苏子降气汤对哮喘豚鼠引喘潜伏期及其行为学评分的影响

为观察和比较苏子降气汤对卵白蛋白(OVA)致敏豚鼠哮喘模型的治疗作用,随机将50只豚鼠分为5组,空白组、模型组、苏子降气汤高剂量组、苏子降气汤低剂量组、地塞米松组,每组10只.除空白组外,其余4组均用卵白蛋白致敏法制备哮喘豚鼠模型,造模成功后,用苏子降气汤或地塞米松治疗;第13天给药2h后,将各组豚鼠用雾化器予以1 g/L的OVA诱喘,记录各组豚鼠的“引喘潜伏期”、“行为学评分”以及“停止雾化诱喘后豚鼠从哮喘状态恢复到正常状态所需的时间”,连续诱喘3d并记录相关数据.结果显示,模型组和空白组相比,地塞米松组、苏子降气汤高、低剂量组均可不同程度延长豚鼠引喘潜伏期、降低其行为学评分、缩短停止雾化诱喘后豚鼠从哮喘状态恢复到正常状态所需的时间,具有显著性差异(P＜0.01),且苏子降气汤高、低剂量组上述效果接近地基米松组.说明苏子降气汤的确能够延迟哮喘的发作时间,并能减轻哮喘豚鼠发病的症状,提示苏子降气汤确实有良好的治疗哮喘作用.     

8株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异分析

本研究拟初步了解中原地区近期猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况。对2011—2012年间从河南及周边省份发病猪场分离的8株PRRSV毒株Nsp2基因变异区进行RT-PCR扩增,同时对主要结构蛋白GP5基因进行克隆测序并与GenBank中登录的中国历年来流行的PRRSV代表毒株的GP5蛋白序列进行遗传进化分析,对主要氨基酸基序进行比对分析。结果表明,2011—2012年在中原地区分离的8株PRRSV分离株均为Nsp2缺失变异株,GP5基因与2006年中国高致病PRRSV代表毒株JXA1同源性较高。     

表达猪圆环病毒2型cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌在小鼠诱导的免疫应答分析

旨在构建表达猪圆环病毒2型（PCV2）cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌（Lactobacillus reuteri,L.reuteri）,并评价其在小鼠体内诱导的免疫应答效果。利用PCR扩增实验室分离保存的PCV2b型毒株的cap蛋白基因,以猪源L.reuteri为宿主菌,构建表达cap蛋白的重组菌株pPG-T7 g10-PPT-cap/L.reuteri,通过口服免疫BALB/c小鼠。采用间接ELISA方法测定免疫后小鼠血清中抗原特异性IgG抗体水平,粪便、鼻腔洗液、生殖道洗液、肠黏液中抗原特异性sIgA抗体水平,小鼠血清中各细胞因子水平;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平;流式细胞技术检测小鼠脾淋巴细胞中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞的水平;荧光定量PCR检测免疫后攻毒的小鼠体内器官的病毒载量。结果显示,口服免疫重组乳酸菌组小鼠血清IgG抗体水平显著高于对照组（P<0.01）;小鼠粪便、鼻腔洗液、生殖道洗液、肠黏液中sIgA抗体水平显著高于对照组（P<0.01）;小鼠血清中细胞因子水平和对照组相比,IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-12水平升高,IL-10水平降低,IFN-α无显著变化;体外孵育PCV2和小鼠脾淋巴细胞结果表明,重组乳酸菌组小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数显著高于对照组（P<0.01）;流式细胞技术检测结果显示,口服免疫重组乳酸菌组小鼠脾细胞中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞含量高于对照组;荧光定量PCR结果显示,相比于对照组,口服免疫重组乳酸菌组小鼠体内的病毒载量明显低于对照组。综上所述,本研究成功构建了表达PCV2 cap蛋白的重组罗伊氏乳酸杆菌,经口服途径免疫动物,构建的重组乳酸杆菌能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,且具有一定的免疫保护效果。     

内蒙古自治区畜禽养殖粪污资源化利用的对策与建议

畜牧产业是内蒙古自治区的支柱产业之一,随着畜牧业快速发展,畜禽粪污产量持续增加,导致粪污污染日益严重,因此,畜禽养殖粪污资源化利用显得尤为迫切和重要。调研了内蒙古自治区11个旗（县、区）、95户大中型规模化养殖企业,并通过文献查阅及专家咨询等方式调研了3 700户规模化养殖企业,从内蒙古自治区畜禽粪污的基本特征、畜禽粪污资源化利用主要特征和对策与建议方面分析了自治区畜禽养殖粪污及资源化利用的情况。     

不同腐熟剂接种下肉牛粪污腐熟进程的比较研究

通过肉牛粪污好氧堆肥发酵,对接种不同腐熟剂与空白处理堆肥过程进行物理化性质分析比较,研究不同腐熟剂接种对堆肥过程的影响。结果表明：向堆肥物料中添加腐熟剂可加快堆肥升温速度,提高水分散失率、有机质降解速率,加快粪污腐熟进程,缩短堆肥周期;自主研发腐熟剂和市售腐熟剂堆肥效果相似,项目组自主研发腐熟剂具有加速肉牛粪污腐熟进程的功效。     

非洲马瘟病毒VP7基因拼接、表达及重组ELISA方法的建立与初步应用

采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒（AHSV）含有绝大多数线性抗原表位的VP7编码基因片段,克隆于pET-30a构建重组质粒pET-30a-VP7,将pET-30a—VP7转化BL21（DE3）,经1．0mmol／LIPTG诱导,外源基因以包涵体的形式获得高效表达。通过Dot-EuSA以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测AHSV抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被浓度为0．25μg／mL,血清的最佳稀释度为1：40,待检血清阳性临界值初步定为0．25。用此方法和商品化ELISA试剂盒检测了184份血清样品,结果完全符合。     

猪日本脑炎DNA疫苗的构建与鉴定

为开发猪日本脑炎新型疫苗,采用PCR方法扩增日本脑炎病毒WHe株prME和NS1基因,并将其分别克隆至DNA疫苗载体pVAX1,分别用酶切和测序分析进行鉴定。结果表明prME和NS1基因大小分别为2.1kb和1.1kb,酶切和测序结果表明,猪日本脑炎DNA疫苗pVAX1-prME和pVAX1-NS1构建成功,为进一步免疫试验奠定了基础。     

CIDR与GnRH诱导同期发情效果比较

[目的]为了观察CIDR与GnRH诱导同期发情的效果。[方法]本实验利用GnRH＋PG＋GnRH和CIDR＋EB＋P4＋PG对荷斯坦奶牛进行同期发情。CIDR组：在奶牛发情周期的任意一天（发情当天除外）,于奶牛阴道内放CIDR同时肌注2mgEB和50mgP4,人为诱导卵泡的发生,在放入CIDR的第8d肌注PG;应用GnRH组与CIDR组同步进行同期发情处理：肌注GnRH7d后肌注PG,2d后再次肌注GnRH。[结果]表明：利用CIDR与Gn—RH两种同期方法同期发情率、情期受胎率差异均不显著。[结论]在实际生产中,GnRH便于操作,且发情略高于CIDR组。     

乳酸菌融合表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白与大肠杆菌LTB及其诱导免疫应答的研究

为研究传染性法氏囊病毒(IBDV)保护性抗原VP2与E.coli不耐热肠毒素B亚单位(LTB)在戊糖乳杆菌(L.pentosus)中的共表达及其免疫原性,本研究以乳酸杆菌表面表达型和分泌表达型质粒pPG-1和pPG-2为载体,以VP2为目的基因,构建VP2基因单独表达及与LTB基因融合表达的4种重组L.pentosus,分别命名为pPG-1-VP2/L.pentosus、pPG-1-VP2-LTB/L.pentosus、pPG-2-VP2/L.pentosus及pPG-2-VP2-LTB/L.pentosus。表达的重组蛋白分子量大小分别约为47 ku、55 ku、45 ku及53ku。将构建的重组L.pentosus分别口服免疫SPF雏鸡,以IDEXX试剂盒测定体液免疫应答水平,结果显示,不同表达方式的重组L.pentosus均可以刺激机体产生特异性循环抗体和分泌抗体(sIgA),其中pPG-2-VP2-LTB/L.pentosus诱导产生的抗体滴度高于其它组。MTT法检测不同表达方式的重组乳酸菌免疫雏鸡外周血淋巴细胞增殖反应,结果显示特异性抗原对免疫雏鸡淋巴细胞的增殖指数显著高于未免疫组,表明重组菌能够刺激机体产生特异性细胞免疫应答。这些结果表明4种重组菌均能够刺激机体产生局部黏膜免疫和全身系统免疫应答;并且带有黏膜免疫佐剂LTB融合表达试验组高于VP2蛋白单独表达组。     

左旋咪唑对鸡传染性法氏囊病疫苗免疫效果影响的观察

为观察左旋咪唑对鸡传染性法氏囊病疫苗免疫效果的影响，进行2个实验：试验1，饮水给予10mg／kg．d左旋咪唑，连用3d，然后进行鸡传染性法氏囊病疫苗初次免疫，免疫后14－21d，鸡血清抗IBDV抗体滴度明显降低；试验2，鸡在初次免疫后35d进行第2次免疫，且在2次免疫前先应用10mg／kg．d左旋咪唑，连用3d，免疫后鸡血清抗IBDV抗体滴度无明显变化。