牛分枝杆菌特异性PCR检测方法的建立及初步应用

根据已发表的牛分枝杆菌的pncA的基因序列，设计和合成了一对可扩增294bp目的片段的引物，建立了特异性检测牛分枝杆菌的PCR方法。对牛分枝杆菌国际参考株和国内分离株成功扩增出294bp的特异性基因片段；对人结核分枝杆菌、副结核分枝杆菌、鸟胞内分枝杆菌和草分枝杆菌DNA的PCR扩增结果均为阴性。本PCR方法检测的敏感度可达到50pg。对10份牛分枝杆菌培养阳性和10份阴性样品的DNA分别进行了PCR检测，结果10份阳性样品中有9份样品为PCR扩增阳性，阳性符合率为90％（9／10）；而10份阴性样品则PCR扩增全部为阴性，阴性符合率为100％（10／10）。本方法可做为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。     

蜂王浆中10-HDA的研究进展

对蜂王浆中10-HDA的来源、结构、性质及功能等方面的研究进展进行了介绍，并对近年来不断改进和完善的几种测定方法，如分光光度法、色谱法、酶联免疫法、气相色谱-质谱法等进行了简要分析。     

β-葡聚糖的生物学功能及在水产养殖中的应用

β-葡聚糖来源广泛,主要存在于植物和微生物细胞壁中,由葡聚糖单体构成,具有多种结构,因其侧链残基种类和数量的不同而具有多种生物学功能,如通过降低炎症相关基因表达及提高免疫因子的表达发挥调节免疫的作用;通过减少脂质的产生和吸收发挥调节脂质代谢的作用;通过提高抗氧化酶、自由基、超氧阴离子的清除活性及激活Nrf2信号通路、上调抗氧化基因的表达来增强机体的抗氧化能力,发挥抗氧化作用;通过增强缺氧耐受性及提高抗氨氮应激能力、能量代谢和抗氧化酶基因的表达等发挥抗应激作用。自抗生素禁用以来,β-葡聚糖在水产动物中的研究和应用逐渐深入,β-葡聚糖在预防水产动物疾病和减少抗生素使用等方面发挥着重要作用。在水产养殖中,β-葡聚糖可通过提高消化酶活性、改善肠道结构、优化肠道菌群及增强非特异性免疫力来提高水产动物生长性能,β-葡聚糖的联合使用比添加单一种类的免疫刺激剂具有更好的免疫效果。作者就β-葡聚糖的结构特征、生物学活性、作用机制及在水产动物中的应用进行了综述,并对β-葡聚糖今后的发展方向进行了展望,为实现水产动物生态健康养殖提供材料。     

奶牛初乳与常乳中营养成分和免疫物质的特征

初乳是奶牛产后24 h内的乳汁,为犊牛提供天然免疫和早期生长的能量来源,且初乳在医疗保健领域也具有一定的研究价值。初乳在产后一段时间内的物质成分会发生较大的变化,与常乳形成明显的差异。本文对比分析了初乳和常乳中营养物质、免疫活性物质、生长因子以及酶的含量差异,直观地展现了初乳中不同物质的变化过程,针对性地为初乳和常乳的加工制作提供思路,为特异性地开发初乳资源,提升初乳的利用率给出参考依据。     

AutoCAD制图软件在汕头林业调查规划中的应用

从已有图纸资料的扫描输入,设置绘图环境,矢量化地形图,创建图层,用GPS数据绘制小班图,面积或路程求算,绘制图签、图例,文件保存格式,打印出图等方面阐述了AutoCAD在汕头市林业调查规划设计制图中的应用方法.认为用AutoCAD制图较Photoshop精度、效率高,并能较精确地进行面积及距离的求算.     

牛支原体单克隆抗体的制备与鉴定

以牛支原体(Mycoplasma bovis)湖北分离株HB0801作为抗原免疫8周龄BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选出了6株能稳定分泌抗牛支原体的单克隆抗体细胞株,分别生产腹水并对单抗进行了纯化和特性鉴定。经亚型测定,这些单抗都属IgG类。腹水ELISA效价在1×10⁵~1.6×10⁶。ELISA特异性分析结果表明,6株单抗与临床分离的牛支原体菌株以及ATCC标准株PG45都显阳性反应,但与牛的其他常见病原菌如多杀性巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌等都显阴性反应。所有制备的单抗都与无乳支原体有交叉反应,其中两株单抗1A5和1C11只与无乳支原体有交叉反应,与其他支原体无交叉反应。经Western blotting验证,6株单抗分别识别牛支原体全菌蛋白中的不同条带,说明分别针对不同的蛋白抗原。这些牛支原体单克隆抗体为后期建立牛支原体检测方法及致病机理研究奠定了良好基础。     

Cloning,Expression of Clostridium perfringens α-toxin Gene and Preparation of its Antisera

One pair of primers had been designed and synthesized based on the α-toxin gene of Clostridium perfringens.The complete α-toxin gene fragment was amplified by polymerase chain reaction (PCR), and then was cloned into pGEM-T Easy vector to construct pGEM-T-α.Digested with EcoRⅠ and Hind Ⅲ, a fragment of 1125 bp was cloned into the expression plasmid vector pET-28a(+).The recombinant plasmid was transformed into the BL21(DE3)plys and induced by 1.0 mmol/L IPTG at 37 ℃.The expression product was found to be 46.1 ku as expected one identified by SDS-PAGE, and confirmed by Western blotting with Clostridium perfringens type A antisera, indicating similar reactivity with native α-toxin.Recombinant α-toxin protein was simultaneously found in culture supernatant, postsonic supertanant and inclusion bodies, most protein was expressed in inclusion bodies, which indicated recombinant α-toxin protein was expressed in the extracellular, periplasm and cytoplasm.Recombinant α-toxin protein in postsonic supertanant could not make mice die, indicating its non-toxicity.Toxin-antitoxin neutralization test showed that antisera of recombinant α-toxin protein were specific to α-toxin.Upon immunization of rabbit with the recombinant α-toxin protein, antisera with high antibody titer neutralizing 100 MLD toxin per 1 mL were prepared.     

新疆部分地区牛结核病PPD监测与分析

2001年-2003年对新疆部分地区（巴州、阿克苏、博州、伊犁、昌吉、塔城和石河子）牛结核病用“提纯结核茵素皮内变态反应”进行调查,调查数据用SPSS软件统计建立模型,显示2001年-2003年七地州检测牛只分别为16793,21153头和43951头,阳性率分别为0．46％,0．33％和0．57％。其中,巴州地区阳性率明显偏高。昌吉和石河子地区2001年-2002年保持一个较低的水平,2003年牛结核病的阳性率较前两年升高了1％。     

四川白三叶根瘤菌遗传多样性及系统发育研究

为阐明四川部分地区野生白三叶根瘤菌的遗传多样性及系统发育地位,对分离自四川雅安、康定、泸定、西昌、成都和乐山6个地区白三叶根瘤的69株菌进行系统研究。采用16S rDNA限制性片段长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism, RFLP)和16S rDNA基因、持家基因(recA、atpD、glnII)、结瘤基因(nodC)、固氮基因(nifH)系统发育分析的方法进行了研究。结果表明,16S rDNA PCR-RFLP中所有供试菌株产生了4种酶切图谱类型,表现出较为丰富的遗传多样性。持家基因与16S rDNA基因系统发育分析结果基本一致,9株代表菌株主要分布在α-变形菌纲(Alpha-Proteobacteria)的根瘤菌属(Rhizobium),并与豌豆根瘤菌三叶草生物型(R. leguminosarum bv. trifolii) ATCC 14480^T的亲缘关系较近。PCR可扩增出nodC和nifH基因片段,但从属于土壤杆菌属(Agrobacterium)的菌株LS1105中则扩增不出这两个基因。所有供试菌株被鉴定到了种的水平,证实了68株为白三叶根瘤菌,并通过不同采样地点菌株之间的比较,发现白三叶与根瘤菌的共生关系因地理分布不同而具有多样性,对于丰富白三叶根瘤菌资源及其开发利用具有重要意义。     

北美红杉在云南的引种成效及其造林展望

北美红杉在云南引种栽培近30年,生长发育正常,与原产地比较相近,保持了速生特性和较强的抗逆性。引进的北美红杉不同种源、不同无性系,在云南不同生态环境生长有显著差异;在幼龄期表现较好的有SYA4s、SYA6s等6个优良种源和无性系,分别适应云南省的纬度范围为北纬22°59′～26°52′,海拔高度为1300～2400m的不同海拔、不同气候带、不同生态环境。还有少数耐寒种源和无性系,在海拔3200～3500m的高寒山地也能生长。该项研究对促进北美红杉在云南发展造林将起到积极推进作用。