猪传染性胃肠炎病毒检测基因芯片的构建

采用PCR扩增制备TGEV的靶基因并进行纯化,对基因芯片的最佳靶基因点样质量浓度、探针质量浓度、杂交温度、杂交时间进行筛选,选择构建检测芯片的最适靶基因,进行基因芯片探针最佳标记方法试验.结果表明,质粒PCR扩增和采用异丙醇沉淀纯化的靶基因质量好,基因芯片最佳靶基因点样质量浓度为200mg/L,最佳探针质量浓度为3 000 μg/L,预杂交时间为1 h,杂交时间为3～6 h,杂交温度为48℃,以S、S3、sM、M、N、ORF7、POL等7个靶基因为构建TGEV检测芯片的最适靶基因,确定了多重PCR扩增标记TGEV探钟的最佳体系,Cy3-dCTP标记浓度为2.5 μmol/L,构建的TGEV检测芯片与标记的混合探针杂交效果好.     

猪瘟冻干活疫苗保护剂的研究（续报Ⅱ）

５批含有如前文［１］所说的冷冻保护剂的实验猪瘟疫苗,在２～８℃保存２年后,接种实验家兔,所有实验兔热型反应均达到标准,同时以常规用５％蔗糖脱脂奶为保护剂的猪瘟细胞冻干疫苗,在２～８℃保存仅１５个月后接种家兔,却未出现热型反应。在２～８℃保存１８个月的３批试验疫苗接种猪,皆能抵抗猪瘟石门系强毒的攻击。     

斑点叉尾鲴嗜麦芽寡养单胞菌的分离鉴定及系统发育分析

从发生在四川、重庆等省市的斑点叉尾妇急性流行性传染病病鱼的肝脏、肾脏内分离到1株高致病性菌株（CCF00024），人工感染健康鱼表现出与自然痛鱼相同的症状，并从中分离获得同种细菌，证实其为斑点叉尾鲴急性流行性传染病的病原菌。形态、生理生化检测表明，该菌为非发酵型直杆菌，严格需氧，革兰氏阴性，极生多鞭毛，对除麦芽糖和甘露糖以外的多种糖类不利用产酸，氧化酶阴性，DNA酶、蛋白酶、脲酶、赖氨酸脱羧酶阳性，MR、VP阴性。在以该菌16SrDNA序列（GenBank登录号AY970826）和GenBank及RDP数据库内同源性较高的细菌16SrDNA序列构建的系统发育树中，分离菌CCF00024与嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonasmaltophilia）聚在一簇，特剐是与5．maltophiliaM5—1的同源性最高，序列相似性达99．6％，结合形态和生理生化特点将其鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonasmaltophilia）。药敏试验结果表明，对磺胺甲口恶唑、磺胺异口恶唑、阿齐霉素、洛美沙星高度敏感，而对新霉素、卡那霉素、氨苄青霉素、头孢唑啉、先锋霉素V和链霉素不敏感。     

鸡精液稀释液的选择及其影响因素分析

随着现代养禽业的快速发展,禽业养殖的规模化和集约化程度越来越高.由于鸡养殖数量大、人工授精频率高、公鸡的采精量少等原因,原精液输精存在诸多缺陷.     

牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA的原核表达及免疫活性分析

为验证牛分枝杆菌外膜蛋白A是否具有免疫活性,以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ株基因组DNA为模板扩增牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA,采用DNA重组技术将此基因片段连于表达载体pGEX6p-1,构建重组质粒pGEX6p-1-ompA,并将其转化到大肠杆菌中BL21(DE3)中,IPTG诱导(终浓度为0.1mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析.用glutathione sepharose 4B纯化蛋白和Western blot分析该蛋白的免疫学活性.结果表明:pGEX6p-1-ompA以可溶形式表达,蛋白分子量大小为60 kDa,与预计大小相符,纯化的蛋白具有良好的免疫学活性.     

青藏高原不同垂穗披碱草居群营养品质季节动态比较

摘要:对青藏高原地区6个垂穗披碱草（Elymus nutans）居群8个不同生育期的可溶性糖(WSC)和粗蛋白质(CP)含量进行了测定。结果表明,居群间不同生育期WSC和CP含量存在显著差异(P<0.05),种源地来自青海共和县居群和甘肃临潭县居群WSC含量在整个生育期显著高于其他4个居群;CP含量甘肃玛曲县居群显著高于其他居群。整个生育期,WSC含量呈单峰曲线,初花至盛花期最高(P<0.05),初花期WSC含量最高为6.91%,最低为1.58%,CP含量整体表现为下降趋势,完熟期最低。不同居群间WSC和CP含量均表现出一定变异度,其变异系数变幅分别为36.47%～51.29%和4.76%～20.29%。相关性分析表明,WSC与CP含量呈显著负相关。     

J亚群禽白血病SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种能够快速、灵敏和特异地检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,本研究以ALV-J原型病毒株HPRS-103的pol基因3′端与gp85编码基因之间的保守区域(5 258 bp～5 802 bp)为检测目的片段,构建重组质粒并作为靶基因,通过对其浓度、引物浓度和退火温度的优化,建立了ALV-J SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.结果显示该方法的最低检测限度为2.36×102拷贝/μL,比普通PCR高100倍;与其他禽源病毒无交叉反应;批内和批间变异系数均小于5％.表明本研究建立的方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性.采用该方法对100只临床病鸡进行检测,ALV的检出率为44％.随机选择10只感染阳性鸡,检测病毒基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的分布与表达水平,结果表明ALV-J在各主要脏器中均有分布,但以肾脏中的病毒表达量最高.     

牛抵抗素基因的克隆及原核表达

从健康新生牛大网膜脂肪组织中提取总RNA,根据已发表的牛Resistin mRNA序列设计、合成引物,通过RT-PCR进行cDNA扩增,获得了343 bp的片段。将该片段克隆于pMD18-T载体后进行序列分析,确认PCR产物为牛Resistin cDNA。从阳性克隆中提取质粒,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,回收343 bp的目的片段,定向克隆到pGEX-6P-1表达载体中,提取质粒并再次转化到BL21(DE3)中,成功地筛选出阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出牛的Resistin基因的表达。     

对咸阳市畜禽粪便污染环境问题的初探

对咸阳地区的畜禽养殖状况,畜禽粪便的污染程度,畜禽粪便治理的现状与存在的问题,提出了治理的措施及治理后的前景,以期为政府部门在研究制定咸阳市规范时提供考虑。     

牛副结核分枝杆菌LAMP快速检测方法的建立

为建立牛副结核分枝杆菌(MAP)的快速检测方法,本研究采用环介导等温扩增(LAMP)技术,以MAP的IS900基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了MAP特异性的LAMP快速检测方法。经反应条件优化,检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,最低见测量为0.53 pg;与其他病原菌无任何交叉反应。临床样品检测与行业标准的符合率为100%。该LAMP检测方法可以用于MAP的常规检疫。