云南苹果产区苹果茎沟病毒(ASGV)的发现及其分子变异

【目的】为了查明云南省苹果产区的苹果茎沟病毒病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)的侵染情况和不同来源分离物间的分子变异情况,【方法】以云南昭通、丽江、昆明、曲靖等地采集的325份苹果病毒样品为试材,采用RT-PCR技术对其是否携带ASGV进行检测,运用DNAMAN6.0、MEGA5.0对实验获得的6个分离物和GenBank上已登录的34个分离物进行序列比对分析。【结果】ASGV在云南各大苹果产区的发病率高达48%。序列比对结果显示,这些分离物的核苷酸序列相似性为87.3%～93.8%,氨基酸序列相似性为90.7%～98.7%。系统发育树显示,云南的6个分离物聚为一簇,而陕西省苹果分离物YL06与云南省分离物ZT1、TJX1亲缘关系比较近,聚为一支;ASGV苹果分离物要明显区别于ASGV梨分离物和CTLV柑橘分离物。【结论】云南省苹果产区苹果树的ASGV带毒率高达48%,推测可能是一种发生率比较普遍的病毒病,这是云南省发现的首次报道。系统发育树显示:本研究获得的6个苹果分离物明显区别于其他寄主分离物,并且与其他地区的分离物具有一定差异,推测在我国,ASGV的分子变异与寄主/地域来源存在着一定的相关性。     

新疆石竹亚科的分布系统及区系的研究

本文对新疆石竹亚科所含10属(共计77种,1变种)植物的分布、生境及系统位置作了详细的论述,并与新疆毗邻的哈萨克斯坦作了比较。通过研究指出新疆石竹亚科植物区系组成具有以下特征:(1)种类丰富;(2)属于中亚成分,其中以准噶尔—土兰成分和中亚—新疆—西西伯利亚成分占主要地位;(3)新疆石竹亚科植物区系与哈萨克斯坦近缘;(4)分化较强烈,特有成分丰富;(5)生态型组成复杂;(6)以旧世界温带分布属占主要地位;(7)南北疆分布种数悬殊;(8)单种属丰富。     

猪多杀性巴氏杆菌环介导等温扩增检测方法的建立

为建立猪多杀性巴氏杆菌(Pm)的快速检测方法,本研究以Pm的PlpB基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了Pm特异性的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法.经反应条件优化,确定反应条件为63℃,20 min.检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,灵敏度为25 cfu/mL;与大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、沙门氏菌无任何交叉反应.采用建立的LAMP方法与常规PCR方法对临床54份分离样品进行检测,检测结果为31份为阳性,23份为阴性,二者符合率为100％.该方法的建立为Pm在临床上的快速检测提供了一种新的技术手段.     

家蚕微孢子虫N.bombycis分离纯化方法的优化

对家蚕微孢子虫的分离纯化条件进行了探索。微孢子虫的分离，采用差速离心法或自然沉降法的效果均可。蔗糖平衡密度离心法的较优条件为50％－60％的蔗糖连续梯度、23000rpm离心30min,而Percoll法的最佳条件为25％、50％、75％和100％的Percoll不连续梯度、17500rpm离心20min；两种纯化方法相比较，Percoll法的效果为好。     

我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测

为了解J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及其与禽网状内皮细胞增生症病毒(REV)、马立克氏病病毒(MDV)和鸡传染性贫血病病毒(CAV)的混合感染现象,本研究从宁夏、湖北、广东、山东、辽宁、吉林、黑龙江7个省的39个蛋鸡群收集临床表现和剖检病理变化疑似禽白血病的病料样品184份,采用PCR、病毒分离和IFA检测样品中ALV-J、REV、MDV和CAV。结果表明,7个省蛋鸡场均存在ALV-J感染,病料样品阳性率为60.9%,检测鸡群阳性率为82.1%,与REV、MDV、CAV的混合感染率分别为13.6%、24.5%、22.8%,其中存在较为严重的双重感染(29.0%)和3重感染(18.8%),甚至4重感染(1.7%)。研究结果表明,我国蛋鸡群中普遍存在ALV-J感染,而且与REV、MDV、CAV混合感染严重;提示ALV-J已经可以引起蛋鸡群发病,在临床诊断和致病性研究中,应考虑到多重感染的影响。     

套式反转录—聚合酶链反应检测恙螨及鼠肺内肾综合征出血热病毒RNA

选择覆盖肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成２对引物,采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ,建立了ＲＴ－ＰＣＲ检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法,扩增产物经凝胶电泳及斑点印迹杂交证实具有特异性。结果显示,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离螨５０只组,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠肺１０００ｍｇ、５００ｍｇ组经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性;ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组,ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只和１０只组,游离螨１０只和５只组,鼠肺ＨＦＲＳＶ抗原阳性１００ｍｇ组均未见有明显扩增带。进一步用套式反转录－聚合酶链反应（ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ）检测,在ＲＴ－ＰＣＲ未测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ。结果表明ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点,可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ,为确认恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了分子生物学证据。     

Molecular cloning and functional analysis of duck Toll-like receptor 5

Toll-like receptor 5 (TLR5) is responsible for the recognition of bacterial flagellin in vertebrates. In this study, we cloned the single-exon TLR5 gene of the Maya breed of Common Shelduck (Tadorna tadorna). The TLR5 open reading frame is 2580 bp in length and encodes an 859-amino acid protein. The putative amino acid sequence of duck TLR5 consisted of a signal peptide sequence, 11 leucine-rich repeat domains, a leucine-rich repeat C-terminal domain, a transmembrane domain, and an intracellular Toll-interleukin-1 receptor domain. The duck TLR5 gene was highly expressed in the lung, bone marrow, spleen, and liver; moderately expressed in kidney, small intestine, large intestine, and brain. A plasmid expressing duck TLR5 was constructed and transfected into HEK293T cells, and expression was confirmed by indirect immunofluorescence assay. HEK293T cells transfected with duck TLR5- and NF-κB-luciferase-containing plasmids significantly responded to flagellin from Salmonella typhimurium, indicating that it is a functional TLR5 homolog.     

贵州省鸡淋巴性白血病J亚型血清学调查研究

为了解和掌握鸡淋巴白血病J亚型(ALV -J)在贵州的发生和流行的基本情况,在7个主要养殖地区的35个养鸡生产场共采集1 205份血清样本,采用ALV -J诊断试剂盒进行了ALV -J的ELISA血清学抗体检测.检测及相关流行病学调查结果表明:ALV -J亚群的平均阳性感染率为13.776％,其中肉鸡为20.050％,...     

新西兰实验兔体重及体尺增长模式

对自繁培育的普通级新西兰兔不同时期体重、体长、胸围、耳长及尾长的增长模式进行观察，结果表明：哺乳期（０～６周龄）体重及体尺增长比较缓慢，断奶后迅速增长；其中体重日均增长，０～２周龄最低，为９．２１ｇ，１２～１６周龄最高，为３７．２４ｇ；体长与耳长的日均增长，２～４周龄最高，１２～１６周龄最低；胸围及尾长的日均增长则是４～８周龄最高，１２～１６周龄最低。     

新型鸭肝炎病毒全基因组序列分析

为了解新型鸭肝炎病毒(DHV)基因组变异情况,本研究将广东地区分离到的1株,山东地区分离到的2株与1型DHV(DHV-1)无抗原交叉性的新型DHV(N-DHV)全基因组序列测定的结果进行了分析。结果表明,N-DHV基因组全长7786nt～7788nt,仅有一个ORF,其结构具有典型的微RNA病毒科病毒基因组特征。ORF编码一个2251aa的聚合蛋白,该蛋白经3Cpro切割产生3个结构蛋白(VP0、VP3、VP1)和8个非结构蛋白(2A1、2A2、2B、2C、3A、3B、3C、3D)。与其他N-DHV毒株及DHV-1的抗原性相关VP1蛋白氨基酸序列比对表明,3株病毒之间及与国内分离的N-DHVG株的同源性均在98%以上,与韩国N-DHV同源性均大于92%,与中国台湾地区N-DHV同源性为80.1%～80.9%,与DHV-1的同源性为76.9%～77.3%。3株病毒与韩国N-DHVVP1氨基酸差异位点主要集中在C-端的高变异区。依据微RNA病毒科人肠病毒属血清型分型标准,GD株、SD01株、SD02株与韩国N-DHV和G株属于同一血清型,而与DHV-1和中国台湾地区新型DHV属于不同的血清型。