快速鉴别诊断山羊痘病毒和羊口疮病毒二联PCR方法的建立

参照GenBmk已发表的山羊痘病毒(GPV)和羊口疮病毒(ORF)的核苷酸序列设计了两对引物,建立了一种可以快速鉴别山羊痘病毒和羊口疮病毒二重PCR方法,检测结果显示,对山羊痘病毒和羊口疮病毒可以分别扩增出413 bp和595 bp的特异性片段,经敏感性测定,最低能检测到4 pg的DNA。对广西的送检的山羊病料20份进行检测,其中7份可扩增出413 bp的山羊痘特异片段、1份可扩增出595 bp的羊口疮特异片段。该方法能在4 h内完成整个检测过程,不仅快速,而且特异强、敏感性高,很适合于快速诊断。     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散     

重庆市致病性大肠杆菌的血清型鉴定

从重庆市各地发生典型仔猪黄、白痢猪的肛拭粪样及死亡猪的心血和肝脏中分离鉴定出173株致病性大肠杆菌,用20种大肠杆菌O抗原单价血清进行了血清学鉴定。结果表明:173株分离菌有87株能定型,分属14种血清型,其中以O101(17.2%)、O8(14.9%)、O20(14.9%)、O64(11.5%)、O45(9.2%)、O149(8%)等6种为优势血清型。同一地区存在多种血清型,大多数地区有本地的优势血清型。不同地区的优势血清型有的相同,有的不同。     

RNA干扰在动物病毒病治疗上的应用

RNA干扰(RNAi)是近年来发现的由双链小RNA(siRNA)介导的以序列特异性方式诱导同源mRNA降解的新技术。由于其特异性和有效性,已被认为是一种重要的特异性基因阻断技术,在抗病毒研究中已取得很大成果。内源性RNAi机制在低等动物中的病毒免疫作用已经明确,但在高等动物病毒感染中的研究仍处于讨论阶段。因此,通过人工方法在高等动物体内建立有效的RNAi体系来抵抗病毒已成为国内外学者的研究重点之一。近来,将RNA干扰技术应用于许多病毒性疾病的治疗性研究均取得了显著的基因沉默效果,为高等动物病毒病的预防和治疗开辟了一条新途径。论文就RNAi的作用机制和其在动物病毒病治疗上的应用进行了综述。     

间接ELISA法对禽霍乱抗体的动态监测

将40只50日龄健康禽霍乱非免疫鸡随机分为四组,每组10只。用禽霍乱蜂胶佐剂灭活疫苗对各组鸡进行不同水平的免疫,同时设非免疫对照组。各组鸡间隔5-7天采血,以间接ELISA法测定血清P／N值,并确定临界值。将P／N值在2.1-4.7的13只试验鸡以一个最小致死量（相当于10个菌／ml）进行攻毒试验,同时设攻毒对照,在1周内3只对照鸡均表现感染发病并死亡,而试验鸡均健活,从而初步证明所确定的临界值是合理的。     

莱姆病螺旋体感染对蜱的4个功能基因的转录影响

为探索蜱及蜱传病的防控新策略,了解病原与媒介硬蜱相互作用的分子机制,本研究以莱姆病病原伯氏疏螺旋体感染后对长角血蜱4个功能基因的转录影响进行了研究。将不同浓度梯度的伯氏疏螺旋体显微注射到长角血蜱体内,分不同的时间段提取蜱的总RNA,反转录成cDNA后,用实时荧光定量PCR检测蜱基因的表达水平。结果显示:伯氏疏螺旋体感染对蜱半胱氨酸蛋白酶抑制剂1(HLcyst-1)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂3(HLcyst-3)、卵泡抑素(FRP)、凝血酶抑制剂(Hemalin)4个功能基因的转录均产生了显著影响,但存在时间和剂量相关性,感染后第4天显著诱导了长角血蜱HLcyst-1基因的表达,抑制了Hemalin基因表达。     

胶体金试纸条半定量检测鸡蛋中磺胺嘧啶残留

采用竞争反应模式建立了鸡蛋中磺胺嘧啶(SD)残留的胶体金试纸条半定量检测方法。该试纸条由吸样材料、玻璃纤维、硝酸纤维素膜、吸水材料组成。用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金标记SD单克隆抗体;SD竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成胶体金试纸条。该试纸条在15min内可完成对SD残留的半定量检测,读条系统判定灵敏度为5μg/L,肉眼判定检测限为10μg/L,与其他磺胺类药物无交叉反应,在鸡蛋中的回收率为71%~96.7%;用试纸条与ELISA对来自动物试验的52份鸡蛋样品进行对比检测,以10、100ng/g为cutoff值,两者阳性(大于100ng/g)符合率为100%,弱阳性(10~100ng/g)符合率为72.7%,阴性(小于10ng/g)符合率为84.2%,两者总符合率为94.2%。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。     

兔病毒性出血病病毒VP60蛋白基因研究进展

兔出血病病毒(RHDV)是引起兔病毒性出血病(RHD)的病原,严重威胁着世界养兔业的健康发展。在RHDV的感染和免疫研究方面,RHDV的衣壳蛋白VP60作为具有重要免疫原性的主要结构蛋白备受关注,论文对VP60蛋白基因的结构特征、核苷酸变异情况及在诊断方法建立和疫苗预防研究等方面进行了综述,为RHDV防控相关研究提供有用的参考资料。     

我国与周边国家H5N1亚型禽流感病毒血凝素演变分析

基于2008~2012年我国及周边国家禽流感病毒血凝素(HA)核酸在线BLAST,及MEGA5.1Bate4选取病案样本比对等方法,对我国与周边国家(地区)H5N1亚型禽流感病毒血凝素演变进行了研究。结果显示,各样本均具有与禽受体特异性结合的特性,但部分样本在对病毒受体结合特异性有影响的位点发生氨基酸替换,2010年和2011年我国家禽和人样本HA抗原表位关键位点氨基酸与参考疫苗有较大变异,部分样本与中国香港和越南野鸟样本抗原匹配较高;回顾性分析表明,我国人和家禽在面临原有病毒株感染的同时增加了感染境外来源病毒株和中国香港、青海野鸟毒株的风险,应加强对H5N1亚型禽流感病毒变异和境外毒株向我国境内传播的监测,及时研制新的疫苗以应对新毒株类型。     

猪传染性胃肠炎病毒S基因核酸疫苗免疫小鼠体液免疫功能变化的研究

本实验对TGEV S基因核酸疫苗免疫后体液免疫功能变化进行了研究,同时比较了两种核酸疫苗单独免疫小鼠后体液免疫应答的变化,证明重组核酸疫苗诱导小鼠产生体液免疫应答。