鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的分离与鉴定

从山西各地区疑似鸡传染性支气管炎(IB)的病料中,分离到5株鸡传染性支气管炎病毒(IBV)分离株,并对分离病毒进行了病毒形态观察、对鸡新城疫病毒(NDV)的干扰、鸡胚致病性试验、动物回归试验、血凝特性试验、病毒理化特性测定等生物特性鉴定及IBV N基因特异性片段的检测.电镜观察,可见直径为60～120 am,有囊膜及纤突呈冠状排列的病毒粒子;对NDV有明显的干扰作用;分离株的传代物均有明显的致鸡胚矮小化作用;动物回归感染死亡鸡肾脏病变明显,表现肾脏肿大、花斑肾现象,输尿管内充塞大量尿酸盐;无直接血凝性,经1%胰酶处理后可凝集鸡红细胞;分离株对乙醚和氯仿敏感;采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对分离毒株进行扩增,结果均扩增出特异N基因核酸片段.     

山羊子宫内膜基质细胞永生化研究

将真核表达质粒pCI-neo-hTERT通过DNA转染技术导入山羊子宫内膜基质细胞(ESCs),筛选稳定转染的细胞克隆,进行表型鉴定、生长特性及E2、P4等性腺激素的反应性测定.结果,传至2代的山羊ESCs经转染pCI-neo-hTERT,G418筛选2～3周后,抗性克隆形成,滤纸片法转移,扩增并连续培养,共获得5个细胞克隆,扩大培养后的细胞呈典型的长梭形和三角形,相互平行排列成束,与原代培养形态一致.转染后细胞有较高的端粒酶活性,细胞增殖加速,传代时间缩短,传至50代仍稳定增殖.波形蛋白枪测阳性,角蛋白检测阴性,具有转染前山羊子宫内膜基质细胞特性.雌激素(100 nmol·L-1)和少量孕激素(10 nmol·L-1)对转染后基质细胞增殖有促进作用.获得了永生化的ESCs,为子宫内膜细胞体外研究奠定了基础.     

活性氧对仔猪睾丸支持细胞微丝的影响

为阐明活性氧(ROS)对睾丸支持细胞(SC)的影响,并深入探讨精子发生调节机制,通过体外培养的仔猪睾丸支持细胞研究ROS对SC中微丝结构的影响.利用H2O2模拟细胞内的ROS环境,使用细胞松弛素B(CytB)破坏细胞中的微丝并利用维生素E(VE)抑制细胞内的ROS,通过细胞活性检测、免疫荧光、酶活检测、免疫印迹等方法检测ROS对睾丸支持细胞微丝的影响.结果表明,H2O2和细胞松弛素B均能提高SC内ROS的水平和细胞外信号调节激酶(ERK)的活性,降低抗氧化酶的活性,破坏细胞内微丝的结构和分布,二者具有协同作用,VE能降低ROS对SC的作用.上述证明,H2O2通过不依赖于微丝途径和降低细胞内抗氧化能力使细胞内ROS处于较高水平,并通过ERK级联,使细胞中微丝发生多聚化,破坏微丝的结构.     

食品动物源沙门菌aac(6')-Ib-cr基因检测

为检测质粒介导的喹诺酮类耐药性aac(6')-Ib-cr基因在食品动物源沙门菌的分布状况.采用PCR结合BstC1酶切法,以及DNA测序法检测316株食品动物源沙门菌中aac(6')-Ib-cr基因;微量肉汤稀释法检测aac(6’)-Ib-cr阳性和阴性菌株对10种抗菌药物的耐药性;采用PFGE分析阳性菌株的亲缘关系.结果是aac(6')-Ib-cr基因检出率15.82％(50/316);aac(6')-Ib-cr阳性株对氨基糖苷类耐药率高于阴性株,但对环丙沙星、恩诺沙星和氧氟沙星的耐药率低于阴性株;aac(6’)-Ib-cr阳性菌株具有不同的PFGE谱型.结论:aac(6’)-Ib-cr基因在本次检测的食品动物源沙门菌中普遍存在,以水平和垂直传播方式在菌群间传播.     

可可西里地区的藏棕熊与其面临的潜在威胁

通过采用样线调查法,对可可西里部分地区藏棕熊进行了调查,并对观察到的藏棕熊数量和活动痕迹进行了记录和分析,对人类在可可西里地区的有害活动进行了评价,指出了藏棕能面临的威胁并提出了保护该地区藏棕熊的一些建议.     

应用致敏SPA菌体提高CAV/CPV PCR检出率的研究

为消除粪便等病料中的PCR干扰物质 ,提高犬腺病毒与细小病毒 (CAV CPV)联合PCR检出率。根据免疫吸附的原理 ,应用CAV CPV高免血清致敏含A蛋白的金黄色葡萄球菌 ,制成致敏SPA菌体免疫吸附剂 ;以此免疫吸附提取粪便等病料中的CAV/CPV ,然后直接或经 3 5mol/LMgCl2 将所吸附病毒洗脱后再做PCR。结果 8份经电镜负染或HA/HI试验验证为阳性的粪便样品 ,如此处理后进行PCR检测 ,结果均为阳性 ;而直接取粪便离心后用上清进行PCR检测 ,结果均为阴性。表明该法可有效去除待检样品中的PCR干扰物质 ,提高PCR的检出率。     

1～21日龄黄羽肉鸡棉籽粕傅里叶近红外及化学成分净能预测模型研究

本试验在用比较屠宰法实测25个棉籽粕样品净能(NE)值的基础上,旨在研究用傅里叶近红外( NIRS)和化学成分2种方法建立的NE预测模型的可行性,并比较2种预测模型的预测效果.1)棉籽粕NE值的测定采用维持NE (NEm)+沉积NE(NEp)的方法.其中NEm用回归法测定,设自由采食及限饲20％、40％、60％和80％...     

17β-雌二醇对AC细胞活性、细胞周期和超微结构的影响

通过免疫荧光获得雌激素α、β受体在体外星形胶质细胞（Acrocyte,AC）中表达的形态学证据;CCK-8法获得脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）激发AC的适宜浓度。在此基础上,研究了17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）对AC的细胞活性、细胞周期和超微结构的影响。结果显示：E2作用AC 48h,10nmol/L E2可提高AC细胞活性和G2＋S%（P〈0.05）,而100,1 000nmol/L E2可降低AC细胞活性（P〈0.05）,100nmol/L E2还可降低G2＋S%（P〈0.05）;100nmol/L E2作用AC 24,48,72h,均可降低AC细胞活性和G2＋S%,以作用48h时抑制作用最强（P〈0.05）;10nmol/L E2可引起AC线粒体数量增加,细胞核分裂增多,但线粒体、粗面内质网结构正常,而100nmol/L E2可导致AC线粒体肿胀或空泡化,粗面内质网扩张或断裂。结果表明,低浓度（10nmol/L）E2促进AC增殖;高浓度（100,1 000nmol/L）E2抑制AC增殖。     

TTMV间接ELISA检测方法的建立

以TTMV重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了检测人TTMV血清抗体的间接ELISA方法,结果显示：抗原最佳包被浓度为1．63μg／mL,37℃孵育1h后4℃过夜;血清稀释度为1：320;酶标二抗孵育时间为37℃60min;ELISA酶标板的临界值为0．211。运用该方法对上海市和辽宁省共计280份血清样品进行检测,阳性检出率分别为34．68％和39．74％。检测结果表明,建立的间接ELISA方法特异性与重复性均较好,为进一步完善TTMV临床诊断方法打下了基础。     

环介导等温扩增技术快速检测猪细小病毒的试验

利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP),建立了一种灵敏、特异、快速的猪细小病毒(PPV)检测方法.该方法针对猪细小病毒非结构蛋白(NS-1)基因保守区域设计6条特异引物,在63℃的等温条件下45 min即可完成反应.最低检测限量为10拷贝的PPV目的基因,比常规聚合酶链式反应(PCR)方法敏感100倍,并具有良好的特异性.以钙黄绿素和Mn2+作为荧光指示剂,可快速、直观判定反应结果.通过对149份临床样品进行检测比较,LAMP与PCR检出阳性样本数分别为33份和27份,表明LAMP方法阳性检出率高于PCR.