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根据已知的耐药基因序列设计出检测四环素耐药基因特异探针7条、β-内酰胺类耐药基因特异探针5条,阳性坐标探针1条,长度为18-21 bp.根据探针序列两侧的保守区域设计了耐药基因扩增引物,引物长度17-20bp.通过荧光聚合酶链式反应,从耐药菌株中获得四环素耐药基因7个,β-内酰胺类耐药基因5个.经过芯片制作过程优化试验和芯片杂交优化试验,结果表明,将探针以终浓度30 μmol/L溶于50%DMSO中,在温度为20 C、湿度为70%的条件下点印于Aldehydeslide表面.扩增出的荧光标记产物经纯化后与2×杂交液混合,再与基因芯片在42 C杂交5 h可检测到理想的杂交信号.芯片灵敏度试验结果表明,当模板拷贝数大于1×103个/μL时,可检测到较强的杂交信号.本试验最终研制出灵敏度高、特异性强的耐药基因检测芯片. 相似文献
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Feeding different dietary protein to energy ratios to Holstein heifers: effects on growth performance,blood metabolites and rumen fermentation parameters 下载免费PDF全文
L. F. Dong W. B. Zhang N. F. Zhang Y. Tu Q. Y. Diao 《Journal of animal physiology and animal nutrition》2017,101(1):30-37
Eighteen Chinese Holstein heifers average age 230 ± 14 days were allocated to 1 of 3 dietary crude protein (CP) to metabolizable energy (ME) ratios to examine the effects on growth performance, blood metabolites and rumen fermentation parameters with 90‐days experiment. Three different dietary CP:ME ratios were targeted based on the formulation of dietary CP contents of 10.85%, 12.78% and 14.63% on dry matter (DM) basis with similar ME contents (10.42 MJ/kg DM), which were categorized as low, medium and high dietary CP:ME ratios. The actual CP:ME ratios obtained in this study significantly increased from low to high CP:ME ratio groups with a value of 10.59, 11.83 and 13.38 g/MJ respectively. Elevated CP:ME ratios significantly increased CP intake (kg/day) and feed efficiency (FE) which was defined as dry matter intake as a proportion of average daily gain (ADG), whereas little difference was observed in body weight (kg), ADG (kg/day), DM intake (kg/day) and ME intake (MJ/day) among the three different CP:ME ratio groups. Increasing dietary CP to ME ratios significantly increased CP digestibility, whereas digestibility of DM and gross energy remained constant in the current experiment. Blood urea nitrogen and insulin‐like growth factor‐1 linearly increased with increasing dietary CP:ME ratios. There was significantly dietary treatment effect on rumen fermentation parameters including acetate, propionate, butyrate and total volatile fatty acids. Therefore, this study indicated that increasing dietary CP levels with similar energy content contributed to increased protein intake and its digestibility, as well as FE. Holstein heifers between 200 and 341 kg subjected to 13.38 dietary CP:ME ratio showed improved feed efficiency, nutrient digestibility, some blood metabolites and rumen fermentation characteristics for 0.90 kg/day rate of gain. 相似文献
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试验旨在表达纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2重组蛋白。利用PCR技术扩增获得大小为750 bp的NSP2 226-475位氨基酸编码序列,然后将该序列亚克隆到pET-28a(+)表达载体上,通过pET-28a(+)表达载体在大肠杆菌Rosetta-gami 2(DE3)pLys中得以表达,获得大小为29 ku的重组蛋白,对重组蛋白诱导时间进行优化,SDS-PAGE显示重组蛋白在37 ℃经1 mmol/L IPTG诱导8 h时表达量最大,免疫印迹结果证实表达的蛋白能被PRRSV阳性血清识别,具有良好的免疫原性。本研究成功表达纯化了NSP2重组蛋白,为目标蛋白作为包被抗原建立检测PRRSV血清抗体的ELISA方法奠定了基础。 相似文献
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饲粮蛋白质水平对早期断奶仔猪氮代谢的影响 总被引:9,自引:1,他引:9
选择30头28日龄断奶仔猪(平均体重4.5kg),研究饲粮粗蛋白质(CP)水平对早期断奶仔猪氮代谢的影响。结果显示:(1)饲粮CP水平分别与CP摄入量、CP表现消化率、可消化CP摄入量、未消化CP摄入量存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的正相关;(2)CP真消化率不受饲粮CP水平的影响,两者的相关关系不显著(P>0.05);(3)仔猪内源粪氮排泄量为0.22g/日,内源粪氮占干物质摄入量的比值为2.6g/kg;(4)饲粮CP水平分别与盲肠内容物中挥发性盐基氮(VBN)和氨氮(AN)含量的相关关系不显著(P>0.05),但饲粮CP水平分别与结肠内容物中VBN和AN含量存在显著(P<0.05)的正相关;(5)饲粮CP水平分别与血浆VBN和尿素氮含量存在显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)的正相关,但血浆AN含量则不受饲粮CP水平的影响,两者的相关关系不显著(P>0.05)。结果表明,随着饲粮CP水平升高,CP的真消化率不变,进入大肠的蛋白质量增加,结肠内蛋白质的腐败作用增强,血中含氮代谢产物增多。 相似文献