少孢节丛孢菌胞外几丁质酶AO-379基因克隆及其表达分析

[目的]深入了解捕食线虫性真菌几丁质酶的生物学功能,为今后以少孢节丛孢菌重组几丁质酶AO-379研发线虫病生物防控制剂打下基础.[方法]克隆少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-379基因的全长序列,利用Signal P4.1 Server、InterPro、ExPASy等在线分析软件对其进行生物信息学分析;构建重组表达载体pET32a-AO-379,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后用IPTG进行诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting检测分析表达获得的融合蛋白.[结果]少孢节丛孢菌几丁质酶AO-379基因全长1475bp,含有1个1203bp的开放阅读框(ORF),编码400个氨基酸.几丁质酶AO-379基因序列与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)几丁质酶基因序列的同源性为97.08%,其推导氨基酸的同源性为98.75%.几丁质酶A0-379属于糖苷水解酶18家族,具有SXGG和VDGFDLDFE两个催化区保守序列.其中,SLGGS位于第127~131位,为底物结合位点;VDGFDLDFE位于第173~181位,为水解酶催化活性位点.经大肠杆菌诱导表达获得的融合蛋白AO-379相对分子质量为60.0kD,且能与抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生反应.[结论]少孢节丛孢菌几丁质酶AO-379可在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白AO-379能与抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生反应,可用于研发线虫病生物防控制剂.     

四价鸡球虫苗的免疫效果研究

在实验条件下观察自主研制的四价鸡球虫苗(LCV)对平养鸡的安全性和免疫保护效果.试验设空白对照组(NC)、攻虫对ECX(PC)和免疫组(VC)3个试验组,每组30只鸡.试验结果:空白对照组、攻虫对照组和免疫组的相对增重率依次为100%、84.77%和94.97%;免疫后(免疫后攻虫前)排卵囊高峰期间(免疫后5 d～10 d),免疫组平均OPG(即每克粪便申的卵囊数)为2.70 X 104,攻虫后排卵囊高峰期间(攻虫后6 d～13 d)攻虫对照组组平均OPG为2.32 X 106,高于免疫组(2.69 X 103)(P<0.01);攻虫后各组死亡率依次为0、10%和o;3个组的ACI(抗球虫指数)分别为200,0、154.77和184.97,免疫组试验效果最佳.结果表明,LCV安全性高、免疫保护效果理想.接种该疫苗后的鸡对较大剂量攻虫具有较强的抵抗力.     

接种根瘤菌与施肥对岷山红三叶异黄酮含量的影响

通过L9(34)正交试验,研究不同根瘤菌梯度、接种方式和氮肥梯度对岷山红三叶异黄酮含量和产量的影响。结果表明,接种根瘤菌对岷山红三叶异黄酮含量和产量都有显著影响(P<0.05),以每千克岷山红三叶种子接种16g根瘤菌效果较好。接种根瘤菌的方式、氮肥梯度对岷山红三叶异黄酮含量和产量不存在显著影响,但以拌种和不施氮肥效果较好。综合根瘤菌梯度、接种方式和氮肥梯度对岷山红三叶异黄酮含量和产量的影响以A2B2C1效果最优。     

辽宁普兰店地区利木赞改良母牛体况参数调查分析

自1974年从法国引进原种利木赞牛改良当地复州牛以来,辽宁省普兰店市现已形成存栏量12万头年出栏量5万头的利木赞改良牛规模。调查发现,普兰店地区多年通过推广利木赞牛人工授精技术,母牛群的外貌和体尺指标都与利木赞原种牛相接近,而显著优于复州牛。但由于长期缺乏完善的系谱登记制度,且饲养管理水平低,使得改良牛系谱混乱,遗传潜力未得到充分发挥。因此,建议当地有关部门应当尽快建立利木赞改良牛个体身份标识系统,同时加强营养供应,为我国利木赞牛品种或专门化品系的培育打下基础,并为实施全国肉牛追溯体系提供可用的信息,以推动肉牛业的健康和可持续发展。     

猪骨调素基因多态性对产仔性状的影响

本文研究了骨调素基因对苏钟猪和二花脸猪繁殖性能的影响.93头母猪660多窝产仔数记录被用来分析骨调素基因型与总产仔数和产活仔数的关系.结果表明,二花脸猪经产总产仔数基因型158/142和170/152、168/140之间差异显著(P<0.05),产活仔数基因型158/142和170/152之间差异显著(P<0.05).苏钟猪头胎产活仔数基因型164/168和140/152、142/168、152/170之间差异显著(P<0.05),经产总产仔数基因型152/170和130/142之间差异显著(P<0.05).     

利用米糠外添GAD制备γ-氨基丁酸的工艺条件优化

以稻米加工副产品米糠为原料,采用单因素和正交实验确定了外添谷氨酸脱羧酶(GAD)制备γ-氨基丁酸(GABA)的最佳工艺条件:GAD酶用量175u/g,酶解时间2h,pH5.5,酶解温度45℃。经验证实验,在最佳工艺条件下GABA生成量为1530.7mg/100g米糠。     

发酵麸皮多糖对肉羊肉品质、肌肉氨基酸组成及肌肉抗氧化酶和肌纤维类型相关基因表达的影响

试验旨在研究发酵麸皮多糖(FWBP)对肉羊肉品质、肌肉氨基酸组成及肌肉抗氧化酶和肌纤维类型相关基因表达的影响。选用50只体重为(20.17±3.33)kg的6周龄杜泊×小尾寒羊F1代杂交羔羊,随机分为5组,每组10只。对照组(Ⅰ组)饲喂基础饲粮,试验组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组)分别饲喂在基础饲粮中添加50、100、200、400 mg/kg FWBP的试验饲粮,预试期14 d,正试期56 d。结果表明:1)Ⅱ和Ⅲ组肉羊背最长肌剪切力显著低于Ⅰ组(P<0.05)。2)Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组肉羊背最长肌中蛋氨酸(Met)含量显著高于Ⅰ组(P<0.05);Ⅳ组肉羊背最长肌中的半胱氨酸(Cys)含量显著高于Ⅰ组(P<0.05),而谷氨酸(Glu)和亮氨酸(Leu)含量显著低于Ⅰ组(P<0.05);Ⅴ组肉羊背最长肌中丝氨酸(Ser)含量显著高于Ⅰ组(P<0.05),而缬氨酸(Val)含量显著低于Ⅰ组(P<0.05)。3)各试验组肉羊背最长肌中过氧化氢酶(CAT)的mRNA相对表达量显著高于Ⅰ组(P<0.05),且Ⅲ组肉羊背最长肌中CAT的mRNA相对表达量显著高于Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组(P<0.05)。Ⅲ组肉羊背最长肌中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH⁃Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的mRNA相对表达量显著高于Ⅰ组(P<0.05)。4)Ⅲ组肉羊背最长肌中肌球蛋白重链(MyHC)Ⅰ和MyHCⅡa的mRNA相对表达量显著高于Ⅰ组(P<0.05),且MyHCⅡx的mRNA相对表达量显著低于Ⅰ组(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组肉羊背最长肌中MyHCⅡb的mRNA相对表达量显著高于Ⅰ组(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加FWBP可以降低肉羊背最长肌剪切力,改善其氨基酸组成,提高肌肉抗氧化能力,诱导Ⅱx型肌纤维向Ⅰ和Ⅱa型肌纤维的转化,且以添加100 mg/kg效果较佳。     

２，４-二叔丁基苯酚对啤酒花幼苗生长与光合特性的影响

前期对不同植龄啤酒花根系分泌物及根际土壤的化学物质进行了分离鉴定,结果发现有酚类物质的存在且２,４-二叔丁基苯酚含量较高,为了进一步证实啤酒花是否存在自毒作用,采用田间小区栽培试验,研究了不同用量［０（ＣＫ,Ａ０）,７．５（Ａ１）,１５．０（Ａ２）和２２．５ｍｍｏｌ／ｍ２（Ａ３）］２,４-二叔丁基苯酚处理对啤酒花幼苗生长及光合特性的影响。结果表明,２,４-二叔丁基苯酚用量Ａ１ 和Ａ２ 处理,啤酒花生长好,地上部、地下部、总生物量及日均光合速率均比对照高,且达到显著差异（犘＜０．０５）;２,４-二叔丁基苯酚用量Ａ３ 处理,啤酒花地上部、地下部和总生物量及光合特性均较对照降低,差异达到显著水平（犘＜０．０５）。啤酒花幼苗叶片光合速率日变化呈双峰型,最高峰出现在上午９：００左右,次高峰出现在中午１５：００左右,午间有明显的“午休“现象,与对照（Ａ０）相比,Ａ１、Ａ２、Ａ３ 三个处理的次高峰出现的时间均有推迟,且Ａ１ 和Ａ２ 处理的幼苗午休”现象不太明显,气孔因素是导致其“午休”的主要原因。     

适应无血清培养的HEK293细胞系的培育

为培育适合腺病毒增殖的无血清培养细胞系,本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(293SF),经检测293SF细胞具有稳定的支持腺病毒增殖与表达外源蛋白的能力;平均病变时间为97 h,比HEK293细胞缩短12.9%;毒价达到107.48TCID50/mL,比HEK293细胞提高43.3%;并且稳定性良好,连续传16代后293SF细胞状态与易感性未发生变化。该细胞系为腺病毒的无血清培养奠定基础。     

内质网应激介导的胰岛β细胞凋亡研究进展

胰岛β细胞具有十分发达的内质网(ER),并且对应激非常敏感。多种原因都会使ER的稳态被破坏,引起未折叠蛋白反应(UPR)以及Ca^2+稳态失衡,进一步诱发内质网应激(ERS)。适度的ERS有利于恢复其稳态,过度的ERS会导致ER功能受损,并进一步诱导胰岛β细胞凋亡,从而介导糖尿病的发生、发展。因此,对生理及病理条件引发的ERS进行分析,探讨ERS介导的胰岛β细胞凋亡,可为糖尿病的深入研究奠定理论基础。