秦艽-当归>当归-当归>羌活-当归,综合指数大小依次为秦艽-当归(0.8132)>羌活-当归(0.3315)>当归连作(0.2051)。聚类分析将3种轮作模式分为三大类,重复小区亚类间距离均小,说明不同作物轮作对土壤的调控作用不同,高寒产区秦艽轮作当归是优化调控土壤环境,提高当归产出性能的有效轮作模式。     

Effects of five cryoprotectants on proliferation and differentiation‐related gene expression of frozen‐thawed bovine calf testicular tissue

The cryopreservation of testicular tissue is a potential method for preserving male fertility. However, the effect of cryopreservation on bovine calf testicular tissue is scarce. This study investigated the effect of different cryoprotectants on bovine calf testicular tissue at the molecular level. Testicular tissue from ten immature bovine calves (6 months) was collected after slaughter and cryopreserved in an extender containing different concentrations of the following five cryopreservation solutions (CP): bovine serum albumin (BSA) with 5% dimethyl sulfoxide (DMSO), trehalose with 5% DMSO, DMSO and glycerol and ethylene glycol (EG). After 7‐day cryopreservation, the expression levels of three spermatogonial stem cell (SSC)‐related genes, octamer‐4 (OCT4), KIT ligand (MGF/SCF) and kit oncogene (C‐KIT), were investigated by quantitative PCR (qPCR). The cell viability was highest for the tissues preserved with 30 mg/ml BSA (77.82% ± 1.22) and 40 mg/ml trehalose (74.23% ± 1.16) compared with other groups (p < 0.05), and the level of expression of the three genes was highest with 30 mg/ml BSA (p < 0.05). Compared with other CPs, the 30 mg/ml BSA and 40 mg/ml trehalose have the better cryopreserve protection. The 30 mg/ml BSA is the most viable media for the cryopreservation of testicular tissue from cattle.     

水貂变形杆菌病的检测与防治

为给水貂变形杆菌病的临床诊断和治疗提供依据,对发病水貂进行了临床和病理学诊断、细菌分离培养、生化试验、药敏试验及动物试验,同时进行了病毒检测,从病貂体内分离出革兰氏阴性、多形性杆菌。该菌在十六烷培养基上呈扩散生长,能够发酵葡萄糖,硫化氢、苯丙氨酸、脲酶试验均为阳性。最终通过动物试验,验证分离到的杆菌为变形杆菌。随后以药敏试验为依据,选择对该变形杆菌敏感的丙氟哌酸给予治疗,最终达到良好的治疗效果。     

2017年北京市猪伪狂犬病血清学调查

为了解北京市猪伪狂犬病野毒感染情况,2017年从北京市7个区157个养猪场（户）,采集5 469份猪血清样品,采用猪伪狂犬病病毒（PRV）gE抗体酶联免疫检测试剂盒进行血清学调查。结果显示：北京市7个区均有不同程度的PRV野毒感染,平均样品阳性率为53.36%。其中：经产母猪阳性率最高（58.28%）,其次是育成猪（57.55%）、育肥猪（54.49%）,后备母猪阳性率最低（37.46%）;散养户的样品阳性率较高,为66.42%,规模猪场的阳性率较低,为47.71%。调查结果表明,北京市PRV野毒感染较为严重,对猪场采取伪狂犬病净化和综合防控措施势在必行。