非洲猪瘟病毒环介导恒温扩增快速检测技术的建立及应用

本研究基于非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）vp72基因设计引物,建立了能够快速检测非洲猪瘟病毒的环介导恒温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）。将LAMP与OIE参考的PCR检测方法进行比较,并且应用LAMP对非洲猪瘟参考实验室提供的非洲猪瘟病毒17个毒株的基因组以及国内收集的50份猪的基因组、30份蜱的基因组进行检测。结果显示,本研究设计的引物具有良好的特异性和敏感性,所建立的LAMP能够成功扩增非洲猪瘟病毒17个毒株的基因组,而野外收集的猪和蜱的基因组检测均为阴性。因此,本研究所建立的方法能够用于非洲猪瘟的快速诊断以及防控。     

一种用于非洲猪瘟病毒检测的PCR方法

基于非洲猪瘟病毒(ASFV)VP72基因设计引物,建立一种检测非洲猪瘟病毒的PCR方法。应用本研究所建立的方法与OIE参考的方法进行比较,并对参考实验室提供的非洲猪瘟病毒17个分离株的基因组以及本实验室收集的野外样品进行检测。结果显示:本研究设计的引物具有良好的特异性,与猪的其他病原没有交叉反应;其敏感性与OIE参考的方法相当;所建立的PCR方法能够成功扩增非洲猪瘟病毒17个分离株的基因组,野外样品检测均为阴性。根据上述研究结果,本研究所建立的方法具有很好的应用性,能够用于非洲猪瘟疫病的诊断以及防控。     

O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准：抗体效价大于或等于1：32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1：16～1：32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95．5％,84．7％。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100％,免疫猪检出率为86．7％。     

一株新城疫病毒弱毒株的分离鉴定

于１９９６年８月从长春地区－－养鸡场分离到一株新城疫病毒,该毒株经过鸡胚传代培养,病毒形态学观察,血凝谱测定、鸡胚平均致死时间试验、鸡脑内致病指数试验、脉致病指数试验及１入毒试验等生物学特性结果表明该新城商株为弱毒株。     

猪链球菌2型疫苗效力检验的动物模型研究进展

猪链球菌病是一种重要的人兽共患病,近年该病在亚洲重新暴发。CpG寡脱氧核苷酸等佐剂以及逆向疫苗学方法、标签式突变法等一系列方法的相继出现,有利于猪链球菌特别是猪链球菌2型疫苗的研究,但因缺乏理想的动物模型来评价疫苗效力,给该病的防治增加了难度。2007年-2010年,针对猪链球菌2型对小鼠、斑马鱼、猪等模型动物的致病性,以及这些动物易感性等方面做了大量研究。论文对近年来与猪链球菌2型疫苗效力检验动物模型有关的研究进行了综述。     

应用PCR诊断隐孢子虫病

应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）建立了一种诊断人及牛等哺乳动物隐孢子虫病的方法。试验采用甘油漂浮 Ｇ３ 耐酸漏斗过滤法纯化隐孢子虫卵囊,以液氮冻融法制备模板 Ｄ Ｎ Ａ,根据隐孢子虫 １８ Ｓｒ Ｒ Ｎ Ａ 序列设计 Ｐ Ｃ Ｒ 引物建立其诊断方法。该方法特异性强,可检出鼠隐孢子虫（ Ｃｒｙｐｔｏｓｐ ｏｒｉｄｉｕｍ ｍ ｕｒｉｓ）和小球隐孢子虫（ Ｃ．ｐａｒｖｕｍ ）卵囊;敏感性高,每克粪便可检出 ４００ 个卵囊。初步应用结果表明,所建立的 Ｐ Ｃ Ｒ 方法适合于人、牛等哺乳动物隐孢子虫病的临床诊断和流行病学调查。     

蓝舌病病毒VP5蛋白的原核表达及其抗原性分析

为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的VP5重组蛋白以可溶形式表达,分子质量约为112.2 ku。利用MBP标签对重组蛋白进行纯化,并以其作为包被抗原,间接ELISA检测山羊血清样品,结果 5份羊血清P/N值均大于1,其中有1只羊检测结果 P/N值为2.396,鉴定为阳性血清,表明重组蛋白可以与VP5抗体反应,可以作为检测BTV VP5抗体的抗原,为今后进一步开展BT诊断研究奠定了基础。     

猪流行性腹泻病毒重组核蛋白作为检测抗原的初步应用

为确定猪流行性腹泻病毒（PEDV）重组N蛋白作为检测抗原的可应用性,将N基因克隆至pProHTa载体,构建重组表达载体,而后转化大肠杆菌BL21感受态细胞并诱导表达。将表达的可溶性融合蛋白经Ni^＋亲和层析柱纯化,并对其进行Western blot、dot-ELISA、间接ELISA等免疫学实验分析。结果表明,重组N蛋白具有良好的抗原性和较高的敏感性,与其他腹泻病病毒的抗血清无交叉反应。因此,猪流行性腹泻病毒重组N蛋白作为检测抗原在监测病毒感染及评价疫苗免疫效果方面具有较高的应用价值,是代替全病毒作为检测抗原的良好抗择。     

2014年-2016年广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2和ORF5基因的遗传多样性分析

为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传进化情况,对2014年-2016年来自广西各地的部分PRRSV阳性病料进行Nsp2和ORF5基因的扩增和测序分析.结果获得34个Nsp2基因序列和45个ORF5基因序列,均属于美洲型毒株.Nsp2基因间核苷酸序列的同源性为91.8％~100％,与PRRSV美洲型毒株VR-2332、CH-1a、JXA1及NADC30株核苷酸序列的同源性分别为81.3％~84.3％、88.9％~92.1％、94.3％~99.3％和73.5％~75.1％,而与PRRSV欧洲型毒株LV株核苷酸序列的同源性为51.5％~53.2％.ORF5基因间核苷酸序列的同源性为82.8％~100％,与PRRSV美洲型毒株VR-2332、CH-1a、JXA1及NADC30株核苷酸序列的同源性分别为83.7％~99.5％、85％~95％、83.8％~99.7％和83.2％~86.4％,而与PRRSV欧洲型毒株LV株核苷酸序列的同源性为62.4％~64.5％.基于Nsp2和ORF5基因推导的氨基酸序列绘制的遗传进化树中,广西地区的毒株主要分布在以JXA1为代表的Ⅳ亚群.表明当前广西PRRSV流行毒株以JXA1株为代表的高致病性美洲型毒株为主,各毒株Nsp2和ORF5基因序列存在一定的差异,尚未发现欧洲型毒株和美洲型NADC30类毒株.     

明清时期导致人口大量死亡的疫灾时空分布及灾害链研究

文中通过检索《中国基本古籍库》及《爱如生数据库·中国方志库》,搜集史料,构建导致人口大量死亡的疫灾频次与县次序列.采用最小二乘法、空间插值等方法,探讨疫灾发生的时间与空间分布特征,并通过灾害链分析疫灾发生的过程.结果表明:1)自公元1368年至1911年,导致人口大量死亡的疫灾共计发生156次,平均3.49a发生一次;...