表达猪圆环病毒2型cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌在小鼠诱导的免疫应答分析

旨在构建表达猪圆环病毒2型（PCV2）cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌（Lactobacillus reuteri,L.reuteri）,并评价其在小鼠体内诱导的免疫应答效果。利用PCR扩增实验室分离保存的PCV2b型毒株的cap蛋白基因,以猪源L.reuteri为宿主菌,构建表达cap蛋白的重组菌株pPG-T7 g10-PPT-cap/L.reuteri,通过口服免疫BALB/c小鼠。采用间接ELISA方法测定免疫后小鼠血清中抗原特异性IgG抗体水平,粪便、鼻腔洗液、生殖道洗液、肠黏液中抗原特异性sIgA抗体水平,小鼠血清中各细胞因子水平;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平;流式细胞技术检测小鼠脾淋巴细胞中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞的水平;荧光定量PCR检测免疫后攻毒的小鼠体内器官的病毒载量。结果显示,口服免疫重组乳酸菌组小鼠血清IgG抗体水平显著高于对照组（P<0.01）;小鼠粪便、鼻腔洗液、生殖道洗液、肠黏液中sIgA抗体水平显著高于对照组（P<0.01）;小鼠血清中细胞因子水平和对照组相比,IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-12水平升高,IL-10水平降低,IFN-α无显著变化;体外孵育PCV2和小鼠脾淋巴细胞结果表明,重组乳酸菌组小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数显著高于对照组（P<0.01）;流式细胞技术检测结果显示,口服免疫重组乳酸菌组小鼠脾细胞中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞含量高于对照组;荧光定量PCR结果显示,相比于对照组,口服免疫重组乳酸菌组小鼠体内的病毒载量明显低于对照组。综上所述,本研究成功构建了表达PCV2 cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌,经口服途径免疫动物,构建的重组乳酸杆菌能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,且具有一定的免疫保护效果。     

猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆及在原核细胞中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ分两段扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株Ｅ２基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一ＢｇｌⅡ位点,将它们连接成为完整的Ｅ２基因,并克隆到ＰＵＣ１９质粒中,获得重 质粒ＰＨＣＦ２。另设计一对引物,以ＰＨＣＦ２为模板扩增出不含信号肽的Ｅ２基因,然后将其克隆到表达载体质粒ｐＢＶ２２０和ＰＥＴ＿２８ａ（＋）中,获得重组质粒ＰＢＶＥ２和ＰＥＴＥ２,用酶切,ＰＣＲ和序列分析鉴定Ｅ２基因插     

鸡痘病毒282E_4株TK基因重组载体质粒的构建

应用已克隆的鸡痘病毒（ＦＰＶ）２８２Ｅ＿４株基因组ＴＫ基因，在ＮｃｏⅠ部位引入痘苗病毒Ｐ７．５启动子和Ｐ１１启动子控制下的大肠杆菌ＬａｃＺ基因，经酶切鉴定，成功地构建了用于ＦＰＶ重组的载体质粒。与亲本毒株在鸡胚成纤维细胞内共转染，产生了表达ＬａｃＺ基因的重组鸡痘病毒。经传代筛选、纯化，重组病毒较稳定。实验结果表明，以ＴＫ基因构建的重组载体质粒可用于外源基因的重组表达研究。     

HIV－1gag基因重组痘苗病毒的构建和高效表达

Ｇａｇ蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）重要的结构蛋白，可诱导机体产生体液和细胞免疫应答。本试验将ＨＩＶ－１不同长度的长末端重复序列（ＬＴＲ）和全长的ｇａｇＯＲＦ置于痘病毒启动子控制下，经过同源重组、红细胞吸附试验筛选和间接免疫荧光试验鉴定，分离了６株重组痘苗病毒。免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和免疫酶试验检测表明，６株病毒均能表达ｇａｇ基因，其中以ｖ１６ＬＧ△２的Ｇａｇ蛋白表达量最高，占细胞裂解物上清的５．１９％，相当于１４．７μｇ／１０６细胞，接近杆状病毒的表达产量。重组蛋白主要为ｐ５５ｇａｇ蛋白前体，但也有一部分被加工，生成成熟蛋白ｐ２４ｇａｇ、ｐ１７ｇａｇ及其中间蛋白。表达的重组蛋白可形成病毒样粒子（ＶＬＰ），并可诱导小鼠产生抗Ｇａｇ蛋白抗体     

以GIS为基础的禽流感预测预警研究进展

GIS是一种对地理环境等方面数据进行储存、分析、加工和呈现的综合工具。利用GIS可以把流感病例的相关数据与气候、环境和社会等数据进行整合和分析,通过统计学或数学模型,找到影响流感发生和传播的风险因素,对流感的发生趋势进行预测和可视化预警。国内外学者利用GIS在禽流感风险因素分析和预测等方面做了大量研究,包括对人感染H7N9流感、高致病性H5亚型禽流感、野禽流感风险因素和预测的研究,不同基因型病毒分布特征的研究,兽医决策辅助应用研究等。这些研究对指导兽医流行病学研究人员将GIS更好地应用于禽流感防控具有帮助意义。     

重组伪狂犬病病毒SA215(C)株的构建及其对小鼠的免疫原性

为了研制猪2型圆环病毒（PCV2）基因工程疫苗,以伪狂犬病病毒（PRV）基因缺失疫苗株SA215为病毒载体,通过同源重组,构建了共表达PCV2ORF2基因和绿色荧光蛋白基因重组伪狂犬病病毒SA215（C）株。经PCR、Southern blotting、Western blotting等证实SA215（C）构建正确,并能表达具有活性的ORF2基因蛋白和荧光蛋白。SA215（C）在IBRS-2、ST细胞中的增殖滴度与亲本株SA215相比无显著差异,表明外源基因的插入不影响病毒增殖。用SA215（C）免疫BALB/c小鼠10周后检测免疫小鼠PCV2抗体和PRV中和抗体及细胞免疫反应。结果显示,SA215（C）诱导小鼠产生了PCV2和PRV抗体并出现PCV2的细胞免疫反应。另外,以105TCID50的SA215（C）株接种BALB/c小鼠,接种后28d再接种1次,2次接种后2周,用107TCID50PRVFa和PCV2强毒联合进行攻击,结果免疫小鼠抵抗住强毒的攻击,获得了保护;表明该毒株具有很强的免疫原性,为研制安全、有效的PCV2-PRV二价基因工程疫苗奠定了基础。     

聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离奶牛血清碱性磷酸酶同功酶及鉴定组织来源

用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离黑白花奶牛血清AKP同功酶酶谱及鉴定其组织来源。健康牛血清有5条酶带,以其泳动速率分为快(SF)、慢-1、慢-2、慢-3和慢-4(SS-1～4)。所有血清中除有主带SF和SS-1外,尚有1～3条慢带。骨只有一条泳动速率与血清主带SS-1相同的带,被认为是SS-1的来源。肝有2条泳动较快的带(LF-1和LF-2)和一条慢带LS。其中LF-1为窄的黄带,血清无对应带;LF-2与血清主带SF相对应,为SF的来源;LS为一条与SS-1相对应的浅而宽的带,为血液污染所致。小肠有3条窄的快带(IF-1～3)和一条宽的慢带(IS),慢带与比它稍快的骨带有部分重合出现于部分血清中,而3条快带未在血清出现。各种组织的AKP有不同的热稳定性。总之,血清主带SF和SS-1分别来源于肝和骨,SS-2来源于小肠,SS-3和SS-4在所分析的组织中无相应酶带。本研究较详细地描述了一种被改进的电泳方法,使其易于应用。     

Effects of formulating growing pig diet with increasing levels of wheat‐corn distillers dried grains with solubles on digestible nutrient basis on growth performance and nutrient digestibility

Formulating swine diets containing fibrous coproducts based on net energy (NE) and standardized ileal digestible amino acid (SID AA) values is recommended for optimizing pig performance. However, the effects of applying this approach to diets with increasing dietary levels of wheat‐corn‐derived distillers dried grains with soluble (wcDDGS) on pig performance have not been evaluated. Thus, 48 pigs with an average body weight [BW] of 25.5 kg were used to determine the effects of increasing wcDDGS (1:1 wheat to corn ratio) content in grower diets on performance and apparent total tract digestibility (ATTD) of energy and nutrients. Pigs were housed in pens of either 2 barrows or gilts balanced for BW and fed 4 diets within sex for 42 days. Diets were a nutrient adequate corn–barley–soybean meal‐based diet with 0%, 10%, 20% and 30% wcDDGS, and were similar in calculated NE and SID AA values. Acid insoluble ash was used as the indigestible marker. Final BW and overall average daily gain (ADG) linearly decreased (p < 0.05) and feed efficiency tended to decrease (p = 0.07) with increased dietary wcDDGS. Overall average daily feed intake was not affected (p > 0.10) by dietary treatment. The ATTD of dry matter and energy linearly decreased (p < 0.01), whereas the ATTD of neutral detergent fibre linearly increased (p < 0.01) with increasing dietary level of wcDDGS. Increasing dietary wcDDGS content did not affect (p > 0.10) ATTD of Ca and P. In conclusion, increasing dietary wcDDGS content reduced growth performance and ATTD of energy in growing pigs. Thus, the risks of high dietary wcDGGS content may not be completely alleviated by formulating growing pig diets on the basis of NE and SID AA systems.     

犬搜索兴奋性和耐力的培养

警犬搜爆作用于防爆处突和治安案件在警犬技术工作中起到越来越重要的作用。犬搜索作为搜爆训练的基础,尤其在训练初期发挥着重要的作用。提高犬搜索的兴奋性和耐力有助于以后的搜爆训练顺利开展,有助于使犬达到最佳的作业状态。     

PPARγ和PCNA在口腔鳞癌组织的表达及临床意义

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)与增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在口腔鳞癌中(oral squamous-cell carcinoma,OSCC)的表达及其生物学意义.方法 采用免疫组织化学和流式细胞术检测50例口腔鳞状细胞癌、癌旁黏膜(距瘤缘2 cm)和切缘正常黏膜(距瘤缘≥5 cm,镜下未见癌浸润)标本中PPARγ和PCNA的表达.结果 PPARγ在癌组织中的阳性表达率为68.0% (34/50),高于癌旁组织(26.0%,13/50)和正常黏膜组织(2.0%,1/50) (P ＜0.05);PCNA在癌组织中的阳性表达率为72.0% (36/50),高于癌旁组织(26.0%,13/50)和正常黏膜组织(4.0%,2/50)(P＜0.05).流式细胞术检测PPARγ在鳞癌组织中的表达为(396.56±33.39),明显高于癌旁组织(333.36±15.93)及正常口腔黏膜组织(289.28±13.80)(P＜0.05).PCNA在鳞癌组织中的表达为(543.11±41.55),明显高于癌旁组织(456.97±23.86)和正常口腔黏膜组织(409.40±40.07) (P ＜0.05).PPARγ和PCNA的表达与细胞分化程度、淋巴结转移均有相关性(PPARγ,r分别为0.497、0.392,P＜0.05;PCNA,r分别为0.324、0.561,P＜0.05),且二者在口腔鳞癌中的表达呈正相关.结论 口腔鳞癌组织中PPARγ和PCNA的表达均升高,可能与口腔鳞癌的发生、发展相关.