兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立

用兔出血症病毒（RHDV）单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立RHDV抗原捕获ELISA检测方法,优化反应条件并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明,单抗最佳包被质量浓度为1mg/L,兔多抗血清最佳质量浓度为4mg/L。本方法可特异性地检测出兔肝脏病料中的RHDV,纯化病毒的最低检出量为26μg/L。对已知阳性样品的检测显示,捕获ELISA检测的病毒滴度是HA试验的3～13倍。对67份可疑病料,捕获ELISA阳性检出率为62.7%,HA试验阳性检出率为55.2%。用不同批次包被的酶标板重复检测已知样品显示出良好的重复性。本方法敏感性、特异性、稳定性良好,可应用于RHDV的快速、批量、特异检测。     

柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法

利用柞蚕微孢子虫孢子液直接免疫家兔获得柞蚕微孢子虫多克隆抗体后,分别采用双抗夹心法和竞争法制作胶体金免疫层析试纸条,建立能简便、快捷、准确诊断柞蚕微粒子病的柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法。双抗夹心法和竞争法分别是将柞蚕微孢子虫多克隆抗体与25 nm和17 nm的胶体金颗粒结合并固定在金标垫上,然后均将羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素膜上作为质控点(C),但是2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的反应模式不同:前者是以柞蚕微孢子虫多克隆抗体作为检测点(T),而后者以柞蚕微孢子虫孢壁蛋白作为检测点(T)。2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的检测时间均为10 min,检测灵敏度为0.8×107个/mL,与柞蚕血淋巴无交叉反应,特异性强,操作简单,其中,以双抗夹心法制作的试纸条显色更清晰,结果更可靠,更具实用价值。     

非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。     

鸡传染性支气管炎病毒海南分离株S1基因高变区的遗传变异分析

采取RT-PCR方法对7个鸡传染性支气管炎病毒海南分离株的S1基因进行序列扩增、测定及分析,应用DNAStar软件将这些分离毒株与我国常用疫苗毒株、国际上其它血清型的代表参考毒株分别进行核苷酸和氨基酸系统发生进化关系分析.核苷酸与氨基酸序列分析的结果都表明:这7个分离毒株与CK/CH/LNM/05毒株的亲缘关系比较近,与疫苗株H120和Ma5的亲缘关系比较远.     

抗蓝舌病病毒VP7和NS2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为建立蓝舌病病毒(BTV)的检测方法和研究该病毒蛋白的功能,本研究利用BTV血清8型(BTV8)免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合,制备单克隆抗体(MAb).并以BTV8作为包被抗原建立间接ELISA方法,经筛选获得了8株稳定分泌抗BTV8 MAb的杂交瘤细胞株(1B2、1F6、2B1、2D10、3B6、3D9、4D4和4D12).Western blot结果显示,MAb 1F6、2B1、2D10、3B6、3D9与BTV8 VP7蛋白反应,MAb B2、4D4、4D12与BTV8 NS2蛋白反应.间接免疫荧光结果显示,该8株MAb与24型BTV血清型呈不同的反应论系.本研究所获得的MAb为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究提供了实验依据.     

禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展

禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,ALV-J)几种免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大。另外,REV可以整合到MDV和鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)基因组中,从而导致商品化疫苗受到污染,并可用做将外源基因插入到鸡和哺乳动物细胞内的表达载体;基于REV传统检测方法的基础上,新型的分子生物学检测技术如PCR、实时荧光PCR、LAMP提高了诊断REV的敏感性和特异性。     

RIG-Ⅰ样受体信号传导通路与调控机制研究进展

视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)为RLRs受体家族的成员,是比较关键的细胞质内病原体识别受体,可识别细胞内的单链、双链等RNA病毒成分,被激活的RIG-Ⅰ受体及其CARD在TRIM25的作用下连接泛素链使其寡聚化,通过与线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)相互作用,激活MAVS及下游转录因子IRF3和NF-κB,从而诱导Ⅰ型干扰素和炎性因子的表达,最终介导宿主的抗病毒免疫应答。鉴于RIG-Ⅰ持续激活可导致炎性因子对自身细胞的损伤,因此RIG-Ⅰ样受体信号通路受到宿主严格的调控。而某些病毒为逃避宿主细胞的免疫应答,进化出多种机制靶向调节RIG-Ⅰ及MAVS,从而阻断信号通路。论文从RIG-Ⅰ识别病毒机制、激活下游信号传导、宿主细胞对信号传导途径的调控以及病毒逃避机制等方面重点阐述RIG-Ⅰ所介导的天然免疫反应。     

接种猪肺炎支原体疫苗后抗体水平变化规律的研究

为探讨免疫接种5种猪肺炎支原体疫苗后血清抗体的变化规律,选用120头健康仔猪作为实验动物,随机分成A、B、C、D、E5个试验组和1个对照组,每组20头猪。在7日龄和21日龄左右,按照各个疫苗厂商提供的最佳免疫程序,对试验组的仔猪进行免疫接种,对照组的仔猪颈部肌肉注射2.0mL生理盐水。分别于20、50、80、140日龄采血分离血清,并用ELISA方法检测血清中的猪肺炎支原体抗体水平。结果表明,不同疫苗免疫接种试验猪后抗体产生不同。20日龄时,各试验组抗体水平差异不显著(P>0.05),且抗体阳性率不高;50日龄时,抗体阳性率明显升高,A、C两组产生的抗体水平极显著高于B、D组及对照组(P<0.01),E组极显著高于D组及对照组(P<0.01),B组显著高于D组及对照组(0.01相似文献   

基于CiteSpace的草地鼠害研究现状及热点分析

草地鼠害严重威胁草地生态安全。中国在草地鼠害研究领域做了大量的工作,发表了大量学术论文。本研究通过文献计量方法,统计了1977—2021年中国草地鼠害研究领域Web of Science(WOS)和中国知网(China National Knowledge Infrastructure, CNKI)数据库收录论文的数量、被引情况、H指数等指标,同时利用CiteSpace对论文的研究力量和研究热点等进行分析。结果表明：1977—2021年,中国草地鼠害研究领域共发表1 140篇文章,其中CNKI发文584篇,WOS发文556篇,且整体上逐年增加;中国科学院和兰州大学在草地鼠害研究中处主导地位,但不同的研究机构、不同的作者之间联系不够紧密;研究对象集中于高原鼠兔(Ochotona curzoniae)和高原鼢鼠(Myospalax baileyi),研究地点集中于青藏高原和高寒草甸,研究方向以种群密度、多样性和土壤有机碳为主。     

稻/草-鹅农牧结合模式的综合效益及种养技术初探

1997－1999年在江苏省常熟市构建稻／牧草－鹅复合系统，并进行田间试验，结果表明，稻／草－鹅农牧结合模式与传统的稻／麦生产模式相比，不但具有明显的社会效益，经济效益，而且能显著提高土壤肥力，有效控制冬季田间杂草，进而大幅度降低田间除草剂，杀虫剂施用量，保护农田生态环境，总结了该模式的种养式技术，并提出了该模式的发展策略。