乳房炎奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及PFGE分型研究

作者针对临床及亚临床乳房炎奶牛乳汁中金黄色葡萄球菌分离株的毒素基因进行检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因分型,比较2种类型乳房炎金黄色葡萄球菌分离株的差异.无菌法采集奶样,采用国际标准方法从中分离金黄色葡萄球菌,用多重PCR方法扩增nuc基因和mecA基因以确证金黄色葡萄球菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).进一步用PCR方法检测SA的各种毒素基因(SEs、ETs、TSST 1和PVL基因等).利用限制性内切酶Sma Ⅰ对SA基因组DNA进行酶切和PFGE分析,最后利用BioNumerics软件进行聚类分析.结果:19.3％(23/119)的临床乳房炎奶样和14.8％(26/176)的亚临床乳房炎奶样确定为金黄色葡萄球菌阳性样品,分别从中分离鉴定出43株和26株金黄色葡萄球菌,其中临床乳房炎分离株中有5株为mecA基因阳性.临床乳房炎奶牛奶样中检测到SA的SEA、SEB、SED、SEJ和PVL毒素基因,检出率分别为3.8％(1株)、11.5％(3株)、19.2％(5株)、7.7％(2株)和31.2％(10株);亚临床乳房炎奶牛乳样中仅检测到SA的SEA和PVL毒力基因,检出率分别为7.0％(3株)和84.1％(37株).表明临床与亚临床乳房炎奶牛乳汁中SA菌株携带的毒素基因不一样,SEs可能是临床乳房炎菌株的重要致病基因,PVL可能是亚临床乳房炎菌株的重要致病基因.69株SA使用Sma Ⅰ酶切分型后,可分为7个大簇、50个基因型,来源相同的SA分型后大部分位于同一簇内.临床乳房炎奶牛乳汁中检测到MRSA菌株,PVL基因在亚临床乳房炎中的检出率为临床乳房炎的2.7倍.PFGE方法能较好的区分临床乳房炎和亚临床乳房炎的SA分离菌株.     

中国地方鸭遗传资源的分子评估与保护利用

论文从分子遗传学的角度对鸭的遗传资源在群体遗传多样性、群体起源、进化及构建遗传图谱等多个方面的评估进行综述,并对分子遗传标记技术在鸭遗传资源的保护利用上的应用进行概述,以期通过现代动物分子育种技术加快鸭的育种进程。     

论野生动物侵权的法律制度

野生动物的保护在近些年来备受关注,由于环境的逐渐恶劣,致使很多野生动物不得不离开原来的生长之地,从新寻找能够生存的栖息地。野生动物从曾经的远离人类,到现今的与人类争夺领地,这种现象不仅破坏了野生动物的生活轨迹,也扰乱了人类的正常生活,更直接致使野生动物的侵权案件频频发生。我国野生动物保护法于1989年开始实施。纵观这几十年来的实施状况,不难发现我国的野生动物保护法已经无法适应社会经济、生活环境的变化。如何协调保护人类的合法利益与保护野生动物之间的冲突问题日益严峻,但这一问题却是我国野生动物保护法中的一项缺失。因此,本文将着重阐述如何完善野生动物侵权的救济制度并给予合理的建议。     

曲拉通和硝酸混合溶液直接提取快速测定草鱼中铅含量

为建立快速测定草鱼中铅含量的方法,通过分析曲拉通和硝酸混合溶液浓度、提取时间、称样定容体积比例等因素的影响,以及基体改进剂的使用效果,确定了草鱼中铅元素提取测定的最佳条件。验证结果显示：采用曲拉通和硝酸混合溶液提取草鱼中铅元素方法的提取率为86.5%～95.6%,加标回收率为91.5%～95.6%,精密度均小于4.0%,检出限和定量限分别为0.011和0.032 mg/kg,满足了国家标准GB 5009.12—2017第一法石墨炉原子吸收光谱法的要求。与国家标准方法比较,本研究建立方法的样品前处理时间从4～12 h缩短至0.2 h内,酸试剂用量从湿法消解的7～12 mL减少至1～2 mL;前处理过程无需高温消解,无需其他前处理设备,避免了样品污染和待测元素损失,实现了降低分析成本以及保护环境和试验人员的目的。结果表明,该方法是一种简单、准确、绿色、快速测定草鱼中铅含量的方法,尤其适合大量样品检测。     

酶联免疫法对生鲜乳中黄曲霉毒素M1的快速检测

采用酶联免疫法（ELISA）对生鲜乳中黄曲霉毒素M₁进行检测,对比了3个不同厂家的试剂盒检测结果。结果表明,在空白样品中添加浓度为0.5、1.0、2.5 μg/kg时,试剂盒的回收率在93.5%～103.5%。不同厂家的试剂盒测定结果重复性、精确度均较好,说明酶联免疫法能够有效检测生鲜乳中黄曲霉毒素M₁。     

盐碱胁迫下碱地肤体内的有机酸积累及其草酸代谢特点

本研究对碱地肤幼苗进行盐胁迫或碱胁迫动态处理,通过分析碱地肤的有机酸含量及草酸代谢相关酶活性等指标,以探讨碱地肤的有机酸积累及草酸代谢调控机制的特点。结果表明,随着碱胁迫时间的延长,碱地肤体内草酸等7种有机酸均有所积累,草酸为主的有机酸的大量积累可能与碱胁迫(高pH)密切相关,它们可能起到离子平衡和pH调节的双重作用。碱地肤积累的草酸并非主要来源于抗坏血酸分解途径。此外,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPcase)参与催化的草酰乙酸裂解途径也不是草酸合成的主要途径。实验确定草酸合成的关键酶是乙醇酸氧化酶(GO)。草酸分解的草酸氧化酶(OxO)活性高低不是内源草酸积累量的关键因子。综上推断,碱地肤体内草酸的大量积累与其OxO分解无关,而是主要取决于其合成的GO关键酶。     

水牛卵母细胞去核方法的比较

水牛卵母细胞体外成熟22h后，分别用盲吸法、点击法和纺锤体成像系统（Spindle—View System）去核。结果，三者的去核率分别为65．1％、81．8％和95．0％，差异极显著（P〈0．01）。以水牛胎儿成纤维细胞为供体，通过核移植构建的重构胚的融合率、分裂率和囊胚发育率，在上述3种方法之间均没有显著差异（P〉0．05）。认为点击法是一种较为简单、实用和有效的去核方法。     

魏氏梭菌α毒素核酸探针的制备和应用

根据GeneBank上发表的A型魏氏梭菌α毒素基因序列,设计合成了一对特异性引物,通过PCR的方法,扩增出了大小为470 bp的α毒素基因的部分片段。应用地高辛标记法来标记该片段,制备了α毒素基因探针,该探针只与魏氏梭菌DNA发生阳性反应,与其它多种细菌DNA不发生反应;该探针在1∶1000的工作浓度下,能检出1~5pg/uL的魏氏梭菌基因组DNA。应用该探针对33株魏氏梭菌进行核酸杂交(Dot-Blotting)检测,结果表明该探针具有良好的特异性和灵敏性,可用于对魏氏梭菌的诊断检测以及流行病学调查。     

锌、铁和维生素A互作对肉仔鸡血清和肝脏抗氧化效应的影响

试验选用360只健康1日龄艾维茵肉仔鸡(公、母混养),采用2×2×3三因子析因化设计,将360只试验雏鸡随机分成12组,每组设3个重复,每个重复10只鸡。锌的添加浓度为50、100mg/kg,铁的添加浓度为30、60mg/kg,维生素A的添加浓度为1500、3000、6000IU/kg。测定了肉仔鸡血清、肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,过氧化氢酶(CAT)活性、铜锌超氧化物歧化(酶CuZn-SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,以此来研究不同水平的锌、铁、维生素A同时添加,三者在肉仔鸡血清、肝脏抗氧化功能方面的互作效应。结果表明:锌、铁与维生素A三者互作对提高肉仔鸡血清CuZn-SOD活性影响极显(著P<0.01),对提高肉仔鸡肝脏GSH-Px活性和降低MDA含量影响极显(著P<0.01)。这说明锌、铁、维生素A三者之间在肉仔鸡抗氧化方面存在协同效应。     

黄羽肉种鸡对棉籽粕、菜籽粕、禽副粉氨基酸消化率的比较研究

本试验对黄羽和爱拔益加肉种鸡在棉籽粕、菜籽粕、禽副粉3种饲料原料氨基酸消化率进行了比较研究。试验结果表明 ,经内源校正后 ,黄羽肉鸡对棉籽粕、禽副粉的总真氨基酸消化率高于爱拔益加肉鸡 ,对菜籽粕的总真氨基酸消化率和爱拔益加肉鸡十分接近。就单个饲料原料的总真氨基酸消化率而言 ,黄羽肉鸡对禽副粉的消化率最高 ,其次是菜粕和棉粕 ;爱拔益加肉鸡显示相同的规律 ;虽然爱拔益加肉鸡和黄羽肉鸡在谷氨基、酪氨酸、赖氨酸、色氨酸的内源排泄量差异达到显著水平 (P<0.05,P<0.01),两种肉鸡在内源总氨基酸排泄量之间不存在显著差异 (P<0.05)。