四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查

为了解2012-2013年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异背景和分子流行病学情况,对PRRSV阳性病料中的Nsp2、ORF5基因进行RT-PCR扩增和序列测定,所获得的序列分别与美洲型代表株(VR2332)、欧洲型代表株(LV)、标准毒株和变异毒株进行相似性分析。结果本研究成功获得8条Nsp2基因序列和17条ORF5基因序列,序列分析表明所有PRRSV流行毒株均属于美洲型,其中8株Nsp2基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为75.2%~88.6%和94.8%~97.1%,推导的氨基酸相似性分别为58.7%~79.2%和92.8%~94.8%;17株ORF5基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为90.1%~96.6%和95.6%~99.4%,推导的氨基酸相似性为77.2%~93.0%和88.0%~96.8%;与标准毒株相比,8株Nsp2基因有30个不连续氨基酸缺失,17株ORF5基因序列有点突变。从遗传进化分析看,所有流行毒株均属于PRRSV亚群Ⅲ。     

牦牛尿嘌呤衍生物排出量对皱胃注射酵母RNA水平的响应

本研究对3头牦牛施以皱胃瘘管手术,以酵母RNA为嘌呤碱基供体,连续注射4期,以期测定牦牛吸收嘌呤的回收率,为尿嘌呤衍生物估测牦牛瘤胃微生物氮产量的模型积累数据。 结果表明,牦牛皱胃连续注射酵母RNA可使尿囊素(564～1 426 μmol/kg BW^0.75)、总嘌呤衍生物(purine derivative, PD)排出量(629～1 507 μmol/kg BW^0.75)及尿囊素占总PD比例线性提高(0.90～0.95)(P<0.01);嘌呤碱基注射水平对尿酸、肌酐及尿氮排出量影响不显著(P>0.05)。回归分析发现,牦牛皱胃嘌呤注射量(X,mmol/d)与尿嘌呤衍生物排出量(Y,mmol/d) 间存在线性关系:Y=0.85X+33.02 (R²=0.96,P<0.001),牦牛吸收嘌呤在尿中的回收率为85%。     

家蚕葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶家族基因BmGMCβ2的克隆及序列与表达分析

葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(glucose-methanol-choline oxidoreductases,GMC)家族是昆虫体内一大类以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅酶的氧化还原酶类,家蚕基因组中含有43个GMC家族基因。以家蚕5龄幼虫cDNA为模板克隆到一个家蚕GMC家族基因,命名为BmGMCβ2(GenBank登录号:JQ965926)。该基因cDNA全长1 875 bp,编码624个氨基酸,预测蛋白质分子质量为69.3 kD,pI为6.21,定位于家蚕16号染色体的nscaf3058上,编码蛋白质含GMC家族共有的ADP-bindingβ-α-β折叠结构域。系统发育分析表明该基因是家蚕GMC家族β亚家族基因成员。RT-PCR检测家蚕不同发育时期和5龄第3天幼虫不同组织中BmGMCβ2基因mRNA转录水平,以5龄盛食期最高,并且主要在表皮、脂肪体和气管中转录表达;Westernblotting分析BmGMCβ2蛋白主要在5龄第3天幼虫的脂肪体中表达。将BmGMCβ2克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化E.coli BL21表达菌株,IPTG诱导表达BmGMCβ2融合蛋白,通过His-亲和层析得到纯化的融合蛋白并制备多克隆抗体,为后续研究该蛋白在家蚕生长发育过程中的功能奠定了基础。     

扬子鳄大肠杆菌病的发生与防治

对人工养殖的 2 0 0 0余条扬子鳄所发生的大肠杆菌病进行治疗。结果表明 ,该病传播方式以内源性传播为主 ,在鳄体质不佳时即可爆发此病。如措施不当 ,最高发病率可达 90 %以上 ,死亡率达 30 %以上。     

肥胖基因研究进展

与肥胖有关的基因已发现很多，但ob基因是研究的重点，其表达产物Leptin的作用机制已有较深入的了解。本文主要介绍了ob基因及其产物Leptin的作用机制、生物学效应、Leptin抵抗现象，以及其它与肥胖有关的基因和蛋白。     

牛结核分枝杆菌溶血磷脂酶真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达

为了研究牛结核分枝杆菌溶血磷脂酶基因(Lip)的生物学特性及其功能,试验构建了Lip-pEGFP融合基因的真核表达载体,利用脂质体(lipofectamine2000)将其转染到Hela细胞中,用荧光显微镜检测GFP在细胞中的表达情况。结果显示,重组Lip-pEGFP载体在Hela细胞中获得了高效表达,且能够稳定传代,为进一步研究Lip的生物学功能及其在牛结核分枝杆菌中的作用奠定了基础。     

1株H5N1亚型高致病力禽流感病毒人工感染鸭的抗原定位观察

通过对鸭静脉接种或眼-鼻-口腔-泄殖腔接种禽流感病毒A/duck/Guangdong/220/2004(H5N1)后,采用免疫组织化学方法检查病毒核蛋白抗原,探讨了该病毒在组织器官中的定位与分布.结果表明,病毒核蛋白抗原主要存在于鸭的心肌细胞、肝细胞、枯否氏细胞、胰腺泡上皮细胞、肾小管上皮细胞、血管内皮细胞和血液吞噬性自细胞;在气管和支气管黏膜上皮,脑组织,肠黏膜上皮,胸腺、法氏囊、脾脏和肺脏的巨噬细胞或组织细胞以及坏死的细胞碎片中也可检查到少量病毒核蛋白抗原;而在食管、胃、睾丸、卵巢、甲状腺、肾上腺、哈德氏腺、骨骼肌等未检查到该抗原.     

鹅副粘病毒的人工感染试验

鹅副粘病毒是最新发现的,能引起各种年龄鹅发病的并致死的一种病毒。我们通过ＳＰＦ鸡胚分离的病毒尿囊液第４代,对鹅进行人工感染试验。结果表明,人工感染后,成年鹅群的发病率达到１００％,死亡率达３０％,１５日龄雏鹅感染后发病率和死亡率均达到１００％,这与自然发病鹅群的发病率和死亡率基本相同,而且人工感染后不管成年鹅还是雏鹅其临床病状和病理变化均与自然发病的鹅的病理变化相同,从而证实了该病理分离株的致病性及病原性。     

露地菊‘纽9717’的茎叶离体快繁体系

以露地菊‘纽9717’(Chrysanthemum×grandiflora ‘niu9717’)无菌苗为试验材料, 进行茎段(含腋芽)离体快繁体系和离体叶片不定芽再生体系的研究。结果表明, 最佳茎段增殖培养基为MS+6-BA 0.3 g·L-1+KT 0.5 g·L-1+NAA 0.5 g·L-1, 平均增殖系数为3.2;最佳叶片离体再生培养基为MS+6-BA 2.0 g·L-1+NAA 0.5 g·L-1, 6-BA与NAA组合更有利于愈伤组织分化, 愈伤组织诱导率为100%, 愈伤组织分化率为92.3%, 繁殖系数为8.9, 其中分裂素KT及TDZ不利于愈伤组织诱导及不定芽分化, 生长素2, 4-D能有效诱导愈伤组织, 但抑制不定芽分化;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.05 g·L-1, 生根率达100%, 平均生根数为12.08, 平均根长1.5 cm, 移栽成活率为100%, 高浓度生长素能诱导根形成但抑制根的伸长。     

转基因克隆绵羊的亲子鉴定

利用IASG上公布的绵/山羊的11个微卫星标记,鉴定转基因克隆羊与供体细胞系和代孕母羊间的亲子关系。结果表明转基因克隆羊与供体细胞系之间11个微卫星标记的基因型一致,而与代孕母羊基因型差异很大,由此确定转基因克隆羊来源于供体细胞系。